連云嵐，董培智

(山西省食品藥品檢驗(yàn)所,太原 030001)

HPLC法快速篩查保健食品中非法添加的7種化學(xué)藥品

連云嵐，董培智

(山西省食品藥品檢驗(yàn)所,太原 030001)

目的 建立用于改善睡眠類保健食品中非法添加卡馬西平、氯丙嗪、舒必利、奧卡西平、奧氮平、多賽平和喹硫平7種化學(xué)藥品的HPLC快速篩查方法。 方法 采用HPLC法,C18柱進(jìn)行分離(250 mm×4.6 mm;5 μm);檢測(cè)波長(zhǎng):250 nm;柱溫:35 ℃。流動(dòng)相:甲醇-0.02 mol/L磷酸二氫鉀溶液,梯度洗脫。 結(jié)果 經(jīng)對(duì)建立的HPLC法進(jìn)行方法學(xué)考察,7種目標(biāo)分析物的線性范圍為20-600 μg/ml,檢出限為0.4-2.5 ng/g,定量限為2.5-5.0 ng/g;方法的重復(fù)性(RSD)在0.1%-3.6%之間,儀器精密度(RSD)在0.2%-2.8%之間;平均回收率為95-102%;7個(gè)成分的溶液在32 h內(nèi)基本穩(wěn)定。 結(jié)論 該HPLC法操作簡(jiǎn)便,能同時(shí)快速篩查保健食品中卡馬西平等7種非法添加化學(xué)藥品。

改善睡眠類保健食品; HPLC; 非法添加化學(xué)藥品

由于生活節(jié)奏加快,工作壓力加大,社會(huì)中失眠患者日益增多,借助藥物來(lái)改善睡眠的人群也在不斷增加。不法分子為了達(dá)到快速治療失眠的效果,在保健食品中非法添加鎮(zhèn)靜催眠類化學(xué)藥物。現(xiàn)有的國(guó)家局頒布的3個(gè)補(bǔ)充檢驗(yàn)方法[1-3]收錄的改善睡眠類非法添加的化學(xué)藥物共有22種,但根據(jù)近年來(lái)我所檢測(cè)近500批次的結(jié)果顯示未發(fā)現(xiàn)有添加上述藥物。除上述22種藥物之外,還有一些具有睡眠作用的精神類藥物也可能添加到中成藥和保健食品中,此類藥物往往會(huì)造成相當(dāng)嚴(yán)重的不良反應(yīng),而且具有耐藥性和依賴性,大多被列為國(guó)家二類精神藥品。如卡馬西平具有嗜睡作用,但其為抗驚厥、三叉神經(jīng)痛藥,并有抗抑郁及抗心律失常的作用[4-5];氯丙嗪為抗精神病藥,具有神經(jīng)安定作用,長(zhǎng)期使用會(huì)產(chǎn)生耐藥性[6]。因此有必要對(duì)改善睡眠類保健食品中非法添加的其他精神類藥品進(jìn)行檢測(cè)方法的研究。本實(shí)驗(yàn)建立了HPLC(檢測(cè)器采用DAD)時(shí)檢測(cè)睡眠類保健食品中卡馬西平、氯丙嗪、舒必利、奧卡西平、奧氮平、多賽平和喹硫平7種非法添加的精神類藥品的方法。

1 儀器和試藥

1.1 儀器

戴安U3000高效液相色譜儀,MS-204s萬(wàn)分之一電子天平,DV215CD十萬(wàn)分之一電子天平,超聲波提取儀。

1.2 試劑及對(duì)照品

磷酸二氫鉀,分析純;甲醇,分析純(提取)、色譜純(流動(dòng)相);鹽酸,分析純。對(duì)照品均來(lái)源于中國(guó)食品藥品檢定研究院:卡馬西平(批號(hào):100142-20110S,規(guī)格:100 mg,含量99.8%;富馬酸喹硫平(批號(hào):100815-201202,規(guī)格:100 mg,含量99.9%);鹽酸氯丙嗪(批號(hào):100460-201302,規(guī)格:100 mg,含量99.7%);奧氮平(批號(hào):100948-200801,規(guī)格:100 mg,含量99.9%);鹽酸多塞平(批號(hào):100069-201103,規(guī)格:100 mg,含量99.5%);奧卡西平(批號(hào):100657-201102,規(guī)格:100 mg,含量99.8%);舒必利(批號(hào):100203-200503,規(guī)格:100 mg,含量100%)。

