黃萍，葉冠男，劉偉

(長沙市第一醫(yī)院，長沙410005)

結(jié)直腸癌組織Sox-2、β-catenin蛋白表達及其意義

黃萍，葉冠男，劉偉

(長沙市第一醫(yī)院，長沙410005)

目的探討Sox-2、β-連環(huán)蛋白(β-catenin)蛋白在結(jié)直腸癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。方法100例結(jié)直腸癌患者的腫瘤組織標本為癌組織，癌旁正常結(jié)直腸組織標本為癌旁組織。采用免疫組化法觀察兩種組織標本中Sox-2、β-catenin蛋白的表達情況。分析癌組織Sox-2和β-catenin蛋白表達與結(jié)直腸癌患者臨床病理參數(shù)的關系。結(jié)果癌旁組織均未檢測到Sox-2、β-catenin蛋白表達。癌組織Sox-2蛋白陽性表達67例(67.00%)，β-catenin蛋白陽性表達63例(63.00%)。癌組織Sox-2、β-catenin蛋白陽性表達率均明顯高于癌旁組織(P均<0.05)。癌組織Sox-2陽性表達與臨床分期、T分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(P均<0.05)；β-catenin陽性表達與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和組織學分化程度有關(P均<0.05)。結(jié)論Sox-2、β-catenin蛋白表達升高可促進結(jié)直腸癌的發(fā)生及發(fā)展；檢測結(jié)直腸癌組織中Sox-2、β-catenin蛋白表達情況有助于判斷病情。

結(jié)直腸癌；Sox-2蛋白；β-連環(huán)蛋白

在歐美等發(fā)達國家，結(jié)直腸癌所導致的死亡病例位居所有惡性腫瘤的第二位[1]。近年來我國結(jié)直腸癌的發(fā)病率逐年遞增，據(jù)統(tǒng)計每年約有25萬新發(fā)病例，占全世界新發(fā)病例的18.6%[2]。結(jié)直腸癌的發(fā)病機制目前尚不清楚，大量研究表明其與遺傳、不良生活習慣、飲食密切相關，流行病學資料表明早期結(jié)直腸癌患者5年生存率高于80%，而晚期結(jié)直腸癌患者5年生存率不到50%[3]。隨著分子遺傳學的不斷發(fā)展，越來越多證據(jù)表明結(jié)直腸癌發(fā)病是一個多基因調(diào)控的過程，其中SOX基因家族B組成員轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物Sox-2蛋白和β-連環(huán)蛋白(β-catenin)在其他腫瘤中發(fā)現(xiàn)表達上調(diào)[4]，但其在結(jié)直腸癌中的表達水平及相關性研究鮮有報道。本研究觀察了結(jié)直腸癌組織中Sox-2、β-catenin蛋白的表達情況，現(xiàn)分析結(jié)果，探討Sox-2、β-catenin在結(jié)直腸癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2013年6月～2016年6月于我院行手術(shù)治療的100例結(jié)直腸癌患者，男62例、女38例，年齡45～81(66.3±16.2)歲。納入標準：①術(shù)前未接受放療或化療；②病理診斷為結(jié)直腸癌；③患者一般資料齊全。排除合并其他腫瘤者。癌灶位于直腸35例，乙狀結(jié)腸27例，升結(jié)腸24例，降結(jié)腸9例，橫結(jié)腸5例。腺癌68例，黏液癌26例，印戒細胞癌6例。美國癌癥聯(lián)合委員會/國際抗癌聯(lián)盟結(jié)直腸癌臨床分期(2010年)Ⅰ期24例，Ⅱ期28例，Ⅲ期43例，Ⅳ期5例。腫瘤分化程度：低分化22例，中分化74例，高分化4例。

1.2 結(jié)直腸組織Sox-2、β-catenin蛋白表達 取100例患者手術(shù)切除的癌組織標本以及癌旁正常組織標本(距腫瘤組織邊緣5 cm以上，且經(jīng)病理證實)，用4%甲醛固定，清洗后用石蠟包埋，5 μm厚連續(xù)切片，在60 ℃恒溫烤箱中烤1 h，室溫冷卻后標記備用。取一張切片進行HE染色，并由2名有經(jīng)驗的病理醫(yī)師分別鏡下檢查切片，核實診斷。其余切片采用免疫組化SP法染色觀察Sox-2、β-catenin蛋白表達情況。按試劑盒說明書操作。首先進行脫水處理，用3%過氧化氫滅活內(nèi)源性酶，再用EDTA抗原修復液修復抗原，PBS沖洗后滴加BSA封閉液，孵育10 min后添加一抗，4 ℃冰箱孵育18 h，添加二抗室溫孵育20 min，PBS沖洗2～3次，加二氨基聯(lián)苯胺溶液顯色10 min，蘇木素復染30 s，梯度乙醇脫水，中性樹膠封片，室溫晾干，鏡下觀察。以PBS代替一抗為陰性對照，已知陽性切片為陽性對照。Sox-2陽性染色結(jié)果為細胞核有棕黃色顆粒。β-catenin陽性染色結(jié)果為細胞質(zhì)有黃色顆粒。每張切片由2名病理醫(yī)師采用雙盲半定量積分法評定。①按細胞著色深淺程度評分：無著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，紅褐色為3分；②按陽性細胞所占比例評分，每張切片隨機計數(shù)10個視野中的陽性細胞百分比，選擇高倍鏡(400×)視野，避開邊緣組織。陽性細胞所占百分比<5%為0分，>5%～≤25%為1分，>25%～≤50%為2分，>50%為3分。上述2項得分相加得到綜合評分，綜合得分≥4分判定為陽性，否則為陰性。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件。Sox-2、β-catenin蛋白陽性表達率組間比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

