，

(浙江省樂清市人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，浙江 樂清 325600)

子宮內(nèi)膜異位癥患者異位及在位內(nèi)膜組織中BCAR1的表達(dá)及其意義

何海美，潘曄

(浙江省樂清市人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，浙江樂清325600)

目的觀察子宮內(nèi)膜異位癥(EMS)患者異位和在位內(nèi)膜組織中抗雌激素藥物耐藥性基因1(BCAR1)表達(dá)，并分析其臨床意義。方法選取2016年2月至2016年12月在浙江省樂清市人民醫(yī)院接受治療的100例EMS患者為研究對象(EMS組)，同時選取同期在浙江省樂清市人民醫(yī)院接受體檢篩查的100例健康成年人作為對照組。觀察兩組內(nèi)膜組織中BCAR1的表達(dá)和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、癌抗原125(CA125)水平，比較EMS患者異位內(nèi)膜及在位內(nèi)膜組織中BCAR1的差異，分析子宮內(nèi)膜異位癥患者BCAR1表達(dá)與VEGF、TNF-α、IL-1β、CA125水平的相關(guān)性。結(jié)果EMS組患者組織中的BCAR1陽性表達(dá)率為85.00%，明顯高于對照組(χ2=106.676，Plt;0.001)；EMS組患者血清VEGF、TNF-α、IL-1β、CA125水平分別為228.72±12.35ng/L、46.33±5.96pg/mL、165.82±13.02ng/L、332.46±12.13U/mL，明顯高于對照組(t值分別為-39.764、-41.339、-24.083、-97.792，均Plt;0.001)；EMS患者異位內(nèi)膜中BCAR1陽性表達(dá)率為95.0%，明顯高于在位內(nèi)膜中BCAR1陽性表達(dá)率(χ2=15.686，Plt;0.001)；子宮內(nèi)膜異位癥患者BCAR1陽性表達(dá)率與血清VEGF、TNF-α、IL-1β、CA125水平明顯正相關(guān)(r值分別為0.587、0.612、0.542、0.598，均Plt;0.05)。結(jié)論EMS患者的異位內(nèi)膜組織中BCAR1陽性表達(dá)率較高，且與患者血清VEGF、TNF-α、IL-1β、CA125水平正相關(guān)，可作為臨床監(jiān)測的重要指標(biāo)。

子宮內(nèi)膜異位癥；雌激素；血管生長因子；炎癥因子；抗雌激素藥物耐藥性基因1

子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis，EMS)的病情進(jìn)展可以導(dǎo)致患者痛經(jīng)癥狀的加劇，并可以促進(jìn)異位癥病灶對于正常卵巢功能的破壞，導(dǎo)致繼發(fā)性臟器功能的損害。流行病學(xué)研究顯示，EMS的發(fā)病率可達(dá)(455～566)/10萬人，且在具有盆腔慢性疾病的人群中，其發(fā)病率更高[1-2]。在探討EMS的發(fā)病機(jī)制的過程中發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞生物學(xué)相關(guān)因子的改變，可以通過影響到EMS患者的異位癥病灶組織中腺體細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移或者分化等生理功能，進(jìn)而促進(jìn)患者腺體細(xì)胞對于正常組織的浸潤，加劇異位癥病灶的持續(xù)性進(jìn)展?？勾萍に厮幬锬退幮曰?(breast cancer anti-estrogen resistance 1，BCAR1)的高表達(dá)，可以通過影響腺體細(xì)胞或者間質(zhì)細(xì)胞的侵襲能力，進(jìn)而促進(jìn)其對于卵巢上皮或者輸卵管上皮組織的浸潤，加劇病情的進(jìn)展[3-4]。為了進(jìn)一步揭示BCAR1在EMS患者病情發(fā)生發(fā)展過程中的作用，本次研究選取2016年2月至2016年12月在浙江省樂清市人民醫(yī)院接受治療的EMS患者為研究對象，探討了BCAR1的異常表達(dá)及其與患者其他血清學(xué)生物因子的表達(dá)關(guān)系，報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2016年2月至12月在浙江省樂清市人民醫(yī)院接受治療的EMS患者為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡≥18周歲；②符合子宮內(nèi)膜異位癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)；③無其他系統(tǒng)嚴(yán)重疾病者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①臨床資料不全者；②合并免疫功能障礙者。根據(jù)納入排除標(biāo)準(zhǔn)共選擇EMS患者100例為EMS組，年齡33～65歲，平均48.15±3.21歲。對照組納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡≥18周歲，無其他系統(tǒng)嚴(yán)重疾病，共100例，年齡34～64歲，平均48.17±3.25歲。兩組的年齡等一般資料比較無差別(Pgt;0.05)，具有可比性。本項研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會評審?fù)ㄟ^，且所有患者均知情同意。

