高雅松 , 王 健 , 衛(wèi)佳麗, 陳 默, 宋 慧,2

(1.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 ， 吉林 長春 130118 ; 2.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 教育部食藥用菌工程研究中心 ， 吉林 長春 130118)

金針菇菇腳對(duì)肉雞小腸絨毛形態(tài)及黏膜免疫指標(biāo)的影響

高雅松1, 王 健1, 衛(wèi)佳麗1, 陳 默1, 宋 慧1,2

(1.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 ， 吉林 長春 130118 ; 2.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 教育部食藥用菌工程研究中心 ， 吉林 長春 130118)

為探討金針菇菇腳(Flammulinavelutipesstembase，F(xiàn)VS)對(duì)肉雞小腸絨毛形態(tài)和黏膜免疫指標(biāo)的影響，將4 500只1日齡愛拔益加(AA+)肉雞隨機(jī)分為5個(gè)處理組，每個(gè)處理組7個(gè)重復(fù)，飼喂至43 d。分別于22、43 d測定肉雞小腸絨毛高度(villous height，V)、隱窩深度(crypt depth，C)、IL-2、IL-4和S-IgA含量。結(jié)果顯示，F(xiàn)VS可提高肉雞小腸V/C和小腸黏膜IL-2、IL-4和S-IgA含量。

金針菇 ; 肉雞 ; 小腸 ; 免疫

金針菇菇腳(Flammulinavelutipesstembase，F(xiàn)VS)含蛋白質(zhì)和糖類等成分，有抗氧化和免疫調(diào)節(jié)活性[1]。FVS常作為廢棄料被丟棄[2-3]。飼料中添加抗生素導(dǎo)致耐藥性問題，增加消費(fèi)者對(duì)抗生素殘留在禽業(yè)生產(chǎn)中的關(guān)注度。開發(fā)綠色飼料，增強(qiáng)肉雞免疫力成為研究關(guān)鍵[4]。

將FVS添加到規(guī)模飼養(yǎng)的肉雞飼料中，通過測定肉雞小腸絨毛高度(villous height, V)和隱窩深度(crypt depth, C)、IL-2、IL-4和S-IgA含量，探討FVS對(duì)肉雞小腸絨毛形態(tài)和黏膜免疫指標(biāo)的影響，為其深入研究及綜合開發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 FVS(食用菌生產(chǎn)企業(yè)饋贈(zèng))，自然風(fēng)干，粉碎；OCT包埋劑(德國徠卡公司)；雞IL-2、IL-4和S-IgA試劑盒(BPE60056、BPE60055、BPE60021；上海朗頓生物技術(shù)有限公司)；其余化學(xué)試劑均為分析純。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物及分組 4 500只1日齡(AA+)肉雞(吉林省東豐縣鵬翔牧業(yè)有限責(zé)任公司)隨機(jī)分為5個(gè)處理組：對(duì)照組(飼喂吉林省東豐縣鵬翔牧業(yè)有限責(zé)任公司常規(guī)日糧)、低劑量組(飼喂含2%FVS的常規(guī)日糧)、中劑量組(飼喂含4%FVS的常規(guī)日糧)、高劑量組(飼喂含6%FVS的常規(guī)日糧)和階段飼喂組(于試驗(yàn)1～7、15～21、29～35 d飼喂含6%FVS的常規(guī)日糧)，除對(duì)照組外各劑量組日糧去除預(yù)混料中的抗蟲劑、多酶制劑及植物營養(yǎng)添加劑等成分，不添加任何抗生素。每個(gè)處理組7個(gè)重復(fù)，試驗(yàn)期43 d。所有日糧均按等氮等能原則配置，營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)滿足NRC(1994)，以《GB/T 19664—2005》為飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)，常規(guī)免疫，自由采食和飲水。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 樣品處理 于22 d和43 d，每個(gè)組重復(fù)3只AA+肉雞，頸動(dòng)脈放血處死，取十二指腸、空腸、回腸各2 cm腸段。

1.3.2 小腸絨毛形態(tài)的測定 4%多聚甲醛固定，30%蔗糖脫水。Leica CM1950冷凍切片機(jī)制作組織切片，H.E.染色，中性樹膠封片。Leica DM2000生物顯微鏡觀察小腸絨毛形態(tài)。各腸段取不相鄰3張切片進(jìn)行拍照，每張切片選取3處走向完整絨毛，Image-Pro Plus 6.0測量V和C。

1.3.3 小腸黏膜IL-2、IL-4和S-IgA含量的測定 生理鹽水沖去腸道內(nèi)容物，刮取腸黏膜，生理鹽水10倍稀釋，4 ℃勻漿，3 500 r/min(4 ℃)離心15 min，取上清。ELISA法測定十二指腸、空腸和回腸黏膜上清細(xì)胞因子IL-2、IL-4和S-Ig A含量，按試劑盒說明書進(jìn)行測定。

1.3.4 數(shù)據(jù)處理與分析 SPSS22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理， Ducan進(jìn)行多重比較，試驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(x±Sx)表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 FVS對(duì)肉雞小腸絨毛形態(tài)的影響

2.1.1 如表1，22日齡和43日齡，低劑量組和中劑量組十二指腸V/C顯著高于對(duì)照組(Plt;0.05),高劑量組和階段飼喂組十二指腸V/C與對(duì)照組相比無顯著差異(Pgt;0.05)。

