郭詩(shī)琦，南敏倫，赫玉芳，郜玉鋼，趙巖，張連學(xué)，何忠梅，*

（1.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)中藥材學(xué)院，吉林長(zhǎng)春130118；2.吉林省人參工程技術(shù)創(chuàng)新中心，吉林長(zhǎng)春130118；3.吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院，吉林長(zhǎng)春130012）

藍(lán)莓酒肝清膠囊的制備工藝研究

郭詩(shī)琦1，2，南敏倫3，赫玉芳3，郜玉鋼1，2，趙巖1，2，張連學(xué)1，2，何忠梅1，2，*

（1.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)中藥材學(xué)院，吉林長(zhǎng)春130118；2.吉林省人參工程技術(shù)創(chuàng)新中心，吉林長(zhǎng)春130118；3.吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院，吉林長(zhǎng)春130012）

確定藍(lán)莓酒肝清膠囊的最佳制備工藝。采用L9（34）正交設(shè)計(jì)法進(jìn)行試驗(yàn)，以指標(biāo)成分含量及提取率為考察指標(biāo)，利用綜合評(píng)分法對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，優(yōu)選最佳提取工藝。考察粉末的流動(dòng)性，輔料用量，測(cè)定膠囊的水分和裝量差異；醇提最佳工藝為70%乙醇，料液比1∶15（g/mL），回流提取2次，每次3 h。水提最佳工藝為料液比1∶15（g/mL），水煎提取3次，每次3 h。最佳成型工藝為可溶性淀粉與干浸膏粉末按質(zhì)量比1∶1混勻，制得的填充粉末流動(dòng)性好，吸濕性較??；藍(lán)莓酒肝清膠囊的制備工藝切實(shí)可行。

藍(lán)莓膠囊；制備工藝；正交設(shè)計(jì)；指標(biāo)成分；輔料

酒精性肝病（alcoholic liver disease，ALD）是由于長(zhǎng)期大量飲酒導(dǎo)致的一系列肝臟疾病，是我國(guó)目前繼病毒性肝炎之后的第二大肝臟疾患，嚴(yán)重危害人民健康。酒精性肝損傷分為急性酒精性肝損傷和慢性酒精性肝損傷。急性酒精性肝損傷是由于一次攝入過(guò)量酒精而造成肝功能損害，表現(xiàn)為食欲不振、惡心、肝部不適、黃疸等類急性肝炎癥狀。慢性酒精性肝損傷是由于長(zhǎng)期攝入酒精而導(dǎo)致肝細(xì)胞纖維化變性、壞死，肝臟免疫功能遭到破壞，常表現(xiàn)為酒精性脂肪肝、酒精性肝炎以及酒精性肝硬化[1-5]。中醫(yī)認(rèn)為酒為有熱有毒之品，過(guò)飲之必傷及脾胃肝膽而引發(fā)疾病?！侗静菥V目》中曰：“少飲則和氣血，多飲則殺人頃刻。”《諸病源候論》也認(rèn)為：“酒精有毒，有復(fù)大熱，飲之過(guò)多，故毒熱氣滲溢經(jīng)絡(luò)，浸溢臟腑，而生諸病也?！本凭愿螕p傷的形成是因?yàn)轱嬀七^(guò)度則導(dǎo)致脾胃損傷，濕熱內(nèi)生，脾失健運(yùn)，痰濕阻滯，氣機(jī)不暢，氣血不和而致[6-7]。

藍(lán)莓酒肝清膠囊是在傳統(tǒng)中醫(yī)理論基礎(chǔ)上，結(jié)合現(xiàn)代中藥有效物質(zhì)基礎(chǔ)研究成果，以吉林省特產(chǎn)藍(lán)莓為主要原料，與積雪草、梔子、白芍、丹參、姜黃等具有顯著保肝作用的藥食同源傳統(tǒng)中藥組方，自主研發(fā)的高端保健食品。本研究?jī)?yōu)選藍(lán)莓酒肝清膠囊的制備工藝，并研究了其抗酒精性肝損傷的作用，為藍(lán)莓酒肝清膠囊的進(jìn)一步開發(fā)和應(yīng)用提供了試驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