1.2方法

1.2.1檢測方法

所有患者均于入院24h內(nèi)采集空腹靜脈血約5mL并分作兩份，一份自然抗凝后以3 000r/min離心10min，取上清液采用酶聯(lián)免疫吸附法測定血清中血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor alpha，TNF-α)水平，檢測試劑盒購自北京中杉金橋生物有限公司，具體檢測步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作；另一份置于枸櫞酸鈉抗凝管內(nèi)，加入白介素-1β(interleukin-1 beta，IL-1β)、癌抗原125(cancer antigen 125，CA125)檢測試劑盒后，利用膠體金法檢測IL-1β、CA125水平，試劑盒購自上海奧普生物醫(yī)藥有限公司，具體檢測步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

采用石蠟切片脫蠟至水，采用離子水進(jìn)行反復(fù)洗滌，加入牛奶液體封閉抗體，封閉時間為5min，加入BCAR1抗體(鼠來源，ABCUM公司)， 37℃ 孵育 2h，采用磷酸鹽緩沖液洗滌3次，滴加熒光染色標(biāo)記的二抗抗體(購自abcum公司)，37℃ 孵育 30min，加入磷酸鹽緩沖液進(jìn)行洗滌，采用南京凱基生物制劑公司生產(chǎn)的顯色劑進(jìn)行顯色，封片，鏡下觀察。

1.2.2評價指標(biāo)

觀察兩組內(nèi)膜組織中BCAR1的表達(dá)和VEGF、TNF-α、IL-1β、CA125水平，比較EMS患者異位內(nèi)膜及在位內(nèi)膜組織中BCAR1的差異，分析EMS患者BCAR1表達(dá)與VEGF、TNF-α、IL-1β、CA125水平的相關(guān)性。BCAR1陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)胞顆粒著色為微黃色，陽性細(xì)胞率分為4級。-：陰性，無陽性著色或著色顆粒細(xì)微淺黃，陽性細(xì)胞數(shù)lt;10%；+：弱陽性，淺黃色細(xì)顆粒，陽性細(xì)胞數(shù)10%～30%；++：中度陽性，黃色顆粒較粗，陽性細(xì)胞數(shù)31%～60%；+++：強(qiáng)陽性，棕黃色粗大顆粒，陽性細(xì)胞數(shù)gt;60%。陽性=弱陽+中度陽性+強(qiáng)陽性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。計數(shù)和計量資料分別采用例和均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。VEGF、TNF-α、IL-1β、CA125水平的比較采用t檢驗進(jìn)行分析，EMS患者異位內(nèi)膜及在位內(nèi)膜組織中BCAR1的比較采用卡方檢驗進(jìn)行分析，采用Pearson相關(guān)分析法分析EMS患者BCAR1表達(dá)與VEGF、TNF-α、IL-1β、CA125水平的相關(guān)性，Plt;0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1兩組內(nèi)膜組織中BCAR1的表達(dá)差異

EMS組患者內(nèi)膜組織中的BCAR1陽性表達(dá)率為85.00%，明顯高于對照組(Plt;0.001)，見表1。

2.2兩組VEGF、TNF-α、IL-1β、CA125水平的比較

EMS組患者血清VEGF、TNF-α、IL-1β、CA125水平明顯高于對照組(均Plt;0.001)，見表2。

表1 兩組內(nèi)膜組織中BCAR1的表達(dá)[n(%)]

