高潔，李日著，朱名毅，蒙山，王居平,3

(1右江民族醫(yī)學(xué)院，廣西百色533000；2右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院；3汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院)

食管鱗癌組織MTA2、突變型p53蛋白表達(dá)變化及意義

高潔1，李日著2，朱名毅1，蒙山1，王居平1,3

(1右江民族醫(yī)學(xué)院，廣西百色533000；2右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院；3汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院)

目的觀察食管鱗癌組織腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因2(MTA2)、突變型p53蛋白表達(dá)變化，并探討其臨床意義。方法采用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)80例份食管鱗癌組織(觀察組)和30例份正常食管組織(對(duì)照組)中MTA2、突變型p53蛋白表達(dá)情況，分析食管鱗癌組織MTA2、突變型p53蛋白表達(dá)與食管鱗癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果觀察組MTA2陽(yáng)性表達(dá)率為85.0%(68/80)，突變型p53陽(yáng)性表達(dá)率為61.3%(49/80)，對(duì)照組MTA2、突變型p53蛋白均無(wú)陽(yáng)性表達(dá)。食管鱗癌組織MTA2蛋白陽(yáng)性表達(dá)與癌組織浸潤(rùn)深度、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤組織分化程度、TNM分期有關(guān)(P均<0.05)；突變型p53蛋白陽(yáng)性表達(dá)與癌組織浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均<0.05)。觀察組食管癌組織MTA2、突變型p53蛋白表達(dá)均為陽(yáng)性表達(dá)的有46例份，食管鱗癌組織中MTA2表達(dá)與突變型p53表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.313,P<0.01)。結(jié)論食管鱗癌組織中MTA2、突變型p53蛋白陽(yáng)性表達(dá)增多。檢測(cè)MTA2、突變型p53表達(dá)有助于判斷食管鱗癌浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移能力。

食管鱗癌；腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因 2蛋白；突變型p53蛋白；腫瘤浸潤(rùn)；腫瘤轉(zhuǎn)移

腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因 2(MTA2)在組織中的過(guò)度表達(dá)被證實(shí)與非小細(xì)胞肺癌[1]、胃癌[2]等有著密切聯(lián)系，且與腫瘤組織分化程度、TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等明顯相關(guān)。MTA2與突變型p53 結(jié)合后可以降低突變型p53 的乙?；?，與腫瘤的浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[3]。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)食管鱗癌中MTA2、突變型p53表達(dá)變化的研究報(bào)道較少。本研究觀察了食管鱗癌組織MTA2、突變型p53蛋白表達(dá)變化，分析食管鱗癌組織MTA2、突變型p53蛋白表達(dá)與食管鱗癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2013～2016年手術(shù)切除的80例桂西地區(qū)食管鱗癌患者腫瘤組織存檔蠟塊(觀察組)。所有患者臨床病理資料完整，術(shù)前未進(jìn)行任何針對(duì)腫瘤的特殊治療。按照美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)食管癌 TNM 分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期[4]：Ⅰ期 12 例，Ⅱ期30例，Ⅲ期26例，Ⅳ期12例；病理類(lèi)型為潰瘍型15例， 髓質(zhì)型28例，縮窄型12例，覃傘型25例；腫瘤組織分化程度為高分化20例，中分化32例，低分化28例；浸潤(rùn)未超過(guò)肌層35例，浸潤(rùn)到肌層或漿膜層45例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者38例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者42例；有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者25例，無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者55例。另取30例胃鏡檢查活檢標(biāo)本中的正常食管黏膜組織標(biāo)本作為對(duì)照組。所有標(biāo)本由兩位有經(jīng)驗(yàn)的病理醫(yī)師診斷。

1.2 MTA2、突變型p53蛋白表達(dá)檢測(cè) 采用免疫組化法。將標(biāo)本置于新鮮的二甲苯中脫蠟，用不同濃度的乙醇水化，放入裝有抗原修復(fù)液(pH值6.0的檸檬酸鹽緩沖液)的高壓鍋中進(jìn)行抗原修復(fù)15 min，冷卻至室溫。將抗原修復(fù)后的切片用蒸餾水沖洗1 min，用油筆圈定玻片上的待測(cè)組織區(qū)域，PBS沖洗3 min×2次，除去PBS，在油筆圈定的區(qū)域內(nèi)滴加內(nèi)源性過(guò)氧化物阻斷劑，室溫下孵育10 min，PBS沖洗3 min×3次，除去PBS溶液，MTA2 抗體(1∶500)/p53抗體覆蓋切片，以PBS代替一抗為陰性對(duì)照，放入4 ℃冰箱過(guò)夜。第二天用PBS沖洗2 min×3次，滴加相應(yīng)二抗，室溫下孵育15 min；PBS沖洗2 min×2次，加入新鮮配制的DAB顯色液，室溫下孵育4 min；蘇木素復(fù)染細(xì)胞核30 s，自來(lái)水沖洗，PBS沖洗返藍(lán)，快速脫水，二甲苯透明，用中性環(huán)保樹(shù)膠和蓋玻片封片，晾干后在光學(xué)顯微鏡下觀察拍照。

MTA2、突變型p53陽(yáng)性表達(dá)主要位于食管鱗癌細(xì)胞核中，以腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞核中出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒為陽(yáng)性染色，突變型p53少量在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)。每張切片隨機(jī)觀察10個(gè)視野(×40)，采用雙評(píng)分法進(jìn)行判定[5]。細(xì)胞染色程度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：不著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；陽(yáng)性細(xì)胞在觀察視野中所占比例評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)小于5%為0分，5%～<25%為1分，25%～<50%為2分，50%～<75%為3分，大于75%為4分；二者乘積≤1為陰性，否則為陽(yáng)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。組間比較采用χ2檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)性檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

