丁婷婷，張 瑾，2*，董欣琪，洪桂云，鮑立寧

磺胺類抗生素對(duì)青?；【鶴67的濃度比依賴性拮抗作用

丁婷婷1，張 瑾1，2*，董欣琪1，洪桂云1，鮑立寧1

（1.安徽建筑大學(xué)環(huán)境與能源工程學(xué)院，安徽省水污染控制與廢水資源化重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，合肥 230601；2.清華大學(xué)新興有機(jī)污染物控制北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100084）

為系統(tǒng)考察磺胺類抗生素藥物（SAs）污染物長(zhǎng)期暴露下的生物毒性效應(yīng)，以5種磺胺類抗生素（SAs）：磺胺氯噠嗪（SCP）、磺胺嘧啶（SD）、磺胺吡啶（SPY）、磺胺甲惡唑（SMX）和磺胺二甲嘧啶（SM2）為研究對(duì)象，應(yīng)用直接均分射線法（Equ-Ray）設(shè)計(jì)10個(gè)二元抗生素混合物體系（每個(gè)二元混合物體系設(shè)計(jì)5條具有不同濃度比的射線），應(yīng)用優(yōu)化的長(zhǎng)期微板毒性分析法（L-MTA）系統(tǒng)測(cè)試這些抗生素在16 h對(duì)發(fā)光菌青?；【╒ibrio-qinghaiensis sp.-Q67,Q67）的發(fā)光抑制毒性，并應(yīng)用濃度加和模型（CA）分析混合物毒性相互作用。結(jié)果表明：5種SAs及其混合物射線對(duì)Q67在16 h呈現(xiàn)明顯的毒性，但不同的抗生素毒性大小不同，以半數(shù)效應(yīng)濃度的負(fù)對(duì)數(shù)（pEC50）為毒性大小指標(biāo)，5 種 SAs的毒性大小順序?yàn)椋篠MX（pEC50=3.95）>SCP（pEC50=3.65）>SPY（pEC50=3.41）>SD（pEC50=3.36）>SM2（pEC50=3.21）；10個(gè)SAs的二元混合物體系中7個(gè)呈現(xiàn)出加和作用，3個(gè)呈現(xiàn)出拮抗作用；3個(gè)混合物體系拮抗作用隨組分濃度比的變化呈現(xiàn)不同的變化規(guī)律：混合物體系SCP-SPY和SCP-SMX中的射線拮抗作用均隨SCP濃度比逐漸減小，即從R1到R2逐漸明顯，從R2到R5幾乎不變，而SCP-SM2體系，拮抗作用隨組分SCP的濃度比逐漸減小，即從R1到R2逐漸明顯，從R2到R5，逐漸變得不明顯，R5在較高濃度區(qū)甚至出現(xiàn)了協(xié)同作用。

磺胺類抗生素；混合物；青?；【?；濃度比依賴性；拮抗作用

磺胺類抗生素藥物（SAs）是應(yīng)用最早的一類人工合成抗菌藥，主要作為飼料添加劑或治療動(dòng)物疾病廣泛應(yīng)用于畜牧和水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中[1]。SAs藥物的大量生產(chǎn)和應(yīng)用已導(dǎo)致該藥物進(jìn)入大氣、水體以及土壤等環(huán)境中[2]。據(jù)報(bào)道，在我國(guó)畜禽養(yǎng)殖場(chǎng)糞便中普遍存在磺胺類抗生素的殘留，殘留的抗生素隨動(dòng)物糞便施肥進(jìn)入土壤后，有的被植物吸收積累，有的對(duì)土壤中的生物產(chǎn)生毒害效應(yīng)，甚至破壞植物根際周圍的微生態(tài)平衡[3-4]。在我國(guó)河流及湖泊等天然水環(huán)境中，約158種藥物和個(gè)人護(hù)理產(chǎn)品（Pharmaceuticals and personal care products，PPCPs）被調(diào)查出來，其中報(bào)道次數(shù)較多的20種PPCPs中，磺胺類抗生素被報(bào)道次數(shù)最多[5]。薛保銘等[6]發(fā)現(xiàn)4種磺胺類抗生素和甲氧芐氨嘧啶（TMP）在欽州灣近海及匯海河流均有不同程度存在，其中磺胺類抗生素在欽州灣的海水養(yǎng)殖區(qū)均呈現(xiàn)出較高的濃度水平。Li等[7]研究發(fā)現(xiàn)白洋淀湖泊中普遍存在喹諾酮類、大環(huán)內(nèi)脂類和磺胺類抗生素，其中磺胺類物質(zhì)濃度最高（0.9～1563 ng·L-1），同時(shí)也發(fā)現(xiàn)殘留的抗生素對(duì)微生物和水生生物均產(chǎn)生了很強(qiáng)的生態(tài)毒性。此外，太湖、武漢城市湖泊等不同湖泊水體中都檢出磺胺類抗生素[8-9]。

