薛宏，汪光慧，李勇，卜興江

（安徽省蕪湖市第二人民醫(yī)院 1.婦科，2.病理科，安徽 蕪湖 241000；3.安徽師范大學生命科學學院，安徽 蕪湖 241000）

宮頸癌組織中CDK8、p53、VEGF表達水平與腫瘤血管生成的關系研究

薛宏1，汪光慧1，李勇2，卜興江3

（安徽省蕪湖市第二人民醫(yī)院 1.婦科，2.病理科，安徽 蕪湖 241000；3.安徽師范大學生命科學學院，安徽 蕪湖 241000）

目的探討宮頸癌組織中細胞周期依賴性蛋白激酶8（CDK8）、p53、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）表達水平，及其與腫瘤血管生成的關系。方法收集該院收治的宮頸癌患者60例，檢測宮頸癌組織中CDK8、p53、VEGF及微血管密度（MVD），分析CDK8、p53、VEGF、MVD與宮頸癌患者主要臨床特征的關系。結(jié)果VEGF陽性患者MVD水平高于VEGF陰性患者（P＜0.05），CDK8陽性患者MVD水平高于CDK8陰性的患者（P＜0.05）。p53陽性與陰性患者MVD水平比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。與癌旁組織比較，宮頸癌組織中VEGF（+）、CDK8（+）、p53（+）及MVD水平升高（P＜0.05）。與宮頸癌國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟分期Ⅰ期患者相比，Ⅱ～Ⅳ期患者的VEGF（+）、CDK8（+）、p53（+）及MVD水平升高（P＜0.05）。與腫瘤細胞高分化患者相比，中、低分化患者的CDK8（+）水平升高（P＜0.05）。與鱗癌患者相比，腺癌患者的VEGF（+）和MVD水平升高（P＜0.05）。多元線性回歸分析顯示，VEGF和CDK8是宮頸癌組織中MVD水平的影響因素（P＜0.05）。結(jié)論宮頸癌組織中CDK8、VEGF和p53蛋白表達水平升高，促進腫瘤細胞的生長和轉(zhuǎn)移，CDK8、VEGF可能與腫瘤血管生成有關。

宮頸癌；血管內(nèi)皮生長因子；細胞周期依賴性蛋白激酶8；微血管密度；p53

每10萬女性中，有15.9～32.8例發(fā)生宮頸癌[1]，有5例因?qū)m頸癌而死亡[2]。微血管密度（microvessel density，MVD）水平升高是腫瘤患者預后不良的主要因素[3-4]。血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是血管內(nèi)皮細胞特異性的肝素結(jié)合生長因子，細胞周期依賴性蛋白激酶8（cyclin dependent kinase 8，CDK8）是蛋白質(zhì)激酶家族中的一員，p53基因是人體抑癌基因，MVD、VEGF、CDK8、p53表達異常與患者預后不良有關[5-8]。本研究探討宮頸癌組織中VEGF、CDK8及p53與腫瘤血管生成的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

前瞻性收集2015年1月-2017年1月安徽省蕪湖市第二人民醫(yī)院收治的宮頸癌患者60例。納入標準：①宮頸癌（均有術(shù)中病理確診）；②在本院接受手術(shù)治療可獲得活體組織標本；③年齡18～70歲；④腫瘤細胞類型為腺癌或鱗癌；⑤同意參與本研究。排除標準：①術(shù)前曾接受放化療、分子生物治療等特殊治療；②合并其他惡性腫瘤；③復發(fā)性宮頸癌；④既往有心肌梗死、腦卒中等重大心血管疾??；⑤肝、腎等臟器功能不全；⑥生殖系統(tǒng)結(jié)核等其他重大生殖系統(tǒng)病變；⑦不能配合本研究。研究期間，根據(jù)納入標準和排除標準，共納入宮頸癌患者60例，其中宮頸癌國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO）分期：Ⅰ期37例，Ⅱ期18例，Ⅲ期4例，Ⅳ期1例；腫瘤細胞分化程度：低分化8例，中分化22例，高分化30例；腺癌15例，鱗癌45例；體重指數(shù)18.92～31.63kg/m2，平均（23.61±3.46）kg/m2，年齡31～70歲，平均（47.82±7.28）歲。所有患者對本研究知情同意并簽署知情同意書，本研究通過醫(yī)院倫理委員會批準。

