衣艷秋 唐丹 袁英良 郭艷芹 魯英 陳智勇（吉林省白城市畜牧科學研究院 137000）

肉羊日糧苜蓿和燕麥草組合體外法試驗

衣艷秋 唐丹 袁英良 郭艷芹 魯英 陳智勇（吉林省白城市畜牧科學研究院 137000）

為研究本地苜蓿草和燕麥草的組合效應，本試驗采用單因子試驗設計，分為4個試驗組，苜蓿和燕麥草分別以80:20(1組)、 60:40(2組)、 40:60(3組)、 20:80(4組) 的比例組合進行體外發(fā)酵，結果表明：各個時間點上1組累計產氣量顯著高于其他3組（＜0.05）；1組NH3-N濃度顯著高于其他三組，差異顯著（＜0.05）；在12h之后，1組的總揮發(fā)性脂肪酸產量顯著高于其他3組（＜0.05）；4組微生物蛋白高于其他3組， 與3組差異不顯著（＞0.05）， 與 1組、 2組差異顯著（＜0.05）。結論：通過多項組合效應值綜合評定，得出苜蓿草與燕麥草的最佳比例為60:40。

體外法；肉羊；苜蓿草；燕麥草；組合效應

近年來粗飼料間的組合效應日益受到人們關注。正組合效應可提高粗飼料的消化率和采食量，負組合效應導致飼料有效能值的顯著下降。張吉鹍[1]等研究表明，山羊稻草基礎日糧補飼適量的苜?？商岣叩静菰诹鑫傅陌l(fā)酵率與微生物蛋白的合成效率，但當稻草基礎日糧補飼的苜蓿超過50%時，使得補飼苜蓿對提高稻草基礎日糧氮利用效率的組合效應降低。白城市地處吉林省西部屬于風沙鹽堿平原地帶，為改善地貌，白城地區(qū)主要種植抗鹽抗堿抗倒伏的牧草，主要有苜蓿草、燕麥草、貓尾草等。為研究本地牧草對肉羊飼喂效果，本試驗通過體外法比較苜蓿草和燕麥草的組合效應，對提高本地飼料利用率、節(jié)約飼料成本起推動作用，為本地牧草及畜牧的進一步研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 原料

試驗原料為苜蓿草和燕麥草，均來自于白城市畜牧科學研究院試驗基地。原料首先經65℃烘干，再以20目篩粉碎，放置在密封干燥環(huán)境中貯存，各原料營養(yǎng)成分見表1。

表1 原料營養(yǎng)成分（風干物質基礎) 單位：%

1.2 試驗動物及飼養(yǎng)管理

試驗選擇4只體況良好、體重相近（62±1.24)kg、安裝永久瘤胃瘺管的杜×寒F1代公羊作為試驗瘤胃液供體。正試期試驗羊單欄飼養(yǎng)，每天早8∶00和晚16∶00進行飼喂，先精后粗，精粗比為4∶6，自由采食、自由飲水。日糧組成及營養(yǎng)水平見表2。本試驗采用的試驗動物均來自于白城市畜牧科學研究院試驗基地。

表2 試驗日糧的配方組成和營養(yǎng)組成 單位：%

1.3 體外發(fā)酵裝置及瘤胃液配制

參照Menke等（1979)[2]的方法自制人工瘤胃發(fā)酵裝置，采用100ml注射器作為培養(yǎng)管。緩沖溶液的配制參照Mauricio等[3]的方法，包括5部分：微量元素溶液、碳酸鹽緩沖液、常量元素溶液、指示劑溶液和還原劑溶液。

2 試驗方法

2.1 試驗設計

試驗采用單因子試驗設計，試驗分為4個試驗組，苜蓿和燕麥草分別以 80∶20(1 組)、 60∶40(2 組)、 40∶60(3 組)、20∶80(4組)的比例組合進行體外發(fā)酵，每個組合3個重復。

2.2 瘤胃液的采集和體外培養(yǎng)

