翁 旭，李勁松

(1.廣東省汕頭市中心醫(yī)院口腔科 515031；2.中山大學(xué)孫逸仙紀念醫(yī)院口腔科，廣州 510120)

腮腺癌組織PAX2和PAX8表達聯(lián)合預(yù)測其根治術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的價值

翁 旭1，李勁松2△

(1.廣東省汕頭市中心醫(yī)院口腔科 515031；2.中山大學(xué)孫逸仙紀念醫(yī)院口腔科，廣州 510120)

腮腺腫瘤；成對盒基因2；成對盒基因8；根治術(shù)；復(fù)發(fā)；轉(zhuǎn)移；關(guān)系

腮腺癌的臨床發(fā)病較為少見，其治療以手術(shù)治療為主，常輔以圍術(shù)期放化療綜合治療[1]。然而，雖然腮腺癌的綜合治療已取得較大進展，其術(shù)后發(fā)生復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的仍較多，可導(dǎo)致不良預(yù)后情況的發(fā)生[2]。因此，對腮腺癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移等進行評估并盡早進行干預(yù)具有重要意義。腮腺癌的發(fā)生與多種基因相關(guān)[3]。成對盒基因2(PAX2)和成對盒基因8(PAX8)均是與癌癥發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)的因子[4-5]。因此，PAX2和PAX8亦可能參與腮腺癌的發(fā)生、發(fā)展，可能成為其病情和預(yù)后評估參考指標。然而目前關(guān)于PAX2和PAX8在腮腺癌中的表達及其作用機制尚不明確。因此，本研究采用免疫組織化學(xué)法檢測腮腺癌根治術(shù)治療患者手術(shù)切除組織中PAX2和PAX8蛋白表達情況，并分析了其與術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的關(guān)系及其預(yù)測術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的價值，旨在為腮腺癌根治術(shù)預(yù)后評估干預(yù)提供參考，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2011年1月至2013年7月于汕頭市中心醫(yī)院行腮腺頸聯(lián)合根治術(shù)治療的腮腺癌患者46例為研究對象。46例腮腺癌患者中男25例，女21例，年齡23～75歲，平均(58.98±8.66)歲。納入標準：患者均經(jīng)術(shù)前影像學(xué)檢查及術(shù)中冰凍病理檢查確診為原發(fā)性腮腺癌，淋巴結(jié)陽性，無手術(shù)禁忌證；排除標準：排除合并其他口腔疾病、惡性腫瘤、嚴重肝腎功能障礙、術(shù)前已發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移者及治療期間死亡患者。最終納入患者46例，病理類型均為腺癌，TNM分期Ⅱ期25例，Ⅲ期18例，Ⅳ期3例。研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審核批準，且患者均已簽署知情同意書。

1.2治療方法 患者均由同一臨床腮腺切除手術(shù)經(jīng)驗豐富的醫(yī)師行腮腺頸聯(lián)合根治術(shù)治療，術(shù)后均隨訪至少3年，期間每半年門診隨訪1次，隨訪主要內(nèi)容為腮腺癌復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移情況，有不適者隨時到院復(fù)診治療，隨訪截止日期為2016年7月30日，期間無患者失訪，隨訪率100.00%(46/46)。

1.3觀察指標和檢測方法 采用免疫組織化學(xué)法檢測患者手術(shù)切除腮腺癌組織及癌旁組織中PAX2和PAX8蛋白表達水平，手術(shù)切除標本均經(jīng)37%甲醛固定并常規(guī)行石蠟包埋。檢測前采用切片機將標本切成厚度為0.3 μm的連續(xù)切片，常規(guī)進行切片的烤制，行梯度酒精脫蠟處理，檸檬酸微波抗原熱修復(fù)，修復(fù)完成后滴加雙氧水去除氧化酶活性，滴加抗體，以磷酸緩沖鹽溶液(PBS)染色設(shè)置空白對照，將切片置于室溫中孵育過夜。第2天滴加DAB顯色液顯色，在顯微鏡下觀察顯色滿意后行蘇木精復(fù)染、脫水、二甲苯透明，并采用中性樹膠進行封片。隨機選擇10個高倍視野進行病理切片的觀察，以發(fā)現(xiàn)細胞核出現(xiàn)棕黃色染色為陽性標準(圖1、2)，統(tǒng)計PAX2和PAX8蛋白表達情況。由專門護士統(tǒng)計隨訪期間復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移情況并復(fù)發(fā)率和轉(zhuǎn)移率。

圖1 腮腺癌組織PAX2蛋白表達圖片(×400)

1.4統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS19.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行分析。計數(shù)資料以百分率表示，采用χ2檢驗比較，采用Logistic回歸分析法分析腮腺癌組織PAX2和PAX8表達水平與其根治術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的關(guān)系。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