表2 兩組VEGF、TNF-α、IL-1β、CA125水平的比較

2.3 EMS患者異位內(nèi)膜及在位內(nèi)膜組織中BCAR1的比較

EMS患者異位內(nèi)膜組織中BCAR1陽性表達(dá)率為95.0%，明顯高于在位內(nèi)膜組織中BCAR1陽性表達(dá)率(Plt;0.001)，見表3。

2.4 EMS患者BCAR1表達(dá)與VEGF、TNF-α、IL-1β和CA125水平的相關(guān)性

EMS患者BCAR1陽性表達(dá)率與血清VEGF、TNF-α、IL-1β和CA125水平明顯正相關(guān)(均Plt;0.05)，見表4。

2.5兩組患者內(nèi)膜組織染色的比較

如圖1所示，左圖為陰性染色結(jié)果，無明顯陽性著色；右圖為陽性染色結(jié)果，棕黃色粗大顆粒，陽性細(xì)胞數(shù)gt;60%。

表3 EMS患者異位及在位內(nèi)膜組織中BCAR1的比較[n(%)]

表4 EMS患者BCAR1表達(dá)與VEGF、TNF-α、IL-1β和CA125水平的相關(guān)分析

圖 1 BCAR1在子宮內(nèi)膜中的表達(dá)(左：陰性表達(dá)；右：陽性表達(dá))

3討論

3.1 EMS的治療預(yù)后背景研究

EMS的發(fā)生發(fā)展，可以導(dǎo)致患者多種不良臨床結(jié)局的發(fā)生，特別是在具有盆腔慢性疾病病史或者合并有其他卵巢良性或者交界性增生性疾病的患者中，EMS的臨床預(yù)后更差。長期的臨床隨訪研究顯示，現(xiàn)階段臨床上EMS的總體治療效果較差，治療后的疾病的病情進(jìn)展率較高。而通過對于EMS發(fā)病過程中相關(guān)生物學(xué)機(jī)制的研究，一方面可以為EMS的疾病預(yù)后評估提供新的實(shí)驗室參考指標(biāo)，同時也可以為揭示臨床上EMS患者的發(fā)病機(jī)制提供理論基礎(chǔ)。

3.2 BCAR1能影響多種生理病理機(jī)制促進(jìn)EMS的進(jìn)展

BCAR1等細(xì)胞生物學(xué)因子可以通過影響子宮內(nèi)膜腺體或者間質(zhì)細(xì)胞的增生或者異常凋亡的過程，加劇細(xì)胞的侵襲能力或者轉(zhuǎn)移風(fēng)險的增加，促進(jìn)增殖期細(xì)胞對于卵巢或者輸卵管等上皮組織的浸潤，促進(jìn)疾病的進(jìn)展[5]；BCAR1是促進(jìn)微血管形成的重要因素，BCAR1的異常表達(dá)的上升，可以在促進(jìn)新生血管形成或者提高局部異位癥病灶組織細(xì)胞的血流供應(yīng)的同時，加劇異位癥病灶細(xì)胞的持續(xù)性進(jìn)展，導(dǎo)致病變細(xì)胞的增殖速率的增加[6]。近年來相關(guān)基礎(chǔ)領(lǐng)域的研究也顯示，BCAR1的高表達(dá)不僅可以影響雌激素抗體的敏感性或者耐藥性，同時可以通過對于EMS病情組織中的雌激素受體的上調(diào)，進(jìn)而加劇病灶組織細(xì)胞的增殖活性的增強(qiáng)，促進(jìn)病情的進(jìn)展[7-9]。已有的相關(guān)研究揭示BCAR1的異常表達(dá)情況，但缺乏對于BCAR1在異位癥病灶組織或者子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)差異性的對比研究。

