陳 婷

（杭州醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，浙江 杭州 310053）

杭白菊提 取物效應(yīng)成分木犀草素和芹菜素在大鼠肝組織中分布情況的測(cè)定方法

陳 婷

（杭州醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，浙江 杭州 310053）

目的：分析用HPLC（高效液相色譜）法測(cè)定大鼠肝組織中木犀草素和芹菜素水平的效果。方法：對(duì)大鼠的肝組織進(jìn)行處理，并用HPLC法測(cè)定其肝組織中木犀草素和芹菜素的水平。結(jié)果：用HPLC法測(cè)定大鼠肝組織中木犀草素和芹菜素水平的準(zhǔn)確度、精密度及專屬性均符合要求。結(jié)論：用HPLC法可準(zhǔn)確、靈敏地測(cè)定大鼠肝組織中木犀草素和芹菜素的水平。

杭白菊提取物；高效液相色譜法；木犀草素；芹菜素

杭白菊（Chrysanthemum morifolium Ramat，CME）是一種菊科多年生草本植物的頭狀花序，多產(chǎn)于浙江桐鄉(xiāng)、海寧、嘉興等地。中醫(yī)認(rèn)為，杭白菊具有疏風(fēng)散熱、養(yǎng)肝明目、清心補(bǔ)腎的功效?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究證實(shí)，杭白菊提取物具有抗氧化、抗炎、保護(hù)心血管和抗癌等作用[1-4]。木犀草素和芹菜素是杭白菊提取物的主要效應(yīng)成分。為了分析用HPLC法測(cè)定大鼠肝組織中木犀草素和芹菜素水平的效果，筆者進(jìn)行了以下研究。

1 實(shí)驗(yàn)儀器、藥品和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

1）Agilent 1100型高效液相色譜儀。2）Spectra Max M2型熒光分光光度儀。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品

1）木犀草素對(duì)照品和芹菜素對(duì)照品（均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，對(duì)照品純度＞99%）。2）杭白菊提取物。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

Sprague-Dawley大鼠，雄性，體重為200～230 g（由浙江醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物質(zhì)量合格證：醫(yī)動(dòng)字第22-2001001號(hào)）。嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的飼養(yǎng)、管理標(biāo)準(zhǔn)對(duì)大鼠進(jìn)行飼養(yǎng)和管理。飼養(yǎng)、管理方法是：將大鼠置于溫度為22±2 ℃、濕度為50±10%的空調(diào)間內(nèi)進(jìn)行飼養(yǎng)。在實(shí)驗(yàn)前12 h，對(duì)大鼠進(jìn)行禁食處理。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 色譜條件

1）分析柱為Agilent SB-C18型分析柱 (250 mm × 4.6 mm, 5 μm)。2）保護(hù)柱為Agilent SB-C18型保護(hù)柱(10 mm× 4.6 mm, 5 μm)。3）流動(dòng)相為甲醇、乙腈和0.2%的磷酸溶液(35：10：55，v/v/v)。4）檢測(cè)流速為1.0 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為350 nm，檢測(cè)柱溫為30 ℃，進(jìn)樣量為50 μl。

2.2 對(duì)照品混合液的制備

用甲醇將適量的木犀草素對(duì)照品配制成508.0 μg·mL-1的木犀草素對(duì)照品單一儲(chǔ)備液。用甲醇將適量的芹菜素對(duì)照品配制成502.0 μg·mL-1的芹菜素對(duì)照品單一儲(chǔ)備液。2）用甲醇將木犀草素對(duì)照品單一儲(chǔ)備液和芹菜素對(duì)照品單一儲(chǔ)備液稀釋成不同濃度的對(duì)照品混合液將上述對(duì)照品混合液置于4℃的低溫箱中待用。

2.3 大鼠肝組織樣品的采集

采用腹主動(dòng)脈放血法處死大鼠，迅速取出其肝組織，并將其肝組織置于生理鹽水中。2）將肝組織從生理鹽水中取出，用濾紙吸干肝組織表面上的水分，然后對(duì)其進(jìn)行稱重。3）用生理鹽水將肝組織制成肝組織勻漿液，并將肝組織勻漿液置于－20 ℃的低溫箱中待用。