然而，進(jìn)入環(huán)境中的抗生素又以各種形式和濃度共存于環(huán)境中，形成復(fù)雜的各種混合污染物，進(jìn)而對(duì)環(huán)境生物產(chǎn)生聯(lián)合毒性效應(yīng)[10-11]。混合污染物所產(chǎn)生的累積毒性與相互作用（協(xié)同與拮抗作用）具有更大的潛在風(fēng)險(xiǎn)。因此，系統(tǒng)考察磺胺類抗生素及其混合污染物對(duì)暴露生物的毒性具有更重要的現(xiàn)實(shí)環(huán)境意義。越來越多的研究表明，污染物的毒性是隨暴露時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸發(fā)生發(fā)展的[12]。然而，目前大多數(shù)的研究只考慮用短時(shí)間暴露的急性毒性來評(píng)價(jià)污染物的毒性效應(yīng)，很少考慮到長(zhǎng)時(shí)間暴露條件下，污染物對(duì)生物體的干擾，因而不能準(zhǔn)確地評(píng)定化合物毒性的真實(shí)情況。要想深入了解SAs污染物的毒性作用機(jī)制，正確評(píng)價(jià)其生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)，長(zhǎng)期暴露也是一個(gè)重要的考慮因素。

在絕大多數(shù)的水生生態(tài)系統(tǒng)中，細(xì)菌尤其是弧菌類是食物鏈中最重要的一個(gè)環(huán)節(jié)，在生態(tài)系統(tǒng)的物質(zhì)循環(huán)和能量流動(dòng)中發(fā)揮著重要的作用[13]。對(duì)生態(tài)系統(tǒng)中細(xì)菌的任何外源性干擾都可能對(duì)生態(tài)系統(tǒng)產(chǎn)生有益或有害的影響。因此，在生態(tài)毒理學(xué)的研究中，細(xì)菌如發(fā)光菌費(fèi)氏弧菌（Vibrio fisher，V.fisheri）和青海弧菌（Vibrio qinghaiensis sp.-Q67，Q67）常作為化學(xué)污染物水體毒性的一個(gè)重要指示生物[14]。發(fā)光菌毒性測(cè)試中應(yīng)用最廣泛的是V.fisheri，但在進(jìn)行環(huán)境樣品生物毒性測(cè)試時(shí)需要人為加入一定量的NaCl（2%～3%），在淡水體系樣品的檢測(cè)中存在一定的局限性[15]。青?；【鶴67是一種淡水發(fā)光菌，克服了V.fisheri的這一缺點(diǎn)，且能夠在很寬的pH值范圍內(nèi)（6.5～11）生長(zhǎng)良好，對(duì)毒物的反應(yīng)敏感。

本文以5種磺胺類抗生素磺胺氯噠嗪（SCP）、磺胺嘧啶（SD）、磺胺吡啶（SPY）、磺胺甲惡唑（SMX）和磺胺二甲嘧啶（SM2）為研究目標(biāo)，以青海弧菌Q67為指示生物。采用直接均分射線法（Equ-Ray）設(shè)計(jì)二元混合物，采用長(zhǎng)期微板毒性分析法（L-MTA）系統(tǒng)測(cè)定磺胺類抗生素及其混合物在長(zhǎng)期暴露條件下對(duì)Q67的毒性效應(yīng)，并應(yīng)用經(jīng)典加和參考模型分析混合物的毒性相互作用，研究結(jié)果將為科學(xué)、客觀地評(píng)價(jià)磺胺類抗生素的環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)提供數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