圖2 腮腺癌組織PAX8蛋白表達圖片(×400)

2 結(jié) 果

2.1腮腺癌組織和癌旁組織中PAX2和PAX8蛋白陽性表達率比較 腮腺癌組織PAX2和PAX8蛋白陽性表達率分別為76.09%和69.57%，高于癌旁組織的26.09%和28.26%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 腮腺癌組織和癌旁組織中PAX2和PAX8蛋白陽性表達率比較[n(%)]

2.2腮腺癌根治術(shù)預(yù)后情況分析 腮腺癌根治術(shù)治療患者隨訪3年出現(xiàn)局部復(fù)發(fā)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的例數(shù)分別為19例和16例，其局部復(fù)發(fā)率和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率分別為41.30%(19/46)和34.78%(16/46)，腮腺癌根治術(shù)治療患者復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移發(fā)生率高，預(yù)后情況較差，急需改善。

2.3腮腺癌組織不同PAX2和PAX8蛋白表達情況與患者的復(fù)發(fā)率和轉(zhuǎn)移率比較 PAX2蛋白陽性表達患者的復(fù)發(fā)率和轉(zhuǎn)移率均高于其陰性表達患者，PAX8蛋白陽性表達患者的復(fù)發(fā)率和轉(zhuǎn)移率亦均高于其陰性表達患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 腮腺癌組織不同PAX2和PAX8蛋白表達情況患者的復(fù)發(fā)率和轉(zhuǎn)移率比較[n(%)]

2.4腮腺癌組織PAX2和PAX8表達情況與其根治術(shù)預(yù)后的關(guān)系分析 Logistic回歸分析結(jié)果顯示，腮腺癌組織PAX2和PAX8表達水平與其根治術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移均密切相關(guān)(P<0.05)，見表3。

表3 腮腺癌組織PAX2和PAX8表達情況與其根治術(shù)預(yù)后的關(guān)系

2.5腮腺癌組織PAX2和PAX8表達情況預(yù)測其術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的價值分析 腮腺癌組織PAX2和PAX8表達水平預(yù)測其術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的價值良好，其中以PAX2陽性+PAX8陽性預(yù)測其術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的價值最優(yōu)，見表4。

表4 腮腺癌組織PAX2和PAX8表達情況預(yù)測其術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的價值(%)

3 討 論

近年來隨著生活方式的改變及老齡化的不斷發(fā)展，各類惡性腫瘤的發(fā)生呈現(xiàn)不斷增加的趨勢。腮腺癌是口腔頜面部腫瘤中較為常見的惡性腫瘤之一，由于其特殊的解剖位置及臨床分期，且其類型繁多，其術(shù)前一般不行針吸和活檢診斷，其診斷多數(shù)靠術(shù)中冰凍切片檢查治療，并根據(jù)腫瘤類型和生長情況確定手術(shù)方案和手術(shù)范圍[6]。腮腺癌根治術(shù)在進行腫瘤原發(fā)灶徹底切除的同時需行同側(cè)頸部淋巴清掃手術(shù)，并輔以放化療等綜合治療以達到最佳的手術(shù)治療效果[7]。然而盡管目前腮腺癌的診斷及其根治術(shù)得以發(fā)展，其術(shù)后仍?？沙霈F(xiàn)疾病的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移而影響預(yù)后[8]。本研究亦分析了腮腺癌根治術(shù)治療的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移情況，本研究結(jié)果顯示，腮腺癌根治術(shù)治療患者隨訪3年的局部復(fù)發(fā)率為41.30%，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率為34.78%，其復(fù)發(fā)率和轉(zhuǎn)移率均較高，可能造成死亡等不良預(yù)后情況的發(fā)生，急需改善。因此，對腮腺癌的預(yù)后情況進行早期評估和積極干預(yù)對改善其預(yù)后情況具有重要意義。

