呂培霖，李成義，魏 偉

（1.解放軍第25醫(yī)院藥械科，甘肅 酒泉 735000； 2.甘肅中醫(yī)藥大學(xué)，甘肅 蘭州 7300003.3.酒泉市藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，甘肅 酒泉 735000）

復(fù)方山川降脂膠囊質(zhì)量控制方法的研究

呂培霖1，李成義2，魏 偉3?

（1.解放軍第25醫(yī)院藥械科，甘肅 酒泉 735000； 2.甘肅中醫(yī)藥大學(xué)，甘肅 蘭州 7300003.3.酒泉市藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，甘肅 酒泉 735000）

目的：建立復(fù)方山川降脂膠囊的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用薄層色譜法對(duì)復(fù)方山川降脂膠囊中的川芎、山楂進(jìn)行定性鑒別，并采用高效液相色譜法測(cè)定制劑中主要成分紅花中山奈素的含量。結(jié)果：在供試品溶液薄層色譜中，在與川芎、山楂對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。在進(jìn)行定量測(cè)定時(shí)，山奈素的濃度在0.452～6.780 ug·mL-1范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系（R=0.999 9)，其平均回收率為100.5% ，RSD=1.12%(n=6)。結(jié)論：薄層色譜法可用于復(fù)方山川降脂膠囊的質(zhì)量控制。

復(fù)方山川降脂膠囊；薄層色譜法；高效液相色譜法；川芎；山楂；山奈素；含量測(cè)定

復(fù)方山川降脂膠囊片是我院臨床應(yīng)用四十多年的協(xié)定處方制劑。該制劑主要由紅花、川芎、山楂、決明子、黃芪等藥物組成，具有益氣活血，降脂祛瘀的功效。臨床主要將其用于血脂異常的治療。由于該制劑成分復(fù)雜，一直缺乏有效的質(zhì)量控制方法。因此，筆者在參考文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，采用薄層色譜法對(duì)其主要成分川芎、山楂進(jìn)行定性鑒別，并采用高效液相色譜法測(cè)定其中紅花的功能性成分山奈素的含量。該方法簡(jiǎn)便易行，重復(fù)性好，排除了其他成分的干擾，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

1 儀器與材料

Agilent 1200高效液相色譜儀；DAD檢測(cè)器；KG-2507DB高頻數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司提供）；UV-9100型紫外分光光度儀（北京瑞利分析儀器公司提供）；AE120電子天平(上海梅特勒-托利多公司提供)；干燥箱（南通科學(xué)儀器廠提供）；硅膠G薄層板(青島海洋化工廠分廠提供，批號(hào)：20130903)；熊果酸(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)：0742-9706)；山楂對(duì)照藥材(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)：10917-100406)；川芎對(duì)照藥材(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)：120918-200507)；復(fù)方山川降脂膠囊(解放軍第25醫(yī)院藥劑科提供，批號(hào)：20150116、20141201、20130827)；山奈素(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)0742-9706)；甲醇為色譜純；其余試劑為分析純；水為重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

圖1 川芎的TLC

2.1.1 川芎的TLC鑒別[1-2]取本品10粒，置于研缽中研細(xì)，加入乙醚30 mL，用超聲處理20分鐘，濾過(guò)，將濾液蒸干，加乙醇1 mL使殘?jiān)芙猓瑐溆?。取缺川芎的陰性樣?.5 g，用同樣的方法制備陰性對(duì)照液。取川芎對(duì)照藥材2 g，加乙醚15 mL，處理5 min，濾過(guò)，將濾液揮干，向殘?jiān)屑尤? mL乙醇使其溶解，將其作為對(duì)照藥材溶液。按照TLC法[3]進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上述溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，以正己烷-乙酸乙酯（比例為9∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外燈（365nm）下檢視。在供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；陰性對(duì)照品在相應(yīng)的位置上無(wú)干擾。詳見(jiàn)圖1。2.1.2 山楂的TLC鑒別[4]取本品10粒，研細(xì)，加石油醚20 mL，浸泡30 min，濾過(guò)，加入石油醚10 mL洗滌濾渣，揮干，然后加乙醚30 mL，用超聲處理15 min，濾過(guò)，將濾液揮干，向其中加入5 mL甲醇使殘?jiān)芙?，靜置。吸取澄清液轉(zhuǎn)移至蒸發(fā)皿中，揮干溶劑，將殘?jiān)?mL甲醇溶解，將其作為供試品溶液。取缺山楂的陰性樣品2.5 g，用同法制備成陰性對(duì)照液。另取山楂對(duì)照藥材2 g, 用同法制成對(duì)照藥材溶液。吸取上述溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，以三氯甲烷-丙酮-乙酸（比例為3∶6∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以硫酸乙醇溶液，在105℃的溫度下加熱數(shù)分鐘，在日光下檢視。在供試品色譜中，在與對(duì)照品、對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；陰性對(duì)照品在相應(yīng)的位置上無(wú)干擾。詳見(jiàn)圖2。