試劑：5種磺胺類抗生素：磺胺氯噠嗪（SCP）、磺胺嘧啶（SD）、磺胺吡啶（SPY）、磺胺甲惡唑（SMX）和磺胺二甲嘧啶（SM2）均購自上海原葉生物科技有限公司，其基本理化性質(zhì)見表1。采用milli-Q水配制抗生素儲(chǔ)備液，保存在棕色瓶中，并置于4℃冰箱中保存，備用。

主要實(shí)驗(yàn)儀器：Synergy 2 Multi-Mode微板光度計(jì)（美國(guó)BioTek伯騰儀器有限公司）、超凈工作臺(tái)（三發(fā)儀器有限公司）、FA1004型五位電子天平（天津天馬衡基儀器有限公司）、YX280A手提式壓力蒸汽滅菌器（上海三申醫(yī)療器械有限公司）、SC-242型透明門立式冷藏柜（青島海爾電冰柜有限公司）、BS-2E數(shù)顯振蕩培養(yǎng)箱（上海梅香儀器有限公司）、DHG-9140A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海精密實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）和 Dragon-lab單道可調(diào)移液器（10～100 μL，大龍興創(chuàng)實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）。

表1 5種磺胺類抗生素的基本理化性質(zhì)Table 1 Basic physicochemical properties of five sulfonamide antibiotics

1.2 混合物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

采用直接均分射線法（Equ-Ray）[16]設(shè)計(jì)磺胺類抗生素的二元混合物體系，共10組。每組抗生素混合物體系均安排5條具有不同組分濃度配比的射線，共50條混合物射線，其組分構(gòu)成以及濃度配比見表2。

1.3 菌種的培養(yǎng)、長(zhǎng)期微板毒性分析法

青?；【?Q67（Vibrioqinghaisensesp.-Q67，Q67）購自北京濱松科技公司，其培養(yǎng)配制參照文獻(xiàn)[12，17]。

預(yù)實(shí)驗(yàn)表明，磺胺類抗生素對(duì)Q67在12 h內(nèi)幾乎沒有毒性，只有在12 h后才逐漸出現(xiàn)毒性，在16 h出現(xiàn)明顯的毒性效應(yīng)，16 h后毒性開始減弱。因此，本研究只需測(cè)定5種抗生素對(duì)發(fā)光菌在暴露時(shí)間為16 h的濃度-效應(yīng)數(shù)據(jù)，分析方法采用長(zhǎng)期微板毒性分析方法（L-MTA）[18]，但在參考文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上有所改進(jìn)，即調(diào)整了菌種的初始培養(yǎng)時(shí)間：將事先已培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期（即相對(duì)發(fā)光單位值RLU≥9×106）的Q67，轉(zhuǎn)入等體積的濃縮培養(yǎng)基，并置于22℃培養(yǎng)箱，培養(yǎng)時(shí)間縮短為0.5 h（以使其在微孔板中在培養(yǎng)16 h后仍處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期），加入事先已加入毒物的96孔微板中，在暴露16 h時(shí)取出測(cè)定微孔板中各孔的發(fā)光強(qiáng)度，余下過程同參考文獻(xiàn)[18]。毒物對(duì)Q67在不同暴露時(shí)間的發(fā)光抑制毒性表達(dá)為發(fā)光抑制率（E）[19]，計(jì)算公式如下：

表2 直接均分射線法設(shè)計(jì)的10組二元混合物體系的組分構(gòu)成及其濃度比Table 2 The components and their concentration ratios of ten groups of binary mixture systems designed by direct equal partition ray method