1.2 觀察指標

主要觀察指標為VEGF、CDK8、p53及MVD，同時觀察患者的主要臨床特征，包括FIGO分期、腫瘤細胞分化程度、腫瘤細胞類型及年齡。分析VEGF、CDK8、p53與MVD的相關性，同時分析VEGF、CDK8、p53、MVD與宮頸癌患者主要臨床特征的相關性。

1.3 檢測方法

收集宮頸癌組織和癌旁活體組織標本，用10%甲醛固定，用石蠟包埋、切片，用SP免疫組織化學法檢測組織中VEGF、CDK8、p53、MVD的表達（相應的單克隆抗體購自福建邁新生物技術(shù)公司）。①VEGF：胞漿及胞膜出現(xiàn)黃色染色則為陽性，無顯色為0分，淡黃色為1分，黃色為2分，棕黃色為3分；陽性細胞百分比≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分；將染色和陽性細胞百分比2項得分相加，0～1分為陰性，≥2分為陽性。②CDK8：無染色0分，輕度染色1分，中度染色2分，重度染色3分；無陽性細胞為0分，陽性細胞百分比＜10%為1分，10%～50%為2分，≥50%為3分；將染色和陽性細胞百分比2項得分相加，0～1分為陰性，≥2分為陽性。③p53：缺乏或弱染色1分，中度染色2分，強染色3分；陽性細胞百分比＜10%為1分，10%～50%為2分，＞50%為3分；將染色和陽性細胞百分比2項得分相乘，1～3分為p53陰性，＞3分為陽性。④MVD：400高倍鏡下測定18個血管密集區(qū)的微血管數(shù)，取平均值作為該患者相應組織中MVD。

1.4 統(tǒng)計學方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件，計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，用t檢驗；計數(shù)資料以率（%）表示，用χ2檢驗，影響因素的分析采用多元線性回歸模型，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 宮頸癌組織中VEGF、CDK8、p53與MVD的相關性分析

VEGF陽性與陰性患者的MVD水平比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），VEGF陽性患者高于VEGF陰性患者；CDK8陽性與CDK8陰性患者MVD水平比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），CDK8陽性患者高于CDK8陰性患者；p53陽性與陰性患者MVD水平比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表1和附圖。

表1 宮頸癌組織中VEGF、CDK8、p53表達的MVD水平比較 （%，±s）

表1 宮頸癌組織中VEGF、CDK8、p53表達的MVD水平比較 （%，±s）

組別 例數(shù) MVD t值 P值VEGF陽性 35 51.11±16.79 3.315 0.002陰性 25 36.08±18.05 CDK8陽性 30 51.13±16.17 2.738 0.008陰性 30 38.57±19.25 p53陽性 31 48.52±18.98 1.588 0.118陰性 29 40.93±17.96

2.2 宮頸癌組織和癌旁組織中VEGF、CDK8、p53及MVD表達水平比較

癌旁組織與宮頸癌組織中VEGF（+）、CDK8（+）、p53（+）及MVD水平比較，經(jīng)t或χ2檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），宮頸癌組織中VEGF（+）、CDK8（+）、p53（+）及MVD水平高于癌旁組織。見表2。

2.3 宮頸癌組織中VEGF、CDK8、p53及MVD水平與年齡的關系

年齡≥50歲與＜50歲患者的VEGF（+）、CDK8（+）、p53（+）及MVD水平比較，經(jīng)t或χ2檢驗，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表3。