1.2 材料與試劑

藍(lán)莓、梔子、姜黃、丹參、積雪草、白芍：吉林省百草大藥房；標(biāo)準(zhǔn)品梔子苷（純度≥98%，批號(hào)：B21661）、芍藥苷（純度≥98%，批號(hào)：B21148）：上海源葉生物科技有限公司；北京二鍋頭：北京雙慶和酒業(yè)有限責(zé)任公司；聯(lián)苯雙酯片：江蘇鵬鰩藥業(yè)有限公司；0號(hào)膠囊殼：上海源葉生物科技有限公司；乙腈、甲醇為色譜純；其他試劑均為分析純；水為娃哈哈純凈水。

2 方法

2.1 提取工藝研究

藍(lán)莓酒肝清膠囊組方為：藍(lán)莓80 g，梔子150 g，姜黃100 g，丹參80 g，積雪草250 g，白芍100 g。本研究首先對(duì)其進(jìn)行提取工藝研究，其中藍(lán)莓、梔子、姜黃、丹參采用乙醇回流提取，在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，選用乙醇濃度、料液比、提取時(shí)間及提取次數(shù)4個(gè)因素，采用L9（34）正交試驗(yàn)表進(jìn)行正交試驗(yàn)，高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）測(cè)定提取物梔子苷含量，以梔子苷含量及提取率為指標(biāo)，優(yōu)選最佳醇提工藝。剩處方中的積雪草、白芍采用水煎煮提取，在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，選用料液比、煎煮時(shí)間及煎煮次數(shù)3個(gè)因素，采用L9（34）正交試驗(yàn)表進(jìn)行正交試驗(yàn)，HPLC法測(cè)定提取物芍藥苷含量，以芍藥苷及提取率為指標(biāo)，優(yōu)選最佳水提工藝[8]。

2.2 干粉流動(dòng)性考察

采用固定圓錐底法測(cè)定休止角：將兩只玻璃漏斗交錯(cuò)重疊固定在鐵架臺(tái)上，使一個(gè)漏斗的低端與另一個(gè)漏斗的內(nèi)側(cè)接觸，漏斗下放一個(gè)倒置的表面皿，測(cè)其外直徑（cm），漏斗出口與表面皿距離4 cm～6 cm之間，測(cè)定時(shí)使粉體緩慢通過(guò)上層漏斗，經(jīng)下層漏斗的緩沖慢慢堆積到表面皿上，形成錐體，直至最高，測(cè)錐體高度H（cm），按下列公式計(jì)算，休止角=arctanH/R，式中：R為表面皿半徑，cm；H為錐體高度，cm[9]。

2.3 輔料用量考察

本品為干浸膏粉末，流動(dòng)性不好，需在細(xì)粉中加入適量輔料來(lái)改善藥粉的流動(dòng)性，以保證裝量更準(zhǔn)確?？扇苄缘矸蹫檩p質(zhì)的白色粉末，無(wú)臭無(wú)味，不溶于冷水，溶于沸水，有較強(qiáng)的溶解性和崩解度，在制備膠囊劑時(shí)用作填充劑，吸附力強(qiáng)，流動(dòng)性好，穩(wěn)定性高，會(huì)使藥物更易裝入膠囊中。將可溶性淀粉與浸膏干粉按不同比例混勻，同2.2方法測(cè)定提取物混合細(xì)粉的休止角，比較流動(dòng)性差異，確定輔料用量[9]。