觀察組MTA2陽(yáng)性表達(dá)率為85.0%(68/80)，突變型p53陽(yáng)性表達(dá)率為61.3%(49/80)，對(duì)照組MTA2、突變型p53蛋白均無(wú)陽(yáng)性表達(dá)。食管鱗癌組織MTA2、突變型p53蛋白陽(yáng)性表達(dá)與癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系見(jiàn)表1。食管鱗癌組織MTA2陽(yáng)性表達(dá)與癌組織浸潤(rùn)深度、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤組織分化程度、TNM分期密切相關(guān)(P均<0.05)，與腫瘤病理類(lèi)型、患者年齡無(wú)關(guān)(P均>0.05)。食管鱗癌組織突變型p53陽(yáng)性表達(dá)與食管鱗癌組織浸潤(rùn)深度、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均<0.05)，與患者年齡、腫瘤組織分化程度、病理類(lèi)型、TNM分期無(wú)關(guān)(P均>0.05)。觀察組食管鱗癌組織MTA2、突變型p53蛋白均為陽(yáng)性表達(dá)者46例份，食管鱗癌組織中MTA2表達(dá)與突變型p53表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.313,P<0.01)。

表1 食管鱗癌組織MTA2、突變型p53蛋白陽(yáng)性表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系(例)

3 討論

本研究結(jié)果顯示，MTA2蛋白在食管鱗癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為85%，而在正常食管黏膜組織中陰性表達(dá)，且MTA2的陽(yáng)性表達(dá)多集中在血管周?chē)湍[瘤邊緣，這與MTA2在結(jié)直腸癌中的表達(dá)類(lèi)似[6]。Zhang等[7]研究發(fā)現(xiàn)，MTA2蛋白參與組成具有核小體重塑活性的組蛋白去乙酰基酶(NuRD)的亞基。人MTA2基因位于染色體11q1213.1，主要在細(xì)胞核內(nèi)表達(dá)。相關(guān)研究表明，MTA2可以通過(guò)影響核染色質(zhì)的重塑來(lái)調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄過(guò)程，并通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡、細(xì)胞骨架和雌激素通路等途徑促進(jìn)腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移[8]。有研究發(fā)現(xiàn)，在卵巢癌和非小細(xì)胞肺癌中，低分化組MTA2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率高于中高分化組，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，臨床分期Ⅲ/Ⅳ期組高于Ⅰ/Ⅱ期組[9]。Peneil等[9]通過(guò)檢測(cè)卵巢癌細(xì)胞株中MTA2的表達(dá)結(jié)果驗(yàn)證了上述結(jié)論。由此證明MTA2蛋白表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分化程度及腫瘤的臨床分期密切相關(guān)。國(guó)外研究發(fā)現(xiàn)，MTA2表達(dá)與食管癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率均呈正相關(guān)[10]。本研究結(jié)果也證明了MTA2陽(yáng)性表達(dá)在低分化腫瘤、浸潤(rùn)到達(dá)肌層/漿膜層、有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Ⅳ期食管鱗癌組織中明顯增高，提示MTA2蛋白在食管鱗癌的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要作用。

p53是與人類(lèi)惡性腫瘤相關(guān)性最高的基因，約有一半以上的腫瘤帶有p53突變，其可分為野生型和突變型。突變型p53破壞正常細(xì)胞的代謝平衡，誘發(fā)正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化為癌細(xì)胞，癌細(xì)胞持續(xù)的失衡增殖，加速組織癌變，喪失了野生型p53原有的抑癌功能[11]。本研究結(jié)果顯示突變型p53在食管鱗癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率為61.3%，在正常食管黏膜組織中為陽(yáng)性表達(dá)，且食管鱗癌組織突變型p53陽(yáng)性表達(dá)水平與食管鱗癌浸潤(rùn)深度、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，與文獻(xiàn)[12]報(bào)道相類(lèi)似。Luo等[13]研究發(fā)現(xiàn)，有MTA2成分的組蛋白去乙酰化酶1復(fù)合體(HDAC1)能夠抑制p53蛋白，通過(guò)使p53蛋白脫去乙?；瑥亩种埔蕾?lài)突變型p53蛋白的基因轉(zhuǎn)錄激活，最終使細(xì)胞增長(zhǎng)受抑制、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

本研究結(jié)果顯示，食管鱗癌組織MTA2表達(dá)與突變型p53表達(dá)呈正相關(guān)，說(shuō)明二者在食管鱗癌發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移中存在一定的聯(lián)系?？紤]到食管鱗癌組織MTA2蛋白陽(yáng)性表達(dá)與癌組織浸潤(rùn)深度、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤組織分化程度、TNM分期有關(guān)，突變型p53蛋白陽(yáng)性表達(dá)與癌組織浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)，我們認(rèn)為檢測(cè)MTA2、突變型p53表達(dá)有助于判斷食管鱗癌浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移能力。

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國(guó)際自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81760513)；廣西高校中青年教師基礎(chǔ)能力提升項(xiàng)目(KY2016YB339，2017KY0520)；廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2014A020212288)；廣西高等學(xué)校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室科學(xué)研究開(kāi)放課題(gxzdsysyy2015208)；右江民族醫(yī)學(xué)院2014年度校級(jí)科研項(xiàng)目[右醫(yī)科字(2014)2號(hào)]；百色市科學(xué)研究與技術(shù)開(kāi)發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目(百科計(jì)20141106)；右江民族醫(yī)學(xué)院校級(jí)科研項(xiàng)目(yy2016bsky02)。

王居平(E-mail: juping0128@163.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.40.016

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B

1002-266X(2017)40-0055-03

2017-07-04)