2.4 宮頸癌組織中VEGF、CDK8、p53及MVD與FIGO分期的關系

與FIGO分期Ⅰ期與Ⅱ～Ⅳ期患者的VEGF（+）、CDK8（+）、p53（+）及 MVD 水平比較，經(jīng)t或 χ2檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），F(xiàn)IGO分期Ⅱ～Ⅳ期患者的 VEGF（+）、CDK8（+）、p53（+）及 MVD 水平高于Ⅰ期患者。見表4。

2.5 宮頸癌組織中VEGF、CDK8、p53及MVD水平與腫瘤細胞分化程度的關系

附圖 VEGF、CDK8、p53和MVD在宮頸癌中的表達 （免疫組織化學法×400）

腫瘤細胞高分化與中、低分化患者的CDK8（+）比例比較，經(jīng)χ2檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），腫瘤細胞中、低分化患者的CDK8（+）比例高于高分化患者。腫瘤細胞高分化與中、低分化患者的VEGF（+）、p53（+）及 MVD 水平比較，經(jīng)t或 χ2檢驗，差異無統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表5。

表2 宮頸癌組織和癌旁組織中VEGF、CDK8、p53及MVD表達水平比較 （n =60）

2.6 宮頸癌組織中VEGF、CDK8、p53及MVD水平與腫瘤細胞類型關系

鱗癌與腺癌患者的VEGF（+）和MVD水平比較，經(jīng)χ2檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），腺癌高于鱗癌。鱗癌與腺癌患者的CDK8（+）和p53（+）比例比較，經(jīng)χ2檢驗，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表6。

2.7 宮頸癌組織中MVD水平的影響因素分析

多元線性回歸分析因變量為MVD，自變量為VEGF、CDK8和P53，逐步回歸結(jié)果顯示，VEGF和CDK8是宮頸癌組織中MVD水平的影響因素（P＜0.05）。p53對宮頸癌組織中MVD水平無明顯影響（P＞0.05）。見表 7。

表3 年齡與宮頸癌組織中VEGF、CDK8、p53及MVD水平的關系

表4 FIGO分期與宮頸癌組織中VEGF、CDK8、p53及MVD水平的關系

表5 腫瘤細胞分化程度與宮頸癌組織中VEGF、CDK8、p53及MVD水平的關系

表6 腫瘤細胞類型與宮頸癌組織中VEGF、CDK8、p53及MVD水平關系

表7 宮頸癌組織中MVD的影響因素分析

3 討論

宮頸癌為實體瘤，由腫瘤細胞和間質(zhì)構(gòu)成，間質(zhì)包含血管、淋巴管和結(jié)締組織等，其中腫瘤血管起營養(yǎng)和支持腫瘤細胞的作用，腫瘤的新生血管在腫瘤的生長和擴散中具有重要意義[9-11]。VEGF、CDK8、p53被證實與腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移有關[12-14]，但VEGF、CDK8、p53與宮頸癌患者腫瘤血管生成的關系尚不清楚，尤其是CDK8。本結(jié)果結(jié)果顯示，宮頸癌組織中VEGF、CDK8、p53和MVD水平升高，VEGF、CDK8與MVD水平有關，VEGF、CDK8、p53、MVD水平與FIGO分期有關，CDK8與腫瘤細胞分化程度有關，而VEGF與腫瘤細胞類型有關。