癌旁組織均未檢測到Sox-2、β-catenin蛋白表達。癌組織Sox-2陽性表達67例(67.00%)，β-catenin蛋白陽性表達63例(63.00%)。癌組織Sox-2、β-catenin蛋白陽性表達率明顯高于癌旁組織(P均<0.05)。癌組織Sox-2、β-catenin表達與結(jié)直腸癌患者臨床病理參數(shù)的關系見表1。癌組織Sox-2陽性表達與結(jié)直腸癌臨床分期、T分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(P均<0.05)，與性別、年齡、腫瘤部位、分化程度無關(P均>0.05)。癌組織β-catenin陽性表達與結(jié)直腸癌臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和分化程度有關(P均<0.05)，與性別、年齡、腫瘤部位、T分期無關(P均>0.05)。

表1 結(jié)直腸癌組織Sox-2、β-catenin表達與患者臨床病理參數(shù)的關系(例)

3 討論

SOX基因是一類與發(fā)育相關的基因，最早發(fā)現(xiàn)于小鼠Y染色體上，因為編碼睪丸決定因子而被稱為Y染色體性別決定帶(SRY)，隨后在其他動物基因組中發(fā)現(xiàn)其同源基因，均具有共同的保守序列HMG-box，因而被命名為SRY相關HMG-box(SOX)[5～7]。目前認為SOX基因的作用包括參與胚胎早期發(fā)育、參與神經(jīng)發(fā)育、參與晶狀體發(fā)育。Sox-2是SOX基因家族中的一員，近年來國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)，SOX基因家族成員在胃癌、乳腺癌、前列腺癌等[8]多種腫瘤組織中異常表達。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)SOX基因其編碼產(chǎn)物Sox-2蛋白在結(jié)直腸癌組織中高表達，而在鄰近的正常結(jié)直腸組織中不表達，表明其參與了結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展過程。本研究還發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌組織中Sox-2陽性表達與結(jié)直腸癌臨床分期、浸潤深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關，表明其與結(jié)直腸癌的臨床分期和轉(zhuǎn)移能力相關，檢測結(jié)直腸癌組織Sox-2表達有助于判斷患者病情。體外細胞實驗也發(fā)現(xiàn)，Sox-2在正常的永生化細胞系中不表達，僅在具有轉(zhuǎn)移潛力的腫瘤細胞系中表達[9]，據(jù)此認為Sox-2高表達可能與腫瘤的分化、侵襲能力有關。此外還有研究發(fā)現(xiàn)，Sox-2表達與Ki-67基因呈正相關[10]，而后者被認為是檢測腫瘤細胞增殖活性的可靠指標，表明Sox-2與腫瘤的增殖、分化能力密切相關。

本研究在結(jié)直腸癌組織中同時發(fā)現(xiàn)了Sox-2蛋白和β-catenin蛋白陽性表達。β-catenin蛋白是Wnt信號通路的關鍵蛋白[11]，正常細胞中該信號通路處于關閉狀態(tài)，β-catenin與細胞膜上的E-鈣連蛋白結(jié)合而不發(fā)揮作用，信號通路激活后E-鈣連蛋白與β-catenin分離并重新在細胞膜上分布，使細胞間黏附能力減弱[12]。本研究也發(fā)現(xiàn)，結(jié)直腸癌組織β-catenin表達與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和組織學分化程度有關，證實其與腫瘤的黏附能力有關。β-catenin蛋白在胞質(zhì)中異常積累，轉(zhuǎn)移到細胞核中，進而激活Wnt通路中與腫瘤發(fā)生相關的基因，其中就包括SOX家族中的一些成員。已有研究表明，Sox-4基因編碼產(chǎn)物能夠穩(wěn)定結(jié)合β-catenin，使其在核內(nèi)異常聚集，維持Wnt信號通路的激活狀態(tài)[13～15]。本研究結(jié)果也側(cè)面提示，Sox-2基因也可能參與了Wnt信號通路的調(diào)控，并與其一起共同參與結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展。

綜上所述， Sox-2、β-catenin高表達共同參與了結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展過程。檢測結(jié)直腸癌組織中Sox-2、β-catenin蛋白表達情況有助于判斷病情。

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