高喜鳳

（平?jīng)鍪嗅轻紖^(qū)食藥監(jiān)局，甘肅 平?jīng)?744000）

高效液相色譜指紋圖譜法在測定白芍質(zhì)量中的應用價值

高喜鳳

（平?jīng)鍪嗅轻紖^(qū)食藥監(jiān)局，甘肅 平?jīng)?744000）

目的：探討高效液相色譜指紋圖譜法在測定白芍質(zhì)量中的應用價值。方法：采用高效液相色譜指紋圖譜法測定33批白芍樣品，總結高效液相色譜指紋圖譜法在測定白芍質(zhì)量中的應用價值。以乙腈（A）與磷酸水溶液（PH值為2.7，B）為流動相，在Scincehome C18柱的色譜條件下進行梯度脫洗。色譜峰的采集范圍為200～400 nm，檢測波長為230 nm，溫柱為20℃，進樣量為10 μl，流速為1.0 ml/min。結果：成功獲取白芍高效液相色譜指紋圖譜，指認出沒食子酸、兒茶素、4-O-沒食子酰白芍苷、白芍苷、沒食子酸甲酯、6-O-沒食子?；?β-D-吡喃葡萄糖和芍藥苷、（1，2，3，4，6）-五沒食子酰基葡萄糖、甲苯酸、6'-O-沒食子酰白芍苷、沒食子酸乙酯共計10個峰，且33個白芍樣品高效液相色譜指紋圖譜的相似度與聚類分析的結果基本近似。用高效液相色譜指紋圖譜法測定白芍的質(zhì)量具有較強的專屬性和較好的重復性。結論：用高效液相色譜指紋圖譜法測定白芍的質(zhì)量具有較強的專屬性和較好的重復性，既能完善白芍藥品的質(zhì)量控制，同時也能為科學評價白芍藥品的質(zhì)量提供參考和借鑒。

高效液相色譜指紋圖譜法；白芍質(zhì)量；應用價值

白芍具有養(yǎng)血調(diào)經(jīng)、柔肝止痛等功效，常用于治療頭痛、眩暈、脅痛、腹痛、四肢攣痛、月經(jīng)不調(diào)及盜汗諸證。另外，現(xiàn)代藥理學研究表明，白芍還具有提高免疫力和調(diào)節(jié)女性內(nèi)分泌的作用[1]。在本次研究中，筆者主要探討高效液相色譜指紋圖譜法在測定白芍質(zhì)量中的應用價值。

1 材料與方法

1.1 儀器

配置有Waters600型泵的Waters高效液相色譜儀、配置有四元梯度的洗脫泵、柱溫箱、在線脫氣機、2996型二極管陣列檢測器、Empower工作站及KQ3200型超聲波洗滌器。

1.2 試劑與材料

試劑：色譜純乙腈、色譜分析水、分析純乙醇、二氯甲烷、磷酸以及筆者自行分離提取的定性用對照品白芍苷、沒食子酰芍藥苷、芍藥苷、6-O-沒食子?；?β-D-吡喃葡萄糖、苯甲酸、4-O-沒食子酰白芍苷、沒食子酸甲酯、沒食子酸乙酯、（1，2，3，4，6）-五沒食子?；咸烟?、6'-O-沒食子酰白芍苷、兒茶素及沒食子酸。材料：33批白芍樣品均購自國內(nèi)各大藥店。

1.3 白芍指紋圖譜的建立

1.3.1 供試品溶液的制備：精密稱取2 g經(jīng)60目篩篩過的白芍粉末。將20 ml濃度為60%的乙醇加入到上述白芍粉末中進行回流處理，間隔2 h提取一次溶液，共提取3次。將3次提取的液體混合在一起，進行減壓處理，蒸除其中的乙醇，得到白色粉末。用二氯甲烷與乙酸乙酯對上述白色粉末進行萃取，減壓回收乙酸乙酯萃取液。殘渣用乙醇進行溶解并將其定容至10 ml的容量瓶中，晃動搖勻，在0.45 μm的濾網(wǎng)上過濾一遍，留置濾過溶液備用[2]。

1.3.2 色譜條件：色譜柱為Scincehome C18柱，以乙腈（A）與磷酸水溶液（PH值為2.7，B）作為流動相。檢測波長為230 nm，進樣量為10 μl，柱溫為20℃，流速為1.0 ml/min。

1.4 白芍主要成分含量的測定

1.4.1 色譜條件：白芍主要成分含量測定的色譜條件與1.3.2相同。

1.4.2 制備對照品溶液：分別精密稱取劑量為9.6 mg的沒食子酸、5.1 mg的白芍苷、2.8 mg的沒食子酸乙酯、1.9 mg的兒茶素、6.4 mg的芍藥苷、1.0 mg的沒食子甲酯。用10 ml容量瓶盛裝上述樣品。用甲醇對上述樣品進行溶解，然后將溶液定容至刻度。將上述溶液搖晃均勻，用0.45 μm的微孔濾膜進行過濾，留取濾過溶液備用。