31批次樣品來(lái)源于2015年全國(guó)保健食品監(jiān)督抽檢任務(wù)輔助睡眠類保健食品中不含褪黑素的樣品。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Agilent C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);柱溫:室溫35 ℃。流動(dòng)相:甲醇-0.02 mol/L磷酸二氫鉀溶液,梯度洗脫見表1。檢測(cè)波長(zhǎng):250 nm。流速:1.0 ml/min。

表1梯度洗脫表

Table1Gradientelutiontable

時(shí)間(min)A(甲醇)B(磷酸二氫鉀)0-555%-95%95%-5%55-6495% 5% 65-755% 95%

2.2 供試品制備

精密稱取次服用量至50 ml容量瓶中,加甲醇40 ml,超聲提取15 min,放至室溫,用甲醇定容至刻度。0.45 μm膜過濾,取續(xù)濾液,作為樣品待測(cè)液備用。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密稱定上述7種對(duì)照品每種約12 mg分別置于25 ml容量瓶中,卡馬西平、富馬酸喹硫平、鹽酸多塞平、米氮平4種對(duì)照品用約20 ml的甲醇溶解,奧卡西平、舒必利、奧氮平3種對(duì)照品用約20 ml的乙腈溶解。用溶媒定容后,搖勻,作為儲(chǔ)備液備用。

精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液各1.0 ml至同一個(gè)10 ml量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,制成每1 ml含對(duì)照品約50 μg的對(duì)照品溶液。然后取5.0 ml定容至10.0 ml,搖勻,配制成不同濃度的對(duì)照品溶液作為標(biāo)準(zhǔn)曲線。以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo),積分面積為縱坐標(biāo)求得回歸方程,結(jié)果線性范圍在20-600 μg/ml之間(見表2)。

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

對(duì)照品儲(chǔ)備液配制后冰箱冷藏保存,測(cè)試溶液在配制后不同時(shí)間測(cè)定其峰面積,計(jì)算其RD,對(duì)對(duì)照品測(cè)試溶液進(jìn)行穩(wěn)定性考察。結(jié)果各指標(biāo)在32 h內(nèi)基本穩(wěn)定(見表3)。

表27種指標(biāo)線性范圍

Table2Thecalibrationcurvesof7chemicaldrugsandtheirranges

組分回歸方程相關(guān)系數(shù)R2線性范圍(μg)卡馬西平Y(jié)=00368X-002690999550-500氯丙嗪 Y=00809X-016310999528-560舒必利 Y=00241X+014170999430-589奧卡西平Y(jié)=00557X+034310999246-460奧氮平 Y=00692X+003270999724-480多賽平 Y=00239X-056340993254-540喹硫平 Y=00353X+027130999250-500

表3穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=10)

Table3Stabilitytestresult(n=10)

組分平均峰面積RD(%)卡馬西平928223氯丙嗪 15806073舒必利 320744奧卡西平321727奧氮平 1595037多賽平 4471218喹硫平 1728828

2.5 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

考慮到不同化學(xué)藥品最大吸收波長(zhǎng)不同(分別為卡馬西平237 nm;氯丙嗪256 nm;舒必利242 nm;奧卡西平256 nm;奧氮平257 nm;多賽平256 nm;喹硫平256 nm),選擇250 nm為其大多數(shù)物質(zhì)吸收值較高的波長(zhǎng)。

2.6 儀器精密度考察

選擇標(biāo)準(zhǔn)曲線中間濃度的對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣5次,計(jì)算峰面積的RSD,結(jié)果儀器精密度RSD小于5%(見表4)。

2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

用加標(biāo)樣替代樣品進(jìn)行重復(fù)性試驗(yàn)。分別取1 ml對(duì)照品溶液于5個(gè)已稱樣品的10 ml容量瓶,甲醇定容至刻度。進(jìn)樣10 μl,測(cè)定樣品中各組分的量。測(cè)定結(jié)果表明:重復(fù)性試驗(yàn)符合要求(見表5)。