CDK8是蛋白質(zhì)激酶家族中的一員，與細胞周期蛋白的結(jié)合，發(fā)揮細胞周期有序進行的關鍵功能。2016年我國學者梅興明等[15]證實，CDK8與宮頸癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關。該研究提示，CDK8在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展中具有促進作用，與本研究結(jié)果相同[15]。但是該研究未能分析CDK8水平與宮頸癌組織中血管生成的關系。CDK8在腫瘤細胞增殖中的主要功能是促進腫瘤細胞分裂增殖，保證細胞周期的順利進行。CDK家族還可以正向調(diào)節(jié)p53的表達。FIRESTEIN等[16]研究納入了470例結(jié)直腸癌患者，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CDK8陽性患者的p53陽性率顯著增高，最終促進腫瘤的增殖和轉(zhuǎn)移。在乳腺癌中的研究表明，CDK8與腫瘤細胞的浸潤、轉(zhuǎn)移等有關，CDK8高表達是乳腺癌患者預后不良的主要危險因素[17]。目前CDK家族和p53已成為乳腺癌等腫瘤患者治療的一個靶點[18-20]。本研究雖然表明，CDK8與腫瘤血管生成正相關，但是其因果關系尚不明確，尚需要臨床研究進一步探討。VEGF是血管內(nèi)皮細胞特異性的肝素結(jié)合生長因子，可在體內(nèi)誘導血管新生。ZHANG等[5]研究顯示，宮頸癌患者VEGF水平顯著增高，且與患者預后不良有關。SUN等[6]研究證實，VEGF高表達與宮頸癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關。另外，本研究表明，VEGF在宮頸癌腺癌中表達水平高于鱗癌，與BIEDKA等[4]研究一致。

綜上所述，宮頸癌組織中CDK8、VEGF和p53蛋白表達水平升高，促進腫瘤細胞的生長和轉(zhuǎn)移，CDK8、VEGF可能與腫瘤血管生成有關。

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（童穎丹 編輯）

Expressions of CDK8, p53 and VEGF in cervical cancer and their correlations with angiogenesis

Hong Xue1, Guang-hui Wang1, Yong Li2, Xing-jiang Bu3
(1. Department of Gynecology, 2. Department of Pathology, the Second People’s Hospital of Wuhu,Wuhu, Anhui 241000, China; 3. School of Life Sciences, Anhui Normal University,Wuhu, Anhui 241000, China)

ObjectiveTo investigate the expressions of cyclin-dependent kinase 8 (CDK8), p53 and vascular endothelial growth factor (VEGF) in the cervical cancer tissues and their correlations with tumor angiogenesis.MethodsSixty cervical cancer patients were collected in our hospital. And the CDK8, p53, VEGF and microvessel density (MVD) in the cervical cancer tissues were detected. The correlations of CDK8, p53, VEGF and MVD with the main clinical features of cervical cancer were studied.ResultsMVD of the VEGF-positive patients was higher than that of the VEGF-negative patients (P＜ 0.05); MVD of the CDK8-positive patients was higher than that of the CDK8-negative patients (P＜ 0.05); there was no significant difference in MVD between the patients with negative p53 and those with positive p53 (P＞ 0.05). Compared with the adjacent tissues, VEGF(+),CDK8(+) and p53(+) rates and MVD were significantly increased in the cervical cancer tissues (P＜ 0.05). Compared with the patients of International Federation of Gynecology and Obstetrics (FIGO) stage I, the patients of FIGO stage II-IV got increased VEGF(+), CDK8(+) and p53(+) rates and MVD (P＜ 0.05). When compared with the patients with highly-differentiated carcinoma, the patients with moderately- or poorly-differentiated carcinoma got a higher CDK8(+) rate (P＜ 0.05). Compared with the squamous carcinoma patients, the patients with adenocarcinoma got a higher VEGF(+) rate and increased MVD (P＜ 0.05). Multiple linear regression analysis showed that VEGF and CDK8 were the factors influencing MVD in the cervical cancer tissues (P＜ 0.05).ConclusionsThe expression levels of CDK8, VEGF and p53 are elevated in cervical cancer tissues, which can promote the growth and metastasis of tumor cells. And CDK8 and VEGF may be related to tumor angiogenesis.

cervical cancer; vascular endothelial growth factor; cyclin-dependent kinase 8; microvessel density; p53

R737.33

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.29.008

1005-8982（2017）29-0039-06

2016-04-24