式中：I0為24個(gè)空白對(duì)照孔的RLU的平均值；I為不同濃度處理組3個(gè)平行濃度孔的RLU的平均值。

1.4 濃度-效應(yīng)數(shù)據(jù)擬合

對(duì)于濃度-效應(yīng)曲線（CRC）為S型的污染物，其在不同暴露時(shí)間下的所有濃度-響應(yīng)數(shù)據(jù)都需要在APTox軟件程序[20]上進(jìn)行非線性擬合，同時(shí)計(jì)算出與CRC模型相對(duì)應(yīng)95%可信度的觀測(cè)效應(yīng)置信區(qū)間?；瘜W(xué)計(jì)量學(xué)默認(rèn)的優(yōu)化原則是1個(gè)優(yōu)化模型使用的樣本數(shù)至少應(yīng)是該模型參數(shù)的5倍，考慮到L-MTA法測(cè)定12個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)的事實(shí)，所獲得的濃度-毒性效應(yīng)數(shù)據(jù)，主要選擇2個(gè)參數(shù)的CRC模型，例如Logit（2）和Weibull（3）兩參數(shù)函數(shù)進(jìn)行非線性模擬，其中E表示效應(yīng)（0≤E≤1），c表示單個(gè)化合物或者混合物濃度，α和β都是參數(shù)。

由于毒性實(shí)驗(yàn)的固有誤差，評(píng)估化合物或混合物毒性時(shí)必須考察置信區(qū)間的范圍，特別是觀測(cè)值的置信區(qū)間（OCI）。本論文中，OCI是基于實(shí)測(cè)毒性效應(yīng)，在顯著性水平為0.05情況下，化合物實(shí)驗(yàn)濃度的可信范圍，即化合物產(chǎn)生某一效應(yīng)x%時(shí)的95%OCI，并且本文是在整個(gè)濃度-效應(yīng)區(qū)域內(nèi)建立整條觀測(cè)CRC 的 OCI曲線[21]。

1.5 混合物毒性相互作用分析

通常，混合物毒性相互作用的分析基于某一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)加和參考模型如濃度加和（CA）基礎(chǔ)上進(jìn)行的[22]，其計(jì)算公式如下：

式中：ci表示混合物產(chǎn)生總效應(yīng)為x%時(shí)第i種組分的濃度；ECx，i為i組分單獨(dú)存在時(shí)產(chǎn)生等效應(yīng)x%時(shí)的效應(yīng)濃度。

如果由CA模型預(yù)測(cè)的混合物濃度-效應(yīng)曲線（CRC）位于混合物實(shí)際觀測(cè)毒性的95%OCI內(nèi)、95%OCI上限的上方或95%OCI下限的下方，則稱該混合物組分間分別是加和作用即沒有毒性相互作用、拮抗作用或協(xié)同作用[23-24]。

2 結(jié)果與討論

2.1 5種磺胺類抗生素對(duì)Q67的單一毒性

Logit函數(shù)能較好地?cái)M合抗生素污染物的濃度-效應(yīng)數(shù)據(jù)[25]，故本文采用Logit函數(shù)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合。將通過MTA法采集的5種抗生素對(duì)Q67的濃度-效應(yīng)數(shù)據(jù)擬合到非線性函數(shù)Logit，其擬合結(jié)果及相關(guān)統(tǒng)計(jì)量見表3，其濃度-效應(yīng)數(shù)據(jù)及擬合CRC繪于圖1。從表3可以看出，Logit函數(shù)可以很好地?cái)M合5種抗生素的濃度-效應(yīng)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)（R>0.95，RMSE<0.024）。以半數(shù)效應(yīng)濃度（EC50）的負(fù)對(duì)數(shù)pEC50為毒性大小指標(biāo)[26-27]，5種抗生素對(duì)Q67的毒性差異不大，pEC50值在3.21～3.95之間，毒性最大的是SMX，最小的是SM2。5種抗生素的毒性順序?yàn)椋篠MX（pEC50=3.95）>SCP（pEC50=3.65）>SPY（pEC50=3.41）>SD（pEC50=3.36）>SM2（pEC50=3.21）。圖 1 是 5 種抗生素對(duì)發(fā)光菌的濃度-效應(yīng)曲線（CRCs），從圖中可看出其對(duì)Q67的CRCs在實(shí)驗(yàn)觀測(cè)的濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)S型，但不平行，說明這5種抗生素對(duì)發(fā)光菌的毒性大小不同或參數(shù)β的大小不同（表3）。