2.8 準(zhǔn)確度

采用加樣回收法測(cè)定準(zhǔn)確度。精密量取某口服液1.0 ml分別至9個(gè)10 ml容量瓶中,分別精密加入濃度為0.469 5 mg/ml的對(duì)照品溶液1 ml，0.8 ml，0.4 ml各3份,加甲醇至大約8 ml,超聲15 min提取,定容至10 ml。取續(xù)濾液,進(jìn)樣10 μl,計(jì)算回收率,結(jié)果回收率在95%-102%之間(見表6)。

表4儀器精密度試驗(yàn)

Table4Theprecisiontestofinstrument

分析物峰面積AS1S2S3S4S5均值RSD(%)卡馬西平481347724757474347714771055氯丙嗪 6787681168226819680968096022舒必利 3593235664355043619435675357938075奧卡西平259862460222996259372450124828奧氮平 768277047749775577557723046多賽平 21385217421784215012150121603088喹硫平 84098752873487368736865819

表57種對(duì)照品重復(fù)性試驗(yàn)

Table5Repeatabilitytestof7kindsofchemicaldrugs

分析物含量(ng)12345平均值RSD(%)卡馬西平400082401046401114401168400303400743013氯丙嗪 446698441204440500446068443732443640063舒必利 197143196376194909189218180600191644361奧卡西平902999505592280905659653192946297奧氮平 359557359557365440350594364319359894163多賽平 1093381087341090791092522107957108872052喹硫平 3549633536463489013546941349085352258086

表67種對(duì)照品平均回收率

Table6Theaveragerecoveriesof7kindsofchemicaldrugs

分析物回收率(%)高中低平均值RSD(%)卡馬西平103010101010102013氯丙嗪 985977993985081舒必利 946960947951082奧卡西平93695397795522奧氮平 104094097998651多賽平 954101097497929喹硫平 100094910399341

2.9 檢出限、定量限

將加標(biāo)樣品溶液逐級(jí)稀釋,過濾后進(jìn)樣,以峰高信噪比10 ∶1的對(duì)照品濃度為定量濃度,帶入稱樣量及稀釋體積后折算定量限(見表7);同法以峰高信噪比3 ∶1的對(duì)照品濃度為檢出濃度,折算檢出限。結(jié)果檢出限在0.4-2.5 ng/g之間,定量限在2.5-5.0 ng/g之間(見表7)。

2.10 樣品測(cè)定

根據(jù)驗(yàn)證的方法,對(duì)本次任務(wù)中31批次樣品各10 μl進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果均未檢出有非法添加(見圖1)。

3 討論

本文為促進(jìn)睡眠類保健食品中非法添加物初篩方法研究。供試品溶液中不得出現(xiàn)與對(duì)照品溶液保留時(shí)間一致的色譜峰,如果出現(xiàn)保留時(shí)間一致的色譜峰,則其光譜圖應(yīng)不一致,如色譜保留時(shí)間、光譜圖均與對(duì)照品一致,則用液質(zhì)聯(lián)用儀測(cè)定,進(jìn)行干擾排除。對(duì)供試品溶液中出現(xiàn)與對(duì)照品溶液保留時(shí)間、光譜、質(zhì)譜均一致的色譜峰,則判定為有非法添加,用以上方法進(jìn)行定量。以峰面積為縱坐標(biāo),以不同進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo),做標(biāo)曲曲線,將樣品峰面積帶入,計(jì)算樣品待測(cè)液濃度。

表7檢出限與定量限

Table7Thedetectionlimitsandthequantitativelimitsofof7kindsofchemicaldrugs

成分檢出限(ng/g)定量限(ng/g)卡馬西平04925氯丙嗪 05628舒必利 05829奧卡西平04627奧氮平 04824多賽平 05427喹硫平 25050

本項(xiàng)目7個(gè)非法添加物的選擇是參照文獻(xiàn)[9]篩選出9種具有睡眠作用的精神類藥物,其中米氮平和鹽酸西普肽蘭因不穩(wěn)定,故未列入本次方法學(xué)考察。