圖2 山楂的TLC

2.2 山奈素含量的測(cè)定

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱：Agilent C18(150 mm* 4.6 mm 5 um)；流動(dòng)相∶ 甲醇-0.4%磷酸水(45∶55)；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：367 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：20 μL。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取山奈素對(duì)照品1.13 mg，置于50mL的容量瓶中，加適量甲醇進(jìn)行溶解，并稀釋至刻度，搖勻，作為母液。吸取1 mL母液置于10 mL量瓶中，用甲醇稀釋并定容至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 精密稱取制劑樣品10粒（約5 g），置于圓底燒瓶中，加甲醇25 mL，稱定重量后，加熱回流30 min，再用甲醇補(bǔ)足缺失的重量，取續(xù)濾液15 mL，加鹽酸溶液（15→37）5 mL，搖勻，水浴加熱30 min后立即冷卻，轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶，用甲醇定容，搖勻，即得。2.2.4 線性關(guān)系的考察 分別吸取上述對(duì)照品母液0.2 mL，0.5 mL，1.0 mL，2.0 mL，3.0 mL置 于 10 mL的 容量瓶中，用甲醇定容，按上述條件測(cè)定。用濃度對(duì)峰面積進(jìn)行回歸，得回歸方程Y=6*107X-4776，R=0.9981。在0.452～0.780μg·mL-1之間呈線形關(guān)系。見(jiàn)圖3、圖4和圖5。

圖3 對(duì)照品

圖4 樣品

圖5 陰性對(duì)照

2.2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液4.52 μg·mL-1，供試品溶液10ul，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)得面積值，結(jié)果RSD為0.72%。試驗(yàn)結(jié)果表明，儀器精密度良好。

2.2.6 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 取山奈素對(duì)照品溶液進(jìn)樣，考察12 h山奈素對(duì)照品的穩(wěn)定性，結(jié)果RSD為0.60 %。試驗(yàn)結(jié)果表明，對(duì)照品溶液在12 h內(nèi)是穩(wěn)定的。

2.2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品溶液5份，分別取20 μL的溶液注入液相色譜儀，記錄山奈素的峰面積值，按外標(biāo)法計(jì)算山奈素的平均含量為1.78 mg·g-1，結(jié)果RSD為1.59%。試驗(yàn)結(jié)果表明，重現(xiàn)性良好。

2.2.8 加樣回收試驗(yàn) 取已測(cè)定含量的樣品作為樣品溶液，吸取樣品溶液3 m，3份為一組，每組加濃度為2.26 μg·mL-1、4.52 μg·mL-1、6.78μg·mL-1的 標(biāo) 準(zhǔn) 溶液各3.5 mL、3.0 mL、3.0 mL，定容至10mL。按擬訂的方法進(jìn)行3次回收實(shí)驗(yàn)，結(jié)果平均回收率為100.5%，RSD為1.12%。試驗(yàn)結(jié)果表明，回收率符合要求。詳情見(jiàn)表1。

表1 回收試驗(yàn)的結(jié)果

2.2.9 含量的測(cè)定 取三個(gè)批號(hào)供試品6份，分別精密稱定4.9862 g、4.9326 g、4.9187 g的樣品。按供試品溶液的制備方法進(jìn)行制備。分別取20μL的溶液注入液相色譜儀中，按外標(biāo)法計(jì)算其含量。結(jié)果顯示，第1批樣品中山奈素的平均含量為63.14 μg·mL-1。第2批樣品中山奈素的平均含量為62.67 μg·mL-1。第3批樣品中山奈素的平均含量為63.51 μg·mL-1。樣品中山奈素的平均含量為63.11 μg·mL-1。

3 討論

復(fù)方山川降脂膠囊為中藥復(fù)方制劑。其中所含藥物種類較多，成分復(fù)雜，因此給其中川芎、山楂的薄層鑒別帶來(lái)了很多的困難。筆者參照《中國(guó)藥典》[1]及相關(guān)文獻(xiàn)[2-4]，通過(guò)對(duì)大量TLC條件進(jìn)行篩選和對(duì)樣品前處理方法進(jìn)行摸索實(shí)驗(yàn)，得出了分離效果較好的薄層鑒別條件。采用本次研究所用的方法對(duì)復(fù)方山川降脂膠囊中川芎、山楂進(jìn)行定性鑒別，薄層結(jié)果專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，方法確實(shí)可行。

[5]及預(yù)實(shí)驗(yàn)顯示，在流動(dòng)相的選擇上，選用甲醇-0.4%磷酸水(45∶55)為流動(dòng)相的效果較好。在確定以此為流動(dòng)相時(shí)，山奈素與相鄰其他組分峰分離的效果較好。本次研究為進(jìn)一步完善復(fù)方山川降脂膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了可靠的檢測(cè)方法，并能有效地控制該產(chǎn)品的質(zhì)量。

參考文獻(xiàn)

[1] 孔菲,丁瑩,梁雪,等.川芎、當(dāng)歸的薄層層析鑒別[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2013，41(2) :56.

[2]馮樹(shù)倩,李映輝.舒胸片中紅花及川芎的薄層鑒別[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2010，7（1）：60-61.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).《中國(guó)藥典》（一部）[S].北京.中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015:附錄：Ⅵ30-75.

[4]李彩東,張偉,王信，等.參芪心舒膠囊中6種藥物的薄層鑒別[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥，2013，15（10）：893.

[5]文萍,陳樂(lè),劉丹,等.紅管藥片中山奈素含量測(cè)定[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2016，18（1）：51-52.

R286

B

2095-7629-（2017）15-0015-03

軍隊(duì)醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑標(biāo)準(zhǔn)提高科研專項(xiàng)課題，No.13ZJZ25

＊通訊作者：魏偉