2.4 肝組織勻漿液的預(yù)處理

1）將1.0 ml濃度為6.0 mol·L-1的鹽酸溶液緩慢加入到0.5 ml的肝組織勻漿液中，邊加邊漩渦振蕩肝組織勻漿液。2）對(duì)肝組織勻漿液進(jìn)行80 ℃的水浴水解，并不時(shí)對(duì)其進(jìn)行振搖。1.5 h后，將肝組織勻漿液置于冰浴中冷卻。3）在肝組織勻漿液中加入3.0 ml的提取溶劑（乙酸乙酯：正己烷＝80：20），并對(duì)肝組織勻漿液進(jìn)行5 min的漩渦振蕩。3）對(duì)肝組織勻漿液進(jìn)行10 min的離心處理，離心速度為3500 rpm。4）完成離心處理后，取肝組織勻漿液的上清液2.0 ml。

2.5 測(cè)定方法

用HPLC法測(cè)定肝組織勻漿液中木犀草素和芹菜素的水平。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)結(jié)果

木犀草素和芹菜素的理論板數(shù)均不低于8000，兩者的分離度均符合要求（大于1.5），兩者儀器精密度試驗(yàn)的RSD分別為0.88%和0.89%。

3.2 肝組織樣品中木犀草素和芹菜素水平測(cè)定方法的專屬性

在本實(shí)驗(yàn)的色譜條件下，木犀草素和芹菜素的分離度良好，組織樣品中內(nèi)源性物質(zhì)不干擾測(cè)定結(jié)果，可確保分析方法的專屬性。

3.3 測(cè)定肝組織樣品中木犀草素和芹菜素水平的標(biāo)準(zhǔn)曲線

測(cè)定木犀草素的標(biāo)準(zhǔn)曲線為A＝0.7557C-20.52（n=7,r=0.9993），線性范圍為27.60～1473ng·mL-1。測(cè)定芹菜素的標(biāo)準(zhǔn)曲線為A＝0.7933C-0.7063（n=7, r=0.9998）,線性范圍為28.20～1506ng·mL-1。

3.4 肝組織樣品中木犀草素和芹菜素的回收率和測(cè)定精密度

理論濃度為110.5 ng·mL-1的木犀草素溶液中木犀草素的絕對(duì)回收率為77.9%，方法回收率為97.3%，日內(nèi)測(cè)定精密度為5.1%，日間測(cè)定精密度為4.3%。理論濃度為442.0 ng·mL-1的木犀草素溶液中木犀草素的絕對(duì)回收率為72.9%，方法回收率為95.0%，日內(nèi)測(cè)定精密度為2.9%，日間測(cè)定精密度為2.6%。理論濃度為1104 ng·mL-1的木犀草素溶液中木犀草素的絕對(duì)回收率為74.3%，方法回收率為103.8%，日內(nèi)測(cè)定精密度為1.6%，日間測(cè)定精密度為1.3%。理論濃度為113.0 ng·mL-1的芹菜素溶液中芹菜素的絕對(duì)回收率為77.5%，方法回收率為96.4%，日內(nèi)測(cè)定精密度為5.0%，日間測(cè)定精密度為4.3%。理論濃度為451.8 ng·mL-1的芹菜素溶液中芹菜素的絕對(duì)回收率為73.5%，方法回收率為95.9%，日內(nèi)測(cè)定精密度為4.1%，日間測(cè)定精密度為4.8%。理論濃度為1130 ng·mL-1的芹菜素溶液中芹菜素的絕對(duì)回收率為76.4%，方法回收率為102.4%，日內(nèi)測(cè)定精密度為1.6%，日間測(cè)定精密度為3.4%。詳見表1。

表1 肝組織樣品中木犀草素和芹菜素的回收率和測(cè)定精密度 (n=5)Tab 1 Recovery and precision for luteolin and apigenin in liver sample（n=5）

4 討論

杭白菊是一種菊科多年生草本植物的頭狀花序。木犀草素和芹菜素是杭白菊提取物的主要效應(yīng)成分。為了分析用HPLC法測(cè)定大鼠肝組織中木犀草素和芹菜素水平的效果，筆者對(duì)SD大鼠的肝組織進(jìn)行處理，并用HPLC法測(cè)定其肝組織中木犀草素和芹菜素的水平。本次研究的結(jié)果顯示，用HPLC法測(cè)定大鼠肝組織中木犀草素和芹菜素水平的準(zhǔn)確度、精密度及專屬性均符合要求。

綜上所述，用HPLC法可準(zhǔn)確、靈敏地測(cè)定大鼠肝組織中木犀草素和芹菜素的水平。

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R917

B

2095-7629-（2017）14-0149-02

浙江醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)?？蒲许?xiàng)目（菊花提取物（CME）效應(yīng)成分的分布和代謝物研究2009XZA02）

陳婷，女，1982年10月出生，浙江杭州人，漢族，碩士學(xué)位，副教授，研究方向?yàn)樗幬锓治?/p>