2.4 水分測(cè)定

按照《中國(guó)藥典》2010版水分測(cè)定法（附錄IX H），第一法（烘干法）進(jìn)行測(cè)定。水分測(cè)定法（烘干法）：取供試品2 g，平鋪于干燥至恒重的扁形稱量瓶中，厚度不超過(guò)5 mm；疏松供試品不超過(guò)10 mm；精密稱定，打開瓶蓋在100℃～105℃干燥5 h，將瓶蓋蓋好，移置干燥器中，冷卻30 min，精密稱定，再在上述溫度干燥1 h，冷卻，稱重，至連續(xù)兩次稱重的差異不超過(guò)5 mg為止。根據(jù)減失的重量，計(jì)算供試品中含水量（%）[9]。

2.5 裝量差異測(cè)定

按照《中國(guó)藥典》2010版（附錄I），除另有規(guī)定外，取供試品10粒，分別精密稱定重量，傾出內(nèi)容物（不得損失囊殼），硬膠囊囊殼用小刷或其他適宜的用具拭凈；軟膠囊或內(nèi)容物為半固體或液體的硬膠囊囊殼用乙醚等易揮發(fā)性溶劑洗凈，置通風(fēng)處使溶劑揮盡，再分別精密稱定囊殼重量，求出每粒內(nèi)容物的裝量。每粒裝量與標(biāo)示裝量相比較（無(wú)標(biāo)示裝量的膠囊劑，與平均裝量比較），裝量差異限度應(yīng)在標(biāo)示裝量（或平均裝量）的±10%以內(nèi)，超出裝量差異限度的不得多于2粒，并不得有1粒超出限度1倍[9]。

3 結(jié)果與分析

3.1 正交優(yōu)化乙醇提取工藝

3.1.1 因素水平的確定

根據(jù)單因素考察得到的最佳提取工藝，選擇乙醇濃度、料液比、回流時(shí)間、提取次數(shù)4項(xiàng)作為考察因素，每個(gè)因素3個(gè)水平，見(jiàn)表1。

首先，商業(yè)周期對(duì)現(xiàn)金支付可能性的影響可以用股票平均收益率來(lái)解釋，股票市場(chǎng)的平均收益率越高，目標(biāo)公司越有可能同意股票支付的支付方式。其次，股權(quán)集中度會(huì)增加現(xiàn)金支付的可能性，也就是說(shuō)管理層持股比例的高低會(huì)影響到支付方式的選擇。原因是并購(gòu)公司管理層為了保持收購(gòu)后對(duì)公司的控制權(quán)，不愿意采用換股方式并購(gòu)，而傾向于選擇現(xiàn)金支付方式。最后，成長(zhǎng)性的公司傾向于使用非現(xiàn)金的支付手段完成并購(gòu)，因?yàn)檫@些公司需要現(xiàn)金流投入新的項(xiàng)目，以獲得更大的收益，而且這些公司的股票存在較大的升值空間，所以公司更傾向于用股票等非現(xiàn)金支付方式。

表1 試驗(yàn)因素水平表Table 1 Factors and levels

3.1.2 正交試驗(yàn)結(jié)果

正交試驗(yàn)結(jié)果表見(jiàn)表2。

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果表Table 2 Results of orthogonal experiment

由表2可知，以綜合評(píng)分為標(biāo)準(zhǔn)，在所選的因素水平范圍內(nèi)，各因素作用順序?yàn)镈>A>B>C，最佳組合為：D2A2B3C3，即 70%乙醇，料液比 1∶15（g/mL），提取 2 次，每次3 h。

3.1.3 醇提工藝驗(yàn)證

為考察正交試驗(yàn)優(yōu)選方案D2A2B3C3重現(xiàn)性，按方案D2A2B3C3的工藝條件進(jìn)行3組重復(fù)試驗(yàn)（材料量同正交試驗(yàn)），試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。

結(jié)果表明方案D2A2B3C3重現(xiàn)性較好，說(shuō)明此提取工藝條件穩(wěn)定可行。

3.2 正交優(yōu)化水煎提取工藝

3.2.1 因素水平的確定

根據(jù)單因素考察得到的最佳提取工藝，料液比、煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)3項(xiàng)作為考察因素，每個(gè)因素3個(gè)水平，見(jiàn)表4。

