王志強，羅錦霞，李維嘉，蔡大川，林晨，梁潔怡

（中國廣州分析測試中心，廣東省化學危害應急檢測技術重點實驗室，廣東廣州510070）

拐棗中齊墩果酸含量的測定

王志強，羅錦霞，李維嘉，蔡大川，林晨，梁潔怡

（中國廣州分析測試中心，廣東省化學危害應急檢測技術重點實驗室，廣東廣州510070）

建立拐棗中齊墩果酸的含量測定方法。采用紫外分光光度法，對顯色劑用量，穩(wěn)定劑用量，水浴顯色時間，穩(wěn)定時間等因素分析最佳測定方法。結果表明：齊敦果酸提取的最佳試劑為75%的乙醇，以0.4 mL 50 g/L香草醛-冰醋酸為顯色劑，0.8 mL高氯酸為穩(wěn)定劑，70℃水浴反應25 min，在540 nm下測定吸光度得到齊墩果酸含量為4.72%，此方法為最佳測定方法。

拐棗；齊墩果酸；紫外分光光度法；提取；含量測定

拐棗，學名枳椇子，為鼠李科植物的帶肉質果柄的果實，其子實稱為枳椇子。分布安徽、浙江、江西、廣東、福建、湖北、湖南、廣西、陜西、四川、貴州、云南等省區(qū)，河南也有栽培。棗屬落葉喬木，高達10 m多；嫩枝、幼葉背面、葉柄和花序軸初有短柔毛，后脫落。葉片橢圓狀卵形、寬卵形或心狀卵形，長8 cm～16 cm，寬6 cm～11 cm，頂端漸尖，基部圓形或心形，常不對稱，邊緣有細鋸齒，表面無毛，背面沿葉脈或脈間有柔毛。兩義式聚傘花序頂生和腋生；花小，黃綠色，直徑約4.5 mm；花瓣扁圓形；花柱常裂至中部或深裂。果柄肉質扭曲，呈紅褐色；果實近球形，無毛，直徑約7 mm，灰褐色。果實形態(tài)似萬字符，故稱萬壽果[1]。拐棗具有很高的保健功效，如解酒作用、保肝活性作用、抗腫瘤作用、抗衰老作用、降壓利尿作用、鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛作用[2]。果柄含多量葡萄糖和蘋果酸鉀，經霜后甜，可生食或釀酒。藥理表明：三萜類和黃酮類為該屬植物的活性成分，具有抗甜味、抑制組胺釋放和保肝解救等作用[3]。

目前國內外對拐棗的研究相對較少，至今對其化學成分研究局限于黃酮類和多糖類的研究[4-7]，對其三萜類物質的含量研究主要也集中在三萜皂苷類物質的研究[8-9]，現就拐棗中三萜類化合物齊墩果酸的提取及含量測定進行研究[10-15]，對其三萜類化合物的開發(fā)利用提供依據。

1 材料與儀器

1.1 主要材料

拐棗為采集新鮮的野生拐棗，洗凈、晾曬、粉碎、過篩后，在105℃烘干至恒重，干燥器內保存?zhèn)溆谩?/p>

齊墩果酸標準樣品（91.7%）：中國食品檢定研究院；香草醛：阿拉丁試劑；冰醋酸、高氯酸、乙醇、三氯甲烷等：廣州化學試劑廠，分析純級；實驗室用水為去離子水。

1.2 主要儀器

UV-2450紫外可見分光光度計：日本島津公司；HWS24型電熱恒溫水浴鍋、DHG-9245A型電熱鼓風干燥箱：上海一恒科學儀器有限公司。

2 方法

2.1 標準溶液的配置

精密稱取齊墩果酸標準品，溶于乙醇溶液，配置成0.214 8 mg/mL的標準溶液。

2.2 最大波長的選擇

取配置好的標準溶液0.4 mL于10 mL比色管中，水浴蒸干，加入顯色劑（50 g/L的香草醛冰醋酸溶液）和的穩(wěn)定劑（高氯酸）反應后，在可見光區(qū)進行掃描，確定最大吸收波長。

