孫德君，馮艷男，秦立鑫

（ 哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司，哈爾濱 150069）

重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗免疫SPF鴨免疫持續(xù)期試驗(yàn)

孫德君，馮艷男，秦立鑫

（ 哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司，哈爾濱 150069）

試驗(yàn)對(duì)重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗免疫SPF鴨后的免疫持續(xù)期進(jìn)行了研究。選用14日齡SPF鴨20只，其中10只鴨的腿部肌肉接種免疫滅活疫苗，劑量為0.5 mL·只-1，另10只不接種的鴨作為對(duì)照組。結(jié)果表明，免疫后14 d可以產(chǎn)生較高的免疫力，H5N1 Re-8株的抗體效價(jià)平均增值為5.6 log2，H7N9 H7-Re-1株的抗體效價(jià)平均增值為6.6 log2。到35 d產(chǎn)生的HI抗體效價(jià)平均值達(dá)到高峰，H5N1 Re-8株的抗體效價(jià)平均增值為8.6 log2，H7N9 H7-Re-1株的抗體效價(jià)平均增值為9.5 log2。第120天H5N1 Re-8株抗體效價(jià)平均值為4 log2，H7N9 H7-Re-1株的抗體效價(jià)平均值均為5 log2，為抗體的保護(hù)臨界值。根據(jù)此數(shù)據(jù)分析，一次免疫的免疫保護(hù)期約為120 d。

重組禽流感病毒；SPF鴨；二價(jià)滅活疫苗；免疫

1 試驗(yàn)材料

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

SPF鴨購(gòu)于維科生物技術(shù)有限公司，隔離飼養(yǎng)。

1.2 疫苗

試驗(yàn)用疫苗為市售的某廠家生產(chǎn)的重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗（H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re-1株）產(chǎn)品批號(hào)為201701，生產(chǎn)日期為20170616。

1.3 血清檢測(cè)

血清檢測(cè)所用的H5N1 Re-8株和H7N9 H7-Re-1株標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清購(gòu)買(mǎi)于維科生物技術(shù)有限公司。

2 試驗(yàn)方法

選用14日齡SPF鴨20只，分為兩組，每組10只，其中第一組10只鴨的腿部肌肉注射重組禽流感病毒（H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re-1株）亞型二價(jià)滅活疫苗0.5 mL，第二組的10只鴨不進(jìn)行免疫，作為對(duì)照組。兩組SPF鴨分別飼養(yǎng)在隔離器中。1~60 d內(nèi)，每7 d采血1次；60 d后，每14 d采血1次，直至120 d。采血后將分離的血清置于-20℃保存?zhèn)溆?。按現(xiàn)行《中國(guó)獸藥典》附錄中的紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)法進(jìn)行HI抗體效價(jià)測(cè)定。按照國(guó)家動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫計(jì)劃中的要求，抗體保護(hù)臨界值定為4 log2。

3 試驗(yàn)結(jié)果

重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗免疫SPF鴨，血清中HI抗體水平消長(zhǎng)規(guī)律測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1和圖1。

表1 SPF鴨免疫重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗抗體效價(jià)平均值（log2）

圖1 SPF鴨免疫重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗抗體效價(jià)平均值

由表1可知，免疫SPF鴨后，第7天開(kāi)始產(chǎn)生抗體，第14~21天高于保護(hù)臨界值，并逐漸升高，第35天達(dá)到抗體的高峰值，此后逐漸下降。第120天下降至抗體的保護(hù)臨界值。根據(jù)以上的數(shù)據(jù)分析，一次免疫的免疫保護(hù)期約為120 d。

4 討論

SPF鴨采用重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗免疫后，在同一時(shí)間點(diǎn)上，H5N1 Re-8株與H7N9 H7-Re-1株的抗體水平稍有差異，H5N1 Re-8株的抗體效價(jià)平均值比H7N9 H7-Re-1株的抗體效價(jià)平均值低約1個(gè)滴度。

當(dāng)前，疫苗免疫依然是防控禽流感的主要措施。水禽不僅是AIV的重要儲(chǔ)存宿主，而且其本身也可以感染發(fā)病[1-4]。然而，一些養(yǎng)殖戶(hù)仍然對(duì)水禽禽流感的預(yù)防工作不太重視，對(duì)水禽不進(jìn)行免疫疫苗。試驗(yàn)結(jié)果表明，重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗對(duì)鴨具有良好的免疫原性，僅免疫1次，免疫后7 d可產(chǎn)生抗體，在免疫后14 d的抗體水平下就可以達(dá)到保護(hù)作用。免疫35d后抗體水平逐漸開(kāi)始下降，到120 d時(shí)，抗體水平下降到保護(hù)的臨界值?？傮w看來(lái)，一次免疫保護(hù)的時(shí)間為120 d，難以達(dá)到理想的效果。下一次試驗(yàn)，將考慮進(jìn)行二次免疫，以提高抗體效價(jià)和抗體的持續(xù)時(shí)間。

試驗(yàn)中所使用的鴨為SPF鴨，當(dāng)對(duì)當(dāng)?shù)仞B(yǎng)殖的鴨子進(jìn)行免疫時(shí)，要根據(jù)實(shí)際情況及母源抗體的情況，進(jìn)行抗體持續(xù)期的測(cè)定，以制定合理的免疫程序。

[1]GB/T18936-2003.高致病性禽流感診斷技術(shù)[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2003.

[2] 沈欣悅,程旭,劉梅,等.重組禽流感病毒滅活疫苗（H5N1亞型）對(duì)鴨和鵝的免疫效果觀察[J].中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào),2013,21（4）:40-45.

[3] 王明芳,鄧國(guó)華,楊孝樸,等.兩株鴨源H5N1亞型禽流感病毒的序列分析及致病性研究[J].中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào),2012,34（11）:854-858.

[4]劉安芳.水禽,流感病毒擴(kuò)大器——淺談水禽流感的綜合防制[J]. 中國(guó)動(dòng)物保健,2008（7）:86-89.

Immune Duration Test of SPF Duck Immunized with Divalent Inactivated Recombinant Avian Influenza Virus(H5+H7)Vaccine

SUN Dejun,FENG Yannan,QIN Lixin

（Harbin Pharmaceutical Group Biological Vaccine Co.,Ltd.,Harbin 150069,China）

This study was conducted to investigate the immune persistence of recombinant avian influenza virus(H5+H7)bivalent inactivated vaccine after immunization with SPF duck.Twenty SPF ducks aged 14 days were selected.In each of the 10 ducks,the leg muscles were immunized with inactivated vaccines,and each of which was 0.5mL.Moreover,10 ducks without vaccination were used as control group.The aver?age value of antibody titer of H5N1 Re-8 strain was 5.6 log2,and the average value of antibody titer of H7N9 H7-Re-1 strain was 6.6 log2.The average titer of HI antibody reached the peak at 35 days,and the average titer of antibody titer of H5N1 Re-8 strain was 8.6 log2,and the average titer of antibody titer of H7N9 H7-Re-1 strain was 9.5 log2.On the 120th day,the average titer of antibody titer of H5N1 Re-8 strain was 4 log2,and the average titer of antibody titer of H7N9 H7-Re-1 strain was 5 log2,which was the critical value of antibody protection.According to the data analysis,the immune protection period of the first immunization was about 120 days.

recombinant avian influenza virus;SPF duck;bivalent inactivated vaccine;immunity

S834；S852.65+9.5

A

1001-0084（2017）11-0037-02

2017-10-18

孫德君（1980-），女，黑龍江勃利人，博士，高級(jí)獸醫(yī)師，主要從事禽用疫苗研發(fā)。