表3 醇提工藝驗(yàn)證試驗(yàn)Table 3 Results of the test for optimized condition with alcohol extraction

表4 試驗(yàn)因素水平表Table 4 Factors and levels

3.2.2 正交試驗(yàn)結(jié)果

正交試驗(yàn)結(jié)果表見(jiàn)表5。

表5 正交試驗(yàn)結(jié)果表Table 5 Results of orthogonal experiment

由表5可知，以綜合評(píng)分為標(biāo)準(zhǔn)，在所選的因素水平范圍內(nèi)，各因素作用順序?yàn)镃次數(shù)>B時(shí)間>A料液比，最佳組合為：C3B3A2，即料液比 1 ∶15（g/mL），提取3次，每次3 h。

3.2.3 水煎提取工藝驗(yàn)證

為考察正交試驗(yàn)優(yōu)選方案C3B3A2重現(xiàn)性，按方案C3B3A2的工藝條件進(jìn)行3組重復(fù)試驗(yàn)（材料量同正交試驗(yàn)），試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表6。

表6 水提工藝驗(yàn)證試驗(yàn)Table 6 Results of the test for optimized condition with water extraction

結(jié)果表明，按提取工藝C3B3A2進(jìn)行提取，芍藥苷含量和提取率差異較小，重現(xiàn)性較好，表明該工藝合理、穩(wěn)定可行。

3.3 休止角測(cè)定結(jié)果

休止角越小，摩擦力越小，流動(dòng)性越好，小于30°時(shí)流動(dòng)性好，小于40°時(shí)可用于企業(yè)生產(chǎn)。干粉休止角測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表7。由結(jié)果看出休止角大于40°，干粉流動(dòng)性不好。

表7 干粉休止角測(cè)定結(jié)果Table 7 The results of dry repose angle

3.4 輔料用量測(cè)定結(jié)果

輔料用量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表8。

表8 輔料用量篩選結(jié)果Table 8 The screening results of accessories amount

由表8可知，加入淀粉后，細(xì)粉流動(dòng)性顯著提高，比較各組中加入的輔料量，考慮到實(shí)際生產(chǎn)成本，故確定可溶性淀粉與干浸膏粉最佳質(zhì)量比例是1∶1。

3.5 水分測(cè)定結(jié)果

水分測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表9。

由表9可知，藍(lán)莓酒肝清膠囊含水量均小于9%，符合藥典的規(guī)定。

表9 含水量測(cè)定結(jié)果Table 9 The measurement results of moisture

3.6 裝量差異測(cè)定結(jié)果

裝量差異測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表10。

表10 裝量差異測(cè)定結(jié)果Table 10 The measurement results of content uniformity

由表10可知，算出膠囊的裝量差異范圍為0.315g～0.370 g，試驗(yàn)數(shù)據(jù)中只有第二組不符合要求，故藍(lán)莓酒肝清膠囊裝量差異符合藥典的規(guī)定。

3.7 空膠囊規(guī)格的選擇

采用量筒法測(cè)定3批膠囊粉末堆密度，精密稱取干燥至恒重的材料10 g，倒入100 mL量筒中，手持量筒振蕩至體積不變，記錄體積，堆密度即為質(zhì)量與體積的比值。3批藥粉測(cè)定結(jié)果分別為0.60、0.61、0.59 g/mL，堆密度平均值為0.60 g/mL，可選擇0號(hào)膠囊填充，根據(jù)實(shí)測(cè)，平均每粒膠囊填充量為0.35 g。

3.8 膠囊成型工藝確定結(jié)果

將填充物按3.1和3.2的優(yōu)化提取工藝進(jìn)行提取，得到的干浸膏粉與可溶性淀粉按質(zhì)量比1∶1混勻，噴以75%乙醇消毒，60℃烘箱干燥1 h后過(guò)80目篩，使用0號(hào)膠囊殼進(jìn)行手工填充。