2.3 顯色劑用量的選擇

取6份0.4 mL的標準溶液于10 mL比色管中，水浴蒸干，分別加入 0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL 的顯色劑和0.8 mL的穩(wěn)定劑，在70℃水浴下反應2 min，冰水冷卻，加入5 mL冰醋酸，在540 nm下測定吸光度。

2.4 穩(wěn)定劑用量的選擇

取7份0.4 mL的標準溶液于10 mL比色管中，水浴蒸干，分別加入 0.4 mL 的顯色劑和 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mL的穩(wěn)定劑，在70℃水浴下反應25 min，冰水冷卻，加入5mL冰醋酸，在540nm下測定吸光度。

2.5 水浴溫度的選擇

取5份0.4 mL的標準溶液于10 mL比色管中，水浴蒸干，加入0.4 mL的顯色劑和0.8 mL的穩(wěn)定劑，分別在 50、60、70、80、90 ℃水浴下反應 25 min，冰水冷卻，加入5 mL冰醋酸，在540 nm下測定吸光度。

2.6 顯色時間的選擇

取5份0.4 mL的標準溶液于10 mL比色管中，水浴蒸干，加入0.4 mL的顯色劑和0.8 mL的穩(wěn)定劑，在70 ℃水浴下，分別反應 5、10、15、20、25、30、35、40 min，冰水冷卻，加入5mL冰醋酸，在540nm下測定吸光度。

2.7 標準曲線的測定

吸取配置好的標準溶液 0.1、0.2、0.4、0.6、0.8 mL于10 mL比色管中，水浴蒸干，加入0.4 mL的顯色劑和0.8 mL的穩(wěn)定劑，在70℃水浴下反應25 min，冰水冷卻，加入5 mL冰醋酸后，在540 nm下測定吸光度，并繪制標準曲線。

2.8 測試方法的評價

2.8.1 測試方法的穩(wěn)定性

取5份0.4 mL的標準溶液于10 mL比色管中，水浴蒸干，加入0.4 mL的顯色劑和0.8 mL的穩(wěn)定劑，在70℃水浴下反應25 min，冰水冷卻，加入5 mL冰醋酸后，分別穩(wěn)定 10、20、30、40、50、60 min 后，在 540 nm下測定吸光度。

2.8.2 測試方法的精密性

取5份0.4 mL的標準溶液于10 mL比色管中，水浴蒸干，加入0.4 mL的顯色劑和0.8 mL的穩(wěn)定劑，在70℃水浴下反應25 min，冰水冷卻，加入5 mL冰醋酸后，在540 nm下測定吸光度。

2.9 樣品分析測試

取250 mL的磨口錐形瓶，精密稱取1 g烘干至恒重的試樣于其中，分別加入40 mL三氯甲烷、75%乙醇、75%甲醇、水，置于沸水浴中回流2 h，冷卻過濾后，再用40 mL相應的試劑將濾渣洗入錐形瓶中繼續(xù)水浴2 h后，冷卻過濾，收集兩次濾液于100 mL容量瓶中，定容進行紫外分析測試。

2.10 樣品加標回收率

將一定量的齊墩果酸標準溶液加入到拐棗試樣中，按最佳提取試液進行提取后，按確定方法要求進行測試。

3 結果與分析

3.1 最大波長的確立

將標準溶液在紫外可見光區(qū)掃描，結果如圖1，結果表明溶液在540 nm處有最大吸收。因此，選540 nm作為測定方法波長。

圖1 齊墩果酸標準溶液的光吸收曲線Fig.1 Ultaraviolet absorption speatrum of oleanolic acid

3.2 顯色劑用量的確定

不同用量的顯色劑測得吸光度變化如圖2。

圖2 顯色劑用量對吸光度影響Fig.2 The effect of the amount of the developer on the absorbance

結果顯示顯色劑用量在0.4 mL時吸光度達到最大，顯色效果最好，確定方法選用0.4 mL的顯色劑。

3.3 穩(wěn)定劑用量的確定

不同用量的穩(wěn)定劑測的吸光度變化如圖3。

圖3 穩(wěn)定劑用量對吸光度影響Fig.3 Effect of stabilizer on absorbance

結果顯示穩(wěn)定劑在0.8 mL時吸光度達到最大，確定方法選用0.8 mL的穩(wěn)定劑。

3.4 水浴溫度的確定

不同水浴溫度下測得的吸光度變化如圖4。

結果顯示在50℃～70℃的水浴溫度下吸光度變化平穩(wěn)，在70℃時穩(wěn)定在一個較好的吸收范圍，大于70℃后，吸光度突增，反應產物發(fā)生轉變，因此確定方法選用水浴溫度為70℃。