與其他惡性腫瘤一樣，腮腺癌的發(fā)生、發(fā)展受到多種基因的影響。PAX2是PAX基因家族的亞型之一，其編碼的轉(zhuǎn)錄因子對泌尿生殖系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)等重要系統(tǒng)的生長發(fā)育起著決定性的作用，且其在乳腺癌、卵巢癌等多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中亦具有重要作用[9-11]。因此，PAX2亦可能與腮腺癌的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)，可能用于其病情和預(yù)后評估。PAX8亦是PAX基因家族成員之一，其在核轉(zhuǎn)錄調(diào)控中具有重要作用，可調(diào)控甲狀腺、腎臟等的發(fā)育，近年來發(fā)現(xiàn)其在多種腫瘤中亦具有重要作用[12-13]。然而目前PAX8亦可能與腮腺癌的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)，可能用于其病情和預(yù)后評估。然而目前關(guān)于PAX2和PAX8與腮腺癌預(yù)后的關(guān)系尚不明確。因此，本研究采用免疫組織化學(xué)法檢測了行腮腺頸聯(lián)合根治術(shù)治療的腮腺癌患者手術(shù)切除腮腺癌組織及癌旁組織中PAX2和PAX8蛋白表達水平。本研究結(jié)果顯示，腮腺癌組織PAX2和PAX8蛋白陽性表達率明顯高于癌旁組織，提示PAX2和PAX8參與腮腺癌的發(fā)生、發(fā)展。且PAX2蛋白陽性表達患者的復(fù)發(fā)率和轉(zhuǎn)移率均高于其陰性表達患者，PAX8蛋白陽性表達患者的復(fù)發(fā)率和轉(zhuǎn)移率亦均高于其陰性表達患者，提示其可能與腮腺癌的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移等預(yù)后情況相關(guān)。進一步的Logistic回歸分析結(jié)果顯示，腮腺癌組織PAX2和PAX8表達水平與其根治術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移均密切相關(guān)，可能用于其預(yù)后情況評估。且腮腺癌組織PAX2和PAX8表達水平預(yù)測其術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的價值良好，其中以PAX2陽性和PAX8陽性預(yù)測其術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的價值最優(yōu)。這可能與PAX2和PAX8作為轉(zhuǎn)錄因子參與細胞增殖、分化、器官組織形成及腫瘤的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)[14-15]。腮腺癌術(shù)后組織中同時出現(xiàn)PAX2陽性和PAX8陽性患者需警惕其復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移等不良預(yù)后的發(fā)生，而PAX2和PAX8亦可能成為腮腺癌基因治療的靶基因。

綜上所述，腮腺癌組織PAX2和PAX8陽性表達率高且聯(lián)合預(yù)測其預(yù)后的價值良好，聯(lián)合檢測腮腺癌組織PAX2和PAX8蛋白表達有助于了解腮腺癌根治術(shù)預(yù)后，從而指導(dǎo)其預(yù)后干預(yù)，改善預(yù)后情況。

[1]李兗．腮腺惡性腫瘤的臨床特征及預(yù)后因素分析[J]．實用癌癥雜志，2015，20(3)：383-385．

[2]姜會霞．頭頸部癌瘤聯(lián)合根治術(shù)圍手術(shù)期護理[J]．中國誤診學(xué)雜志，2005，5(2)：367-368．

[3]Nikolic N,Anicic B,Carkic J,et al.High frequency of p16 and p14 promoter hypermethylation and marked telomere instability in salivary gland tumors[J].Arch Oral Biol,2015,60(11):1662-1666.

[4]朱穎．PAX2基因與腫瘤關(guān)系的研究進展[J]．實用腫瘤雜志，2015，30(3)：295-298．

[5]徐兵，孫多祥，康永軍，等．卵巢漿液性腫瘤中Pax8和Tubulin的表達及意義[J]．臨床與實驗病理學(xué)雜志，2014，30(7)：713-716．

[6]陳少卿，劉鈺，黎軍和，等．103例腮腺癌的治療療效和預(yù)后因素分析[J]．中國腫瘤臨床，2014，41(12)：797-800．

[7]石鈿印,彭歆,蔡志剛．術(shù)中液氮冷凍加術(shù)后放療在治療腮腺癌保留面神經(jīng)中的應(yīng)用[J]．現(xiàn)代口腔醫(yī)學(xué)雜志，2011，25(1)：7-11．

[8]冼淡，王磊，陳巨峰，等．不同類型腮腺癌41例臨床治療研究[J]．中國美容醫(yī)學(xué)，2015，24(18)：27-30．

[9]劉沖，郭慶，石群立，等．PAX2在卵巢漿液性腺癌中的表達及在MDACC分級系統(tǒng)中的應(yīng)用價值[J]．診斷病理學(xué)雜志，2012，19(4)：298-301．

[10]Wang M,Ma H.Paired box gene 2 is associated with estrogen receptor α in ovarian serous tumors:potential theory basis for targeted therapy[J].Mol Clin Oncol,2016,5(2):323-326.

[11]尹曉娜，董磊，陳玲，等．PAX2和P53在卵巢漿液性腫瘤中的表達及其意義[J]．溫州醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2013，43(7)：464-467．

[12]邢寶玲，葛素梅，劉孟璐，等．Pax8在女性生殖道腫瘤診斷與鑒別診斷中應(yīng)用價值[J]．臨床與實驗病理學(xué)雜志，2013，29(11)：1194-1197．

[13]Rosignolo F,Sponziello M,Durante C,et al.Expression of PAX8 target genes in papillary thyroid carcinoma[J].PLoS One,2016,11(6):e0156658.

[14]López-Urrutia E,Pedroza-Torres A,Fernández-Retana J,et al.PAX8 is transcribed aberrantly in cervical tumors and derived cell lines due to complex gene rearrangements[J].Int J Oncol,2016,49(1):371-380.