4 結(jié)論與討論

本研究確定藍(lán)莓酒肝清膠囊的提取和制備工藝為：藍(lán)莓、梔子、丹參、姜黃加15倍量的70%乙醇回流提取2次，每次3 h；白芍、積雪草加15倍量的水煎煮3次，每次3 h。提取液過(guò)濾、合并、減壓濃縮，80℃減壓干燥成干膏。粉碎過(guò)80目篩，得干膏粉。由于干膏粉流動(dòng)性不好，不能直接填充膠囊，經(jīng)考察將干膏粉與淀粉按質(zhì)量比（1∶1）混勻，噴以75%乙醇消菌殺毒，60℃烘箱干燥1 h后過(guò)80目篩，使用0號(hào)膠囊殼填充即可。本研究為藍(lán)莓酒肝清膠囊的進(jìn)一步開發(fā)與應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)，但其具體的保肝機(jī)理還需要進(jìn)一步深入研究和探討。

[1]李愛(ài)華.酒精性肝病發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展[J].吉林醫(yī)學(xué),2010,31(17):2670-2672

[2]趙潔,雷金艷.酒精性肝病的研究進(jìn)展[J].北京中醫(yī)藥,2009,28(11):907-908

[3]Gao B,Bataller R.Alcoholic liver disease:pathogenesis and new therapeutic targets.[J].Gastroenterology,2011,141(5):1572-1585

[4]靳華.酒精性肝病的中醫(yī)病因病機(jī)[J].中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志,2012,22(4):249-250

[5]王洪巖,李鑫,徐有青.酒精性肝病發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展[J].實(shí)用肝臟病雜志,2014(1):5-8

[6]殷曉軒,尹常健.酒精性肝病中醫(yī)用藥規(guī)律探討[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2011,17(12):285-287

[7]梁衛(wèi),吳承玉.酒精性肝病辨治心得[J].中醫(yī)雜志,2013(5):433-434

[8]李磊.金棗遠(yuǎn)志膠囊的制備工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[D].西安:西北大學(xué),2012.

[9]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典:一部[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2010:21-22

Preparation Technology of Blueberry Jiuganqing Capsule

GUO Shi-qi1，2，NAN Min-lun3，HE Yu-fang3，GAO Yu-gang1，2，ZHAO Yan1，2，ZHANG Lian-xue1，2，HE Zhong-mei1，2，*
（1.Chinese Medicine College，Jilin Agricultural University，Changchun 130118，Jilin，China；2.Jilin Provincial Ginseng Engineering and Technology Innovation Centre，Changchun 130118，Jilin，China；3.Academy of Chinese Medical Sciences of Jilin Province，Changchun 130012，Jilin，China）

The preparation of blueberry Jiuganqing capsule was determined.The orthogonal experimental design was carried out in our present study.In addition，the contents of the indicator component and the yield of extraction were used as the evaluating indexes，and the multiple guidelines grading method was also used to optimize extraction technology，by investigating angle of repose，accessories amount，content of moisture，and content of uniformity.The best alcohol extraction technology was showed in our present study，as follow：the concentrationofalcoholwas70%，theliquid-solidratiowas1∶15（g/mL），refluxedfor2timesand3 hours everytime.The best water extraction technology was also showed as follow：the liquid-solid ratio was 1∶15（g/mL），water extracted for 3 times and 3 hours every time.The best forming process of the capsules was that the soluble starch and the dry extract powder were mixed in 1∶1 mass ratio.The obtained powder had good fluidity and less hygroscopicity.The preparation technology of blueberry Jiuganqing capsule was feasible，and had obvious effect of preventing alcoholic liver injury.

blueberry capsules；preparation technology；orthogonal design；indicator component；accessories

10.3969/j.issn.1005-6521.2017.23.020

吉林省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（20140311029YY）

郭詩(shī)琦（1993—），女（漢），碩士研究生，從事中藥新藥研究與開發(fā)。

*通信作者：何忠梅，副教授，博士，從事中藥有效成分、作用機(jī)制研究及產(chǎn)品開發(fā)。

2017-03-01