圖4 水浴溫度對吸光度影響Fig.4 The effect of water bath temperature on absorbance

3.5 顯色時間的確定

在顯色時間不一樣的條件下吸光度的變化如圖5所示。

圖5 顯色時間對吸光度影響Fig.5 The effect of color development on absorbance

顯色時間在25 min時達到最佳，確定方法選用25 min的顯色時間。

3.6 標準曲線的繪制

在540 nm處，測得各標準系列溶液的吸光度如圖6。

圖6 齊墩果酸標準溶液曲線Fig.6 The standard cueve of deanolic acid

以齊墩果酸含量對吸光度作回歸處理，得回歸方程：Y=0.006 9X+0.044 1，相關系數 R2=0.998 9，線性良好。

3.7 測試方法的穩(wěn)定性

標準試樣在不同穩(wěn)定時間點的吸光度如表1，結果顯示在60 min內基本穩(wěn)定，RSD=1.8%，具有較好的穩(wěn)定性。

表1 測定方法的穩(wěn)定性Table 1 The stability of the assay method

3.8 測定方法的精密性

將相同濃度的標準試樣多次測定后結果見表2，分析得出方法的精密性較好，RSD=1.2%。

表2 測定方法的精密性Table 2 The precision of the assay method

3.9 不同提取溶劑對拐棗中齊墩果酸的提取

拐棗試樣在三氯甲烷、75%乙醇、75%甲醇、水溶劑下提取效果如表3，分析得出75%乙醇溶液提取試液的齊墩果酸含量最高。

表3 不同溶劑提取試樣得出齊墩果酸的含量Table 3 Theoleanolic acid content was obtained by extracting the samples with different solvents

3.10 加標回收率

加標回收結果如表4，得出回收率為96.6%，RSD=1.2%。表明試樣方法滿足加標回收。

4 結論

通過對拐棗中齊墩果酸的不同提取試劑和影響含量測定的因素進行分析，結果顯示，各個因素對齊墩果酸的含量測定影響較大，提取的最佳試劑為75%的乙醇，含量測定的條件為0.4 mL的香草醛顯色劑，0.8 mL的高氯酸穩(wěn)定劑，水浴時間為25 min，水浴溫度70℃，測定波長為540 nm。在此條件下提取的拐棗中的齊墩果酸含量為4.72%，且精密性和穩(wěn)定性較好。拐棗中三萜類化合物的定性分析鑒別還有待進一步研究。

表4 回收率試驗結果Table 4 Recovery test results

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Determination of the Content of Oleanolic Acid in Turnjujube

WANG Zhi-qiang，LUO Jin-xia，LI Wei-jia，CAI Da-chuan，LIN Chen，LIANG Jie-yi
（Guangdong Provincial Key Laboratory of Emergency Test for Dangerous Chemicals，China National Analytical Center，Guangzhou，Guangzhou 510070，Guangdong，China）

A method for the content determination of oleanolic acid in turnjujube was established.Ultraviolet spectroscopy，which was the best method for the content determination of color reagent and stabilizer，the coloration time of water bath and reagent and stabilizer time.The results indicated that，for the oleanolic acid，ethanol solution（75%）was found to the best extraction reagent，Vanillic aldehydet（0.4 mL，50 g/L）acetic acid was used as color reagent.Perchloric acid（0.8 mL）was used as the stabilizer，all the reactants were conducted in water bath at 70℃for 25 minates.Then the absorbance of the oleanolic acid was measured under 540 nm.Finally，the content of oleanolic acid was determined to be 4.72%.This method was determined to be the optimum method.

turnjujube；oleanolic acid；UV spectrophotometry；extraction；determination of content

10.3969/j.issn.1005-6521.2017.23.026

廣東省省級科技計劃項目（2013B091604003、2014B070705001）

王志強（1986—），男（漢），助理研究員，本科，研究方向：食品分析測試。

2017-04-20