2.2 磺胺類抗生素二元混合物對(duì)Q67的毒性

將10組抗生素的二元混合物體系對(duì)Q67的濃度-效應(yīng)數(shù)據(jù)及擬合CRCs繪于圖2。可以看出，除了SD-SM2和SD-SMX兩個(gè)混合物體系的5條射線隨著濃度比有明顯的變化外，其余混合物體系的射線沒有完全分開甚至是重疊的，表明磺胺類抗生素的二元混合物體系的毒性沒有明顯差異，可能是由于這5種抗生素對(duì)Q67的毒性在3.21～3.95范圍內(nèi)，差異不是非常明顯。由于其混合物毒性的復(fù)雜性，具體的原因尚需要進(jìn)一步研究。

表3 5種磺胺類抗生素的Logit函數(shù)擬合結(jié)果及其統(tǒng)計(jì)量擬合參數(shù)Table 3 The fitted results by Logit function and its some statistics for the five sulfonamide antibiotics

圖1 5種磺胺類抗生素對(duì)Q67的濃度-效應(yīng)曲線Figure 1 The CRCs of the five kinds of sulfonamide antibiotics on Q67

2.3 磺胺類抗生素二元混合物毒性作用

基于加和參考模型CA對(duì)磺胺類抗生素10組二元混合物體系的評(píng)估，結(jié)果顯示：10組混合物體系中有7條混合物射線呈現(xiàn)經(jīng)典的加和作用，即CA線全部位于95%OCI的置信區(qū)間內(nèi)，而3組混合物體系（SCP-SPY、SCP-SM2和SCP-SMX）呈現(xiàn)明顯的拮抗作用（圖3），即CA預(yù)測(cè)線位于95%OCI上限的上方。這可能是由于混合物中各組分的毒性比較接近，或作用于同一個(gè)作用位點(diǎn)，導(dǎo)致了相互之間競(jìng)爭(zhēng)作用位點(diǎn)造成的[28-29]。

圖2 10組磺胺類二元混合物體系對(duì)Q67的濃度-效應(yīng)曲線Figure 2 The concentration-effect curves of the ten group sulfa binary mixture system on Q67

圖3 3組具有毒性相互作用混合物體系對(duì)Q67的濃度-效應(yīng)關(guān)系Figure 3 Ray sulfa mixture of three groups of toxic interaction of Q67 concentration-effect relationship

混合物毒性相互作用可能具有組分濃度比依賴性[29-30]。本研究中發(fā)現(xiàn)，具有拮抗作用的3組混合物體系的拮抗作用從R1到R2呈逐漸減弱或逐漸增強(qiáng)的趨勢(shì)。不同的混合物體系，拮抗作用隨組分濃度比（表2）的變化規(guī)律不同：混合體系SCP-SPY和SCP-SMX中的每條射線的拮抗作用從R1到R2逐漸明顯，R3、R4和R5拮抗作用程度接近，而SCP-SM2混合物體系中5條射線的拮抗作用從R1到R2增強(qiáng)，而后從R2至R5逐漸減弱，R5在較高濃度區(qū)甚至出現(xiàn)了協(xié)同作用。通過進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，具有拮抗作用的3組混合物體系雖然具有共同的組分SCP，且其濃度比均從R1至R5逐漸減小，但3組混合物體系卻呈現(xiàn)拮抗作用隨組分濃度比（表2）的不同變化規(guī)律也不同。這可能是由于3組混合物體系中另一個(gè)組分造成的。在這3組混合物體系中，5條射線（R1至R5）的組分SPY、SM2和SMX的濃度比均是逐漸增大的，說明混和物的組分構(gòu)成及其濃度配比可能是影響混合物體系的拮抗作用發(fā)生發(fā)展的重要因素，具體的原因尚需進(jìn)一步研究。

3 結(jié)論

（1）Logit函數(shù)能很好地?cái)M合5種磺胺類抗生素及其混合物對(duì)Q67的濃度-效應(yīng)數(shù)據(jù)，5種抗生素對(duì)Q67的毒性差異不大，其毒性順序?yàn)椋篠MX（pEC50=3.95）>SCP（pEC50=3.65）>SPY（pEC50=3.41）>SD（pEC50=3.36）>SM2（pEC50=3.21）。