1.4.3 制備供試品溶液：精密稱取2 g經(jīng)60目篩篩過的白芍粉末。將10 ml濃度為60%的乙醇加入到上述白芍粉末中進行回流處理，間隔2 h提取一次溶液，共提取3次。將3次提取的液體混合在一起，進行減壓處理，蒸除其中的乙醇，得到白色粉末。分別使用二氯甲烷與乙酸乙酯對上述白色粉末進行萃取，減壓回收乙酸乙酯萃取液。殘渣用乙醇進行溶解并將其定容至10 ml的容量瓶中，晃動搖勻，在0.45 μm的濾網(wǎng)上過濾一遍，留置濾過溶液備用。

1.4.4 白芍主要成分含量測定方法的驗證 將0.2 ml、0.4 ml、0.8 ml、1.0 ml、1.2 ml、1.6 ml、2.0 ml的對照品溶液分別裝入10 ml的容量瓶中，用甲醇定容至刻度，并搖晃均勻。取上述溶液10 μl，重復進樣3次，注入高效液相色譜儀中，測量色譜的峰面積。橫坐標取對照溶液濃度，縱坐標取峰面積，建立標準曲線圖，獲取回歸方程的線性范圍。

2 結果

2.1 用高效液相色譜指紋圖譜法測定白芍質(zhì)量的專屬性

通過向高效液相色譜儀中注入10 μl的白芍提取溶劑后所獲得的色譜圖得知，測定白芍樣品并未受到提取溶劑與液相系統(tǒng)的影響，這充分說明用高效液相色譜指紋圖譜法測定白芍的質(zhì)量具有較強的專屬性。

2.2 用高效液相色譜指紋圖譜法測定白芍質(zhì)量的重復性

參考1.3.1項的操作步驟制備供試品溶液，進樣后獲得的色譜圖顯示各共有峰相對保留時間與相對峰面積的RSD均低于3.0%，這充分說明用高效液相色譜指紋圖譜法測定白芍的質(zhì)量具有較好的重復性。

2.3 白芍高效液相色譜指紋圖譜的建立

參照1.3.2項的色譜條件依次進33批白芍樣品與11批對照品，獲得相應的色譜圖像。指認出沒食子酸、兒茶素、4-O-沒食子酰白芍苷、白芍苷、沒食子酸甲酯、6-O-沒食子?；?β-D-吡喃葡萄糖和芍藥苷、（1，2，3，4，6）-五沒食子?；咸烟?、甲苯酸、6'-O-沒食子酰白芍苷、沒食子酸乙酯共計10個峰。

2.4 白芍樣品高效液相色譜指紋圖譜的相似度

參照1.3.1項的操作方法將33批白芍樣品制備成供試品溶液，根據(jù)各樣本圖譜與對照圖譜的相似度可將這33批白芍樣品的相似度分為相似度在0.750～1.00之間（第1類）與相似度低于0.750（第2類）兩種。

2.5 白芍樣品的聚類分析

分析33批白芍樣品的指紋圖譜，對各指紋圖譜相對于樣品稱樣量的表觀含量進行計算，得到9×33階原始數(shù)據(jù)矩陣。據(jù)此矩陣得知33批白芍樣品分布在九維特征空間，同類相聚，異類相分。聚類分析顯示白芍樣品可分兩大類，S1、S4～S30、S32、S33為第1類樣品，S2、S3、S31為第2類樣品。第1類樣品的質(zhì)量良好，化學成分相似；第2類樣品化學成分的差異較大，質(zhì)量一般。

2.6 用高效液相色譜指紋圖譜法測定白芍樣品中6種化合物的回歸方程與線性范圍

用高效液相色譜指紋圖譜法測定白芍樣品中6種化合物的回歸方程與線性范圍詳見表1。

表1 用高效液相色譜指紋圖譜法測定白芍樣品中6種化合物的回歸方程與線性范圍

3 討論

白芍的有效成分主要包括芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷等。但這些有效成分的含量受白芍的產(chǎn)地、采收時間、品種、氣候、加工方法等多種因素的影響。因此，采用有效的方法對白芍進行質(zhì)量檢測十分必要[3]。近年來的臨床研究表明，用高效液相色譜指紋圖譜法測定白芍質(zhì)量的效果顯著。

本次研究的結果證實，用高效液相色譜指紋圖譜法測定白芍的質(zhì)量具有較強的專屬性和較好的重復性，既能完善白芍藥品的質(zhì)量控制，同時也能為科學評價白芍藥品的質(zhì)量提供參考和借鑒。

[1] 嚴倩茹,鄔偉魁.基于HPLC指紋圖譜技術的白芍及其制劑質(zhì)量控制[J].中國執(zhí)業(yè)藥師,2016,13(11)：35-38.

[2] 童黃錦,白發(fā)平,汪小莉,等.不同產(chǎn)地白芍藥品的指紋圖譜研究[J].中醫(yī)學報 ,2014,29(9)：1326-1329.

[3] 馬玉,郭力,黃玉慧,等.白芍原藥材與不同炮制加工品的高效液相色譜對比研究[J].成都中醫(yī)藥大學學報,2012,35(4)：42-45.

R927.2

B

2095-7629-（2017）14-0069-03

高喜鳳，女，1974年4月出生，甘肅平?jīng)鋈?，本科學歷，主管中藥師，研究方向為中藥鑒定與制劑