晨飼前2h從瘺管羊的瘤胃內采集足量的瘤胃液，經過4層紗布過濾，放入39℃保溫瓶中，通入2minCO2，與預熱到39℃的緩沖溶液1∶2混合備用。稱取0.2g樣品分裝到培養(yǎng)管中，迅速將30ml混合液分裝到培養(yǎng)管中，排盡空氣，封嚴針頭，記錄初始刻度，放入39℃恒溫震蕩水浴鍋中開始培養(yǎng)。分別于0、3、6、9、12、24、48h進行相關指標測定。

2.3 測定指標及方法

2.3.1 產氣量測定

底物為0.2g時累積產氣量的計算按文獻[4]提供的方法。

GPt=(200/W)×（V-V0)。

式中：GPt為樣品在t時刻的累積產氣量（ml)；V為樣品發(fā)酵rh后培養(yǎng)管的刻度讀數；V0為空白對照管的刻度讀數；W為樣品的干物質重（mg)。

2.3.2 pH值測定

用PHS-3C型酸度計測定pH值。

2.3.3 NH3-N測定

參照Makkar等[5]的嘌呤法進行測定。

2.3.4 微生物蛋白（MCP）的測定

采用差速離心后用凱氏定氮儀測定。

2.3.5 揮發(fā)性脂肪酸（VFA）測定

采用日本島津GC-2014氣相色譜儀依照標法測定。

2.3.6 計算組合效應值

計算方法參照文獻[6]提供的方法。

單項組合效應值（SFAEI)=(實測值-加權估算值)/加權估算值×100%

式中實測值為實際測定樣品的產氣量（GP)、氨態(tài)氮(NH3-N)、揮發(fā)性脂肪酸（VFA)及微生物蛋白（MCP)含量。

加權估算值=某種原料的實測值×所占百分比+另外一種原料的實測值×所占百分比

多項組合效應值（MFAEI）為各指標單項組合效應值之和。

2.4 數據處理與統(tǒng)計

采用Excel軟件和SPSS11.0軟件包進行數據處理和統(tǒng)計分析，試驗數據 “平均值±標準誤”表示，采用F檢驗對結果進行顯著性分析，＜0.05表示差異顯著。

3 結果與分析

3.1 累積產氣量

由表3可知，隨著發(fā)酵時間的延長，累計產氣量不斷增加。各個時間點上1組累計產氣量顯著高于其他3組（＜0.05）；隨著發(fā)酵時間的延長組建差異逐漸減小，在9h時，1組合2組差異不顯著（＞0.05），2組與3組差異不顯著（＞0.05），2組與3組顯著高于4組（＜0.05）； 在 48h時， 3組與4組差異不顯著（＞0.05）。

3.2 pH值

由表4可知，隨著發(fā)酵時間的延長，各組間的pH值緩慢下降。在發(fā)酵3h時，4組的pH值顯著高于1組（＜0.05）；6h之后，4組的組間差異不顯著（＞0.05）； 但總體上4組的pH值高于其他3組（＞0.05）。

3.3 NH3-N濃度

由表5可知，隨著發(fā)酵時間的延長，NH3-N濃度逐漸減少。在各個測定時間點，1組顯著高于其他3組，差異顯著（＜0.05），2組顯著高于3組和4組（＜0.05）， 3 組顯著高于4組（＜0.05）。

表3 苜蓿、燕麥草不同組合比例對發(fā)酵液累積產氣量的影響 單位：ml

表4 苜蓿、燕麥草不同組合比例對發(fā)酵液pH值的影響

表5 苜蓿、燕麥草不同組合比例對發(fā)酵液NH3-N濃度的影響 單位：mg/100ml

表6 苜蓿、燕麥草不同組合比例對發(fā)酵液總揮發(fā)性脂肪酸產量的影響 單位：mmol/L

3.4 總揮發(fā)性脂肪酸產量

由表6可知，隨著發(fā)酵時間的延長，總揮發(fā)性脂肪酸產量逐漸增多。在12h之后，4組的總揮發(fā)性脂肪酸增加幅度變大，1組的總揮發(fā)性脂肪酸產量顯著高于其他3組（＜0.05），2組顯著高于3組和4組（＜0.05），3組顯著高于4組（＜0.05）。