（2）依據(jù)加和參考模型CA，10組二元混合物體系中，7組混合物體系呈經(jīng)典的加和作用，3組混合物體系SCP-SM2、SCP-SMX和SCP-SPY呈現(xiàn)出明顯的拮抗作用。

（3）具有拮抗作用的3組混合物體系均含有共同的組分SCP，但拮抗作用隨組分濃度配比變化而呈現(xiàn)出不同的變化規(guī)律：從R1至R5，3組混合體系中的SCP濃度比逐漸減小，SPY、SMX和SM2的濃度比逐漸增大，而SCP-SPY和SCP-SMX中的拮抗作用從R1到R2逐漸明顯，從R2到R5幾乎不變，而SCPSM2混合物體系中5條射線的拮抗作用從R1到R2逐漸明顯，從R2到R5，拮抗作用逐漸變得不明顯，R5在較高濃度區(qū)甚至出現(xiàn)了協(xié)同作用。

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Concentration-ratio-dependent antagonism of sulfonamide antibiotics towards Vibrio qinghaiensis sp.-Q67

DING Ting-ting1,ZHANG Jin1,2*,DONG Xin-qi1,HONG Gui-yun1,BAO Li-ning1
（1.Key Laboratory of Water Pollution Control and Wastewater Resource of Anhui Province,College of Environment and Energy Engineering,Anhui Jianzhu University,Hefei 230601,China;2.Beijing Key Laboratory for Emerging Organic Contaminants Control,Tsinghua University,Beijing 100084,China）

To investigate the long-term toxicity of sulfonamide antibiotics（SAs）towards organisms,five SAs：sulfamethazine（SCP）,sulfamethoxazole（SD）,sulfasalazine（SPY）,sulfadiazine（SMX）,and sulfachloro pyridazine（SM2）were selected as research subjects.The direct equipartition ray method was used to design ten binary mixture systems,and five rays with different concentration ratios（pis）were arranged in each mixture system.The toxicities of the five SAs and their mixture systems towards the photobacterium Vibrio qinghaiensis sp.-Q67 were determined using the optimized long-term microplate toxicity analysis（L-MTA）method.Concentration addition was employed as the standard reference model to analyze the toxicity interaction within mixture systems.The results showed that the toxicities of the five SAs and their mixture rays displayed obvious differences after 16 h.Based on the negative logarithm of median effect concentration（pEC50）,the toxicity order of the five SAs was as follows：SMX（pEC50=3.95）>SCP（pEC50=3.65）>SPY（pEC50=3.41）>SD（pEC50=3.36）>SM2（pEC50=3.21）.Seven out of the ten mixture systems displayed additive action and the other three,SCP-SPY,SCP-SMX,and SCP-SM2,showed different antagonism.Antagonism of SCP-SPY and SCP-SMX gradually strengthened with the decrease of component SCP′s pis from R1 to R2,and then was mostly stable from R2 to R5.The antagonism of the SCP-SM2 mixture system strengthened with the decrease of SCP’s pis from R1 to R2,then declined gradually from R2 to R5,and synergism appeared in the relatively high concentration region of R5.

sulfonamide antibiotics;mixture;Vibrio qinghaiensis sp.-Q67;concentration-ratio dependency;antagonism

X171.5

A

1672-2043（2017）11-2199-08

10.11654/jaes.2017-0722

丁婷婷，張 瑾，董欣琪，等.磺胺類抗生素對(duì)青?；【鶴67的濃度比依賴性拮抗作用[J].農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào),2017,36（11）：2199-2206.

DING Ting-ting,ZHANG Jin,DONG Xin-qi,et al.Concentration-ratio-dependent antagonism of sulfonamide antibiotics towards Vibrio qinghaiensis sp.-Q67[J].Journal of Agro-Environment Science,2017,36（11）:2199-2206.

2017－05－17 錄用日期：2017－07－05

丁婷婷（1992—），女，安徽蕪湖人，碩士研究生，研究方向?yàn)槎纠韺W(xué)。E-mail：1373639545@qq.com

*通信作者：張 瑾 E-mail：ginnzy@163.com

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（21677001，21207002）；安徽省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（1708085MB50）

Project supported：The National Natural Science Foundation of China（21677001，21207002）；Natural Science Foundation of Anhui Province，China（1708085MB50）