3.3 BCAR1在EMS患者體內(nèi)的異常表達(dá)及其與患者血清學(xué)相關(guān)指標(biāo)的關(guān)系

本次研究發(fā)現(xiàn)，在EMS患者的異位癥病灶組織中BCAR1陽性率明顯高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，提示BCAR1可能參與了EMS的病情進(jìn)展，BCAR1的高表達(dá)可以通過影響局部氧化應(yīng)激損傷或者加劇患者的異位癥病灶組織炎癥損傷等，進(jìn)而促進(jìn)EMS患者的病情進(jìn)展。莊夢斐等[10]、寧麗等[11]通過探討不同臨床分期或者病情嚴(yán)重程度不同的 EMS患者的發(fā)病機(jī)制，BCAR1的陽性表達(dá)率可平均上升25%～66%，且患者的異位癥病灶的侵襲程度越高，卵巢功能的破壞越嚴(yán)重，相關(guān)BCAR1的陽性表達(dá)率越高。血清學(xué)相關(guān)指標(biāo)的研究可見， VEGF、TNF-α、IL-1β、CA125等均呈現(xiàn)出明顯的高表達(dá)趨勢，從機(jī)制上考慮不同的血清學(xué)生物指標(biāo)的高表達(dá)可以影響到下列幾個方面的因素，進(jìn)而促進(jìn)EMS患者病情的進(jìn)展[12-13]：①VEGF、TNF-α等的表達(dá)，促進(jìn)了異位癥病灶組織中新生血管的形成，促進(jìn)了患者的異位癥腺體細(xì)胞對于盆腔內(nèi)臟器或者腹膜上皮細(xì)胞的浸潤能力；②IL-1β、CA125等的高表達(dá)，能夠影響患者的異位癥病灶組織的線粒體損傷，或者促進(jìn)腺體細(xì)胞的黏附能力的增加，從而增加了其對于基底膜層上皮組織的突破作用。在不同病灶組織中，可以發(fā)現(xiàn)的是，EMS患者異位內(nèi)膜中BCAR1陽性表達(dá)率為95.0%，明顯高于在位子宮內(nèi)膜病灶組織中BCAR1的陽性表達(dá)率，這主要考慮與異位癥病灶組織中細(xì)胞的侵襲能力較強(qiáng)、病灶的浸潤程度較深等有關(guān)。最后，本次研究發(fā)現(xiàn)BCAR1陽性表達(dá)率與血清學(xué)相關(guān)生物學(xué)因子的表達(dá)具有密切的關(guān)系，提示BCAR1可能通過影響VEGF等的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)患者的病情發(fā)展。

本次研究的創(chuàng)新性在于探討了異位癥病灶組織及在位子宮內(nèi)膜病灶組織中的BCAR1陽性表達(dá)差異，這有利于分析異位癥病灶組織的發(fā)病機(jī)制。綜上所述，EMS患者的異位內(nèi)膜組織中BCAR1陽性表達(dá)率較高，且與患者血清VEGF、TNF-α、IL-1β、CA125水平正相關(guān)，可作為臨床監(jiān)測疾病進(jìn)展的重要指標(biāo)。

[1]Kim J J,Kurita T,Bulun S E. Progesterone action in endometrial cancer, endometriosis, uterine fibroids, and breast cancer[J]. Endocr Rev,2013,34(1):130-162.

[2]Hwang J H,Lee K S,Joo J K,etal. Identification of biomarkers for endometriosis in plasma from patients with endometriosis using a proteomics approach[J]. Mol Med Rep,2014,10(2):725-730.

[3]李建輝.子宮內(nèi)膜異位癥患者血清CA125、HE4、CA199、炎性因子及組織雌孕激素受體的表達(dá)分析[J].海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2014,20(7):902-904.

[4]Liang Y, Yao S. Potential role of estrogen in maintaining the imbalanced sympathetic and sensory innervation in endometriosis[J].Mol Cell Endocrinol, 2016,424:42-49.

[5]Wang W, Li Y, Maitituoheti M,etal. Association of an oestrogen receptor gene polymorphism in Chinese Han women with endometriosis and endometriosis-related infertility[J]. Reprod Biomed Online,2013,26(1):93-98.

[6]賀亞楠,張廣美. 子宮內(nèi)膜異位癥病因的分子水平研究新進(jìn)展[J]. 醫(yī)學(xué)綜述,2015,21(21):3873-3876.

[7]Anifantaki F,Boutas I,Kalampokas T,etal. Association of endometriosis and breast cancer: mini review of the literature[J]. Arch Gynecol Obstet,2016,293(1):5-10.