3.5 微生物蛋白產量

由表7可知，隨著發(fā)酵時間的延長，微生物蛋白產量逐漸增加，在24h時產量最大，隨后減少。在各個測定時間點，4組高于其他3組，與3組差異不顯著（＞0.05）， 與 1組、2組差異顯著（＜0.05）；在6h之后，3組與2組差異不顯著（＞0.05）， 與1組差異顯著（＜0.05）； 1組、 2組差異不顯著（＞0.05）。

3.6 組合效應的綜合評定

由表8可知，4組間組合效應評定結果，2組的產氣量效應值最高，1組的總揮發(fā)性脂肪酸效應值最高，2組的NH3-N效應值最高，1組的微生物蛋白效應值最高，通過多項組合效應值綜合評定，得出2組的綜合效應值最高。

表7 苜蓿、燕麥草不同組合比例對發(fā)酵液微生物蛋白產量的影響 單位：mg/mL

表8 組合效應綜合評定結果

4 討論

4.1 累積產氣量

產氣量是一個可以綜合反映飼料可發(fā)酵程度的指標，飼料中所含有的可發(fā)酵有機物含量越高，微生物活性越大，產氣量就會越高。由本試驗可知，隨著發(fā)酵時間的延長組間差異逐漸減小，說明組間的發(fā)酵程度趨于接近，燕麥草可以部分替代苜蓿草，燕麥草與苜蓿草間出現組合效應。同時隨著苜蓿草含量的減少產氣量減少，這與布同良研究的結果類似 [7]。

4.2 pH值

pH值反映飼料被利用程度，pH值低說明飼料產酸較多。粗纖維比淀粉更難被分解，產生揮發(fā)性脂肪酸少，因此，粗纖維含量高，pH值會升高。Depeters等[8]研究發(fā)現，瘤胃液pH在6.6～6.8之間時對于纖維素的消化分解最適宜，當pH低于6.4時會影響纖維素的消化。本試驗結果表明，在瘤胃發(fā)酵12～48h時適合纖維素發(fā)酵，各組飼料均得到很好分解利用，組合效應對pH的影響不顯著。

4.3 NH3-N濃度

NH3-N濃度是瘤胃內飼料蛋白降解及微生物對NH3-N利用的平衡情況，NH3-N濃度過高過低均不利于瘤胃微生物的生長繁殖。Owens[9]等指出，瘤胃內微生物蛋白合成所需的NH3-N濃度為0.35～29mg/100ml之間，本試驗產生的NH3-N濃度為7～27mg/100ml，可滿足瘤胃微生物對NH3-N濃度的需求。

4.4 總揮發(fā)性脂肪酸產量

飼料在瘤胃中經過發(fā)酵產生乙酸、丙酸、丁酸等揮發(fā)性脂肪酸，是草食家畜主要的能量源和合成脂肪的原料，總揮發(fā)性脂肪酸的提高表明底物消化率提高，本試驗結果表明，總揮發(fā)性脂肪酸產量自12h后增加顯著，且各時間點均隨苜蓿草比例的增加而增加，與張吉鹍等[10]研究的稻草與苜?；旌狭鑫阁w外發(fā)酵組合效應的結果相似。

4.5 微生物蛋白產量

由表7可知，微生物蛋白產量隨著時間的延長呈先增加后降低趨勢，在24h達到最大值，這可能與底物含量受限有關。在適宜pH條件下，微生物能充分將日糧蛋白質釋放的氨轉化為菌體蛋白質而用于自身的生長繁殖。研究發(fā)現，體外累積產氣量與MCP產量之間存在負相關關系。由本試驗結果可知隨著苜蓿草含量的增加微生物蛋白含量有所減少，這與張悅等[11]研究的結果類似。

4.6 組合效應的綜合評定

單一的指標不能完全反映底物的降解率，只有與其他反映瘤胃變化參數的指標綜合評定才能使得評定更加全面準確。本試驗評定飼料之間的組合效應時將累積產氣量、揮發(fā)性脂肪酸、微生物蛋白、NH3-N濃度進行綜合評價，結果得出苜蓿草與燕麥草的最佳配比為60∶40。

5 結論

通過綜合評價得出，飼喂本地杜寒雜交肉羊時苜蓿草和燕麥草的最佳配合比例為60∶40。

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