[15]張偉，于文娟，夏巖，等．碳酸酐酶Ⅸ、PAX2和PAX8在腎上皮性腫瘤中的表達及臨床病理意義[J]．中華病理學(xué)雜志，2013，42(7)：442-445．

ValueofparotidglandcarcinomatissuePAX2andPAX8expressionforjointlypredictingrecurrenceandmetastasisafterradicalsurgery

WengXu1，LiJinsong2△

(1.DepartmentofStomatology，ShantouMunicipalCentralHospital,Shantou,Guangdong515031,China; 2.DepartmentofStomatology,SunYat-SenMemorialHospital,SunYat-SenUniversity,Guangzhou,Guangdong510120,China)

parotid neoplasms;PAX2;PAX8;radical surgery;recurrence;metastasis;relationship

目的探討腮腺癌組織成對盒基因2(PAX2)和成對盒基因8(PAX8)表達聯(lián)合預(yù)測其根治術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的價值。方法以行腮腺頸聯(lián)合根治術(shù)治療的腮腺癌患者46例為研究對象。采用免疫組織化學(xué)法檢測其手術(shù)切除腮腺癌組織及癌旁組織中PAX2和PAX8蛋白表達水平。結(jié)果腮腺癌組織PAX2和PAX8蛋白陽性表達率分別為76.09%和69.57%，均高于癌旁組織的26.09%和28.26%(P<0.05)。腮腺癌根治術(shù)治療患者隨訪3年的局部復(fù)發(fā)率為41.30%，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率為34.78%。且PAX2蛋白陽性表達患者的復(fù)發(fā)率和轉(zhuǎn)移率均高于其陰性表達患者，PAX8蛋白陽性表達患者的復(fù)發(fā)率和轉(zhuǎn)移率亦均高于其陰性表達患者(P<0.05)。Logistic回歸分析結(jié)果顯示，腮腺癌組織PAX2和PAX8表達水平與其根治術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移均密切相關(guān)(P<0.05)。腮腺癌組織PAX2和PAX8表達水平預(yù)測其術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的價值良好，其中以PAX2陽性和PAX8陽性預(yù)測其術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的價值最優(yōu)。結(jié)論腮腺癌組織PAX2和PAX8表達水平與其根治術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移等預(yù)后情況的密切相關(guān)且聯(lián)合預(yù)測其預(yù)后的價值良好，聯(lián)合檢測腮腺癌組織PAX2和PAX8蛋白表達可作為腮腺癌根治術(shù)預(yù)后評估的參考指標。

R782.7

A

1671-8348(2017)31-4367-03

10.3969/j.issn.1671-8348.2017.31.016

翁旭(1980-)，副主任醫(yī)師，碩士，主要從事口腔醫(yī)學(xué)方面的研究?！?/p>

，E-mail:ljs_sysu@163.com。

ObjectiveTo investigate the value of parotid gland carcinoma tissue PAX2 and PAX8 expression for combined prediction of recurrence and metastasis after radical surgery.MethodsForty-six patients with parotid gland carcinoma treated by parotid gland joint neck radical operation served as the research subjects.The immunohistochemical method was applied to detect the PAX2 and PAX8 protein expression level in surgical removal parotid gland carcinoma tissues and tissues adjacent to carcinoma.ResultsThe PAX2 and PAX8 protein positive expression rates of parotid gland carcinoma tissue were 76.09% and 69.57% respectively,which were higher than 26.09% and 28.26% in the tissue adjacent to carcinoma (P<0.05).The local recurrence rate in the patients with parotid gland carcinoma radical operation and 3- year follow-up was 41.30%,and lymph node metastasis rate was 34.78%.Moreover the metastasis and recurrence rate in the patients with PAX2 protein positive expressing were higher than those in the patients with PAX2 negative expression,and the metastasis and recurrence rate in the patients with PAX8 protein positive expression were higher than those in the patients with PAX8 negative expression (P<0.05).The Logistic regression analysis results showed that parotid gland carcinoma tissue PAX2 and PAX8 expression levels had close correlation with the recurrence and metastasis after radical surgery were closely correlated (P<0.05).Parotid gland carcinoma tissue PAX2 and PAX8 expression levels for predicting the post-operative recurrence and metastasis had good value,in which the value of PAX2 positive and PAX8 positive expression for predicting the recurrence and metastasis was optimal.ConclusionParotid gland carcinoma tissue PAX2 and PAX8 expression levels are closely correlated with the prognosis situation such as recurrence and metastasis after radical surgery,moreover their combined detection has better value for predicting the prognosis,which can serve as the reference indicator for the prognosis assessment after radical operation of parotid gland carcinoma.

2017-04-10

2017-06-28)