[8]Monsivais D, Dyson M T, Yin P,etal. ERβ- and prostaglandin E2-regulated pathways integrate cell proliferation via Ras-like and estrogen-regulated growth inhibitor in endometriosis[J]. Mol Endocrinol,2014,28(8):1304-1315.

[9]范余娟,孫丹,徐紅,等. 子宮內(nèi)膜癌組織BRCA1單核苷酸多態(tài)性與臨床病理因素相關(guān)性分析[J]. 中華腫瘤防治雜志,2015,22(16):1283-1286.

[10]莊夢斐,楊英,曹陽,等. 子宮內(nèi)膜異位癥病理機(jī)制相關(guān)信號通路的研究進(jìn)展[J]. 生殖與避孕,2016,36(3):214-222,244.

[11]寧麗,陳萱,莊如錦,等. 子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展[J]. 現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2016,(3):593-596,556.

[12]張曉敏,張英姿,胡雪穎,等. 子宮內(nèi)膜腺癌組織中RAD51、BRCA1蛋白的表達(dá)變化及其意義[J]. 山東醫(yī)藥,2016,56(19):44-46.

[13]Suryawanshi S,Vlad A M,Lin H M,etal.Plasma microRNAs as novel biomarkers for endometriosis and endometriosis-associated ovarian cancer[J]. Clin Cancer Res,2013,19(5):1213-1224.

[專業(yè)責(zé)任編輯：張冠軍]

ExpressionandsignificanceofBCAR1inectopicendometriumandeutopicendometriuminpatientswithendometriosisy

HE Hai-mei, PAN Ye

(DepartmentofObstetricsandGynecology,YueqingMunicipalPeople’sHospitalofZhejiangProvince,ZhejiangQingshi325600,China)

ObjectiveTo investigate the expression of breast cancer anti-estrogen resistance 1 (BCAR1) in ectopic endometrium and eutopic endometrium in patients with endometriosis (EMS) and to analyze its clinical significance.Methods100 EMS patients treated in Yueqing Municipal People’s Hospital of Zhejiang Province from February to December in 2016 were selected as subjects, and healthy adults who underwent physical examination in the hospital were selected as controls. Expression of BCAR1 and levels of vascular endothelial growth factor (VEGF), tumor necrosis factor alpha (TNF-α), interleukin-1β (IL-1β), and cancer antigen 125 (CA125) were observed in two groups. BCAR1was compared between ectopic endometrium and eutopic endometrial in EMS patients, and analysis was conducted on correlation of BCAR1 expression in patients with EMS and levels of VEGF, TNF-α, IL-1β and CA125.ResultsPositive expression rate of BCAR1 in eutopic endometrium of EMS group was 85.00%, which was significantly higher than that of the control group (χ2=106.676,Plt;0.001). Levels of serum VEGF, TNF-α, IL-1β and CA125 in EMS group of patients were 228.72±12.35ng/L, 46.33±5.96Pg/ml, 165.82±13.02ng/L, 332.46±12.13U/ml, respectively, which were significantly higher than those in the control group (tvalue was -39.764, -41.339, -24.083 and -97.792, respectively, allPlt;0.001). Positive expression rate of BCAR1 was 95.0% in EMS patients with ectopic endometrium, and it was significantly higher than that in eutopic endometrium (χ2=15.686,Plt;0.001). A significant positive correlation was found between positive expression rate of BCAR1 and serum levels of VEGF, TNF-α, IL-1β and CA125 (rvalue was 0.587, 0.612, 0.542 and 0.598, respectively, allPlt;0.05).ConclusionPositive expression rate of BCAR1 in ectopic endometrium of EMS patients is relatively high, and it is positively corralted with the serum levels of VEGF, TNF-α, IL-1β and CA125. So it can be used as an important index for clinical monitoring.

endometriosis (EMS); estrogen; vascular growth factor (VGF); inflammatory factor; breast cancer anti-estrogen resistance 1(BCAR1)

10.3969/j.issn.1673-5293.2017.11.034

R711.74

A

1673-5293(2017)11-1418-04

2017-05-23

何海美(1980—)，女，主治醫(yī)師，主要從事婦產(chǎn)科臨床工作。

潘 曄，副主任醫(yī)師。