薄士儒+宋學(xué)良+王全凱

摘要：通過(guò)試驗(yàn)研究銀翹散湯劑對(duì)于細(xì)菌感染的小鼠中性粒細(xì)胞吞噬力產(chǎn)生的影響，旨在探究銀翹散對(duì)中性粒細(xì)胞吞噬率的影響效果。隨著不斷給藥，用藥組小鼠血液中的中性粒細(xì)胞吞噬率不斷增強(qiáng)，遠(yuǎn)高于模型對(duì)照組，并且高于正常水平。這表明，銀翹散可以促進(jìn)血液中性粒細(xì)胞對(duì)細(xì)菌的吞噬能力，進(jìn)而改善機(jī)體的免疫功能。

關(guān)鍵詞：銀翹散；中性粒細(xì)胞；吞噬能力

中圖分類號(hào)： R363 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A DOI編號(hào)： 10.14025/j.cnki.jlny.2017.23.028

銀翹散是十分著名的傳統(tǒng)中藥方劑，而作為免疫系統(tǒng)的“先鋒官”——中性粒細(xì)胞是免疫能力強(qiáng)弱的一個(gè)標(biāo)識(shí)，如何促進(jìn)其功能的增強(qiáng)是一個(gè)重要的研究方向。因此，本次試驗(yàn)銀翹散為研究對(duì)象，研究其對(duì)血液中性粒細(xì)胞吞噬能力的作用，進(jìn)而探究銀翹散對(duì)于機(jī)體免疫功能的影響。

1儀器與材料

分析天平；顯微鏡；高壓蒸汽滅菌器；微量移液器等均為實(shí)驗(yàn)常用儀器。

金銀花，桔梗，竹葉，連翹，生甘草，薄荷，淡豆豉，荊芥，牛蒡子（均購(gòu)自吉林市科田大藥房）；PBS、肝素鈉、淋巴細(xì)胞分離液（賽奧克試劑公司）；乙醚、乙醇等試劑均為分析純。

2實(shí)驗(yàn)方法

2.1 銀翹散湯劑的制備

按組方配比稱取各藥煮沸、過(guò)濾，并將所得濾液進(jìn)行濃縮，使其藥液濃度為1g/ml。將所得藥液密封，冷卻。放入4℃冰箱中備用。

2.2 細(xì)菌菌液的制備

培養(yǎng)基及菌液按照文獻(xiàn)方法進(jìn)行制備，并通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定細(xì)菌接種濃度為1×108CFU/ml。

2.3 建立動(dòng)物模型

將48只健康清潔級(jí)小鼠隨機(jī)分為用藥組，健康對(duì)照組以及模型對(duì)照組。麻醉，接種細(xì)菌（注射量為0.2ml/只）。感染細(xì)菌后2小時(shí)，對(duì)用藥組小鼠進(jìn)行灌胃給藥（0.4ml/只），并將等量的無(wú)菌生理鹽水對(duì)模型對(duì)照組以及健康對(duì)照組小鼠進(jìn)行灌胃。分別于用藥前，用藥后48小時(shí)、用藥后72小時(shí)通過(guò)眼球取血。

2.4 細(xì)胞吞噬試驗(yàn)

吸取2ml加入肝素鈉的抗凝血，再加2mlPBS進(jìn)行稀釋。將稀釋后的混合液注入到裝有4ml淋巴細(xì)胞分層液的離心管中，使用水平離心機(jī)2000rpm/min離心20min，離心后的細(xì)胞出現(xiàn)分層現(xiàn)象。吸出上面的三層（血漿，單核細(xì)胞層以及分層液）向離心管中加入5倍體積的PBS混合均勻后離心3次（1500rpm/min，離心15min）。取粒細(xì)胞加入5ml濃度為（8.3g/L）氯化銨溶液，破壞紅細(xì)胞后，37℃水浴10min之后離心（2000rpm/min，10min），棄去上清液，加入100μlPBS制成細(xì)胞懸液，進(jìn)行推片染色及顯微觀察中性粒細(xì)胞吞噬金黃色葡萄球菌情況，并統(tǒng)計(jì)吞噬指數(shù)與吞噬率。

吞噬細(xì)胞百分率（%）：即100個(gè)中性粒細(xì)胞中吞噬細(xì)菌的細(xì)胞數(shù)。

吞噬指數(shù)：將100個(gè)中性粒細(xì)胞所吞噬的細(xì)菌總數(shù)除以100，得到的每個(gè)細(xì)胞吞噬細(xì)菌的平均數(shù)。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

3.1試驗(yàn)數(shù)據(jù)

應(yīng)用SPSS軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理。

3.2結(jié)果分析

通過(guò)表1、表2可以看出：在給藥前，由于接種了金黃色葡萄球菌的菌液，從而導(dǎo)致健康對(duì)照組小鼠血液中的中性粒細(xì)胞吞噬率及吞噬指數(shù)明顯高于用藥組與模型對(duì)照組，且差異十分明顯；而用藥組與模型對(duì)照組小鼠的細(xì)胞吞噬率及吞噬指數(shù)基本處于相同的水平。用藥后的48小時(shí)，模型對(duì)照組與健康對(duì)照組小鼠血液中的中性粒細(xì)胞的吞噬率及吞噬指數(shù)基本與用藥前相同，用藥組小鼠血液中的中性粒細(xì)胞的吞噬率及吞噬指數(shù)呈明顯的上升趨勢(shì)，且增加的幅度較大；在用藥后72小時(shí)，用藥組小鼠血液中的中性粒細(xì)胞的吞噬率及吞噬指數(shù)持續(xù)呈上升的趨勢(shì)，并且要略高于健康對(duì)照組，而模型對(duì)照組與健康對(duì)照組基本無(wú)變化。

4結(jié)論

通過(guò)對(duì)小鼠血液內(nèi)的中性粒細(xì)胞的吞噬能力進(jìn)行測(cè)定發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過(guò)銀翹散湯劑的灌服，用藥組小鼠體內(nèi)的中性粒細(xì)胞的吞噬能力得到了很大的提高，并且高于正常水平。由此表明，銀翹散可明顯提高體內(nèi)中性粒細(xì)胞的吞噬功能，從而改善機(jī)體的免疫能力。

作者簡(jiǎn)介：薄士儒，碩士，助教，研究方向：藥用動(dòng)植物資源的品質(zhì)評(píng)價(jià)與產(chǎn)品開發(fā)。