實(shí)驗(yàn)中以甲醇-磷酸二氫鉀、乙腈-磷酸二氫鉀為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫考察,發(fā)現(xiàn)以甲醇-磷酸二酸鉀梯度洗脫時(shí),色譜峰分離度好,實(shí)驗(yàn)效果最好。故最終選擇甲醇-磷酸二酸鉀梯度洗脫。

[1] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局.安神類中成藥和保健食品中非法添加褪黑素、佐匹克隆、氯苯那敏、扎來(lái)普隆的補(bǔ)充檢驗(yàn)方法.藥品檢驗(yàn)補(bǔ)充檢驗(yàn)方法和檢驗(yàn)項(xiàng)目批準(zhǔn)件(批準(zhǔn)件編號(hào)2012004)[S].[2012-08-02].

[2] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局.安神類中成藥中非法添加化學(xué)品檢測(cè)方法.藥品檢驗(yàn)補(bǔ)充檢驗(yàn)方法和檢驗(yàn)項(xiàng)目批準(zhǔn)件(批準(zhǔn)件編號(hào)2009024)[S].[2009-12-04].

[3] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局.改善睡眠類中成藥及保健食品中非法添加羅痛定、青藤堿、文拉法辛補(bǔ)充檢驗(yàn)方法.藥品檢驗(yàn)補(bǔ)充檢驗(yàn)方法和檢驗(yàn)項(xiàng)目批準(zhǔn)件(批準(zhǔn)件編號(hào)2013002)[S].[2013-03-26].

[4] 曹冬冬,李丙英,王守雙.卡馬西平片的含量測(cè)定方法[J].江蘇藥學(xué)與臨床研究,2003,11(3):16-18.

[5] 付萍萍,景浩然,趙志偉,等.高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方卡鈣菖蒲膠囊中卡馬西平的含量[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2007,1(5):1151-1152.

[6] 徐景暉,丁海芳,項(xiàng)志通,等.HPLC法測(cè)定氯丙嗪、異丙嗪的含量[J].中國(guó)藥師,2008,11(2):243-244.

[7] 張圓,閔春艷,郝剛,等.保健食品中非法添加化學(xué)藥物的檢測(cè)方法[J].中國(guó)職業(yè)藥師,2014,11(7):35-39.

[8] 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典:2010年版四部[S].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：374.

[9] 羅疆南,譚力,曹玲,等.LC-MS/MS法同時(shí)測(cè)定中藥制劑中非法添加的15種抗癲癇藥及鎮(zhèn)靜催眠類藥物[J].中國(guó)生化藥物雜志,2010,31(3):22-26.

Rapiddeterminationof7kindsofillegally-addedchemicaldrugsinhealthfoodbyhighperformanceliquidchromatography

LIAN Yunlan,DONG Peizhi

(ShanxiInstituteforFoodandDrugControl,Taiyuan030001,China)

ObjectiveTo establish a rapid screening method for the simultaneous determination of 7 kinds of illegally-added chemical drugs, including Carbamazepine, Chlorpromazine, Sulpiride, Oxcarbazepine, Olanzapine, Doxepin and Quetiapine, in improving sleep quality health food by high performance liquid chromatography(HPLC).MethodsA C18column (250 mm×4.6 mm,5 μm) was used for chromatographic separation, which was eluted with methanol-0.02 mol/L potassium dihydrogen phosphate as mobile phase at 35 ℃.The diode array detector was used for detection at 250 nm.ResultsThe 7 chemical drugs showed a linear relationship in the range of 20-600 μg/ml. The limit of determination and the limit of quantification of the method were in the ranges of 0.4-2.5 ng/g and 2.5-5.0 ng/g,respectively. The RSD of repeatability was in the range of 0.1%-3.6% and the precision of instrument was 0.2%-2.8%.The average recovery rate was 95%-102%. The above seven components solution was stable in 32 h.ConclusionThis method is simple and convenient, and suitable for simultaneous rapid determination of 7 kinds of illegally-added chemical drugs in health food.

improving sleep quality health food; high performance liquid chromatography; illegally-added chemical drugs

連云嵐,女,1972-10生,碩士,副主任藥師,E-mail:lianyunlan2006@163.com

2017-07-21

R927.2

A

1007-6611(2017)11-1165-04

10.13753/j.issn.1007-6611.2017.11.016