2.1.2 FVS對(duì)肉雞空腸絨毛形態(tài)的影響 如表2，22日齡，階段飼喂組空腸V/C顯著高于對(duì)照組(Plt;0.05)，各劑量組空腸V/C與對(duì)照組相比無顯著差異(Pgt;0.05)。43日齡，各組間空腸V/C無顯著差異(Pgt;0.05)。

表1 FVS對(duì)肉雞十二指腸絨毛形態(tài)的影響 (n=21)

注：同列數(shù)據(jù)后所標(biāo)字母相異表示差異顯著(Plt;0.05)，所標(biāo)字母相同表示差異不顯著(Pgt;0.05)，下表同

表2 FVS對(duì)肉雞空腸絨毛形態(tài)的影響 (n=21)

2.1.3 FVS對(duì)肉雞回腸絨毛形態(tài)的影響 如表3，22日齡，低劑量組和階段飼喂組回腸V/C顯著高于對(duì)照組(Plt;0.05)，中劑量組和高劑量組回腸V/C與對(duì)照組相比無顯著差異(Pgt;0.05)。43日齡，中劑量組和階段飼喂組回腸V/C顯著高于對(duì)照組(Plt;0.05)，低劑量組和高劑量組回腸V/C與對(duì)照組相比無顯著差異(Pgt;0.05)。

2.2 FVS對(duì)肉雞小腸黏膜免疫指標(biāo)的影響

2.2.1 FVS對(duì)肉雞小腸IL-2含量的影響 如表4，22日齡，各劑量組和階段飼喂組肉雞小腸IL-2含量與對(duì)照組相比無顯著差異(Pgt;0.05)。 43日齡，階段飼喂組回腸IL-2含量顯著高于對(duì)照組(Plt;0.05)。

表3 FVS對(duì)肉雞回腸絨毛形態(tài)的影響 (n=21)

表4 FVS對(duì)肉雞小腸IL-2的影響 (n=21)

2.2.2 FVS對(duì)肉雞小腸IL-4的影響 如表5，22日齡，高劑量組十二指腸、空腸和回腸IL-4含量顯著高于對(duì)照組(Plt;0.05)。43日齡，低劑量組、高劑量組和階段飼喂組十二指腸IL-4含量與對(duì)照組無顯著差異(Pgt;0.05)，各劑量組空腸和回腸IL-4含量與對(duì)照組無顯著差異(Pgt;0.05)。

表5 FVS對(duì)肉雞小腸IL-4的影響 (n=21)

2.2.3 FVS對(duì)肉雞小腸S-IgA的影響 如表6，22日齡，中劑量組與階段飼喂組十二指腸S-IgA含量顯著高于對(duì)照組(Plt;0.05)，低劑量組空腸S-IgA含量顯著高于對(duì)照組(Plt;0.05)，中劑量組和階段飼喂組回腸S-IgA含量顯著高于對(duì)照組(Plt;0.05)。43日齡，各劑量組十二指腸S-IgA含量無顯著差異(Pgt;0.05)，低劑量組和階段飼喂組空腸和回腸S-IgA含量與對(duì)照組無顯著差異(Pgt;0.05)。

3 討論

3.1 FVS對(duì)肉雞小腸絨毛形態(tài)的影響 雞腸黏膜生長、發(fā)育及健康狀況直接影響其生長發(fā)育和免疫功能[5]。前期研究結(jié)果表明，F(xiàn)VS可促進(jìn)肉雞生長后期十二指腸和空腸發(fā)育。絨毛高度的增加使腸道表面積增加可促進(jìn)吸收和消化[6]。邢亞麗等研究表明，樹舌發(fā)酵浸膏多糖可顯著改善肉雞小腸黏膜結(jié)構(gòu)，維持腸黏膜屏障結(jié)構(gòu)，促進(jìn)肉雞健康生長[7]。V/C綜合反映小腸的功能狀態(tài)，比值增大，絨毛吸收能力變強(qiáng)。本試驗(yàn)結(jié)果提示，F(xiàn)VS可提高肉雞小腸吸收能力。

表6 FVS對(duì)肉雞小腸S-IgA的影響 (n=21)

3.2 FVS對(duì)肉雞小腸黏膜免疫指標(biāo)的影響 分泌型IgA(S-IgA)是黏膜表面主要的免疫球蛋白，黏膜免疫系統(tǒng)可抵抗病原菌入侵[8]。IL-4主要由Th2細(xì)胞分泌，促進(jìn)IgA的分泌。Th2細(xì)胞在小腸黏膜中表達(dá)量較高。研究結(jié)果提示，F(xiàn)VS可提高肉雞黏膜免疫功能。張彤瑤等研究表明，F(xiàn)VS可提高肉雞血清IL-2和Ig-A含量，增強(qiáng)肉雞T、B淋巴細(xì)胞免疫功能[9]。腸黏膜免疫功能與腸道菌群共同維持腸道健康。曾巧莉等研究結(jié)果顯示，日糧中添加FVS可改善肉雞腸道菌群結(jié)構(gòu)[10]。根據(jù)以上結(jié)果可以推測FVS提高肉雞免疫功能同時(shí)促進(jìn)腸道有益菌生長。

4 結(jié)論

日糧中添加FVS可促進(jìn)小腸吸收和消化功能，增強(qiáng)肉雞黏膜免疫功能。

[1] 周萍，李新勝，馬超，等．金針菇菇根抗氧化活性研究[J]．中國果菜，2014(6)：41-43．

[2] 王麗娜，吳波，丁國棟，等．金針菇菇腳對(duì)肉雞生產(chǎn)性能及免疫功能的影響[J]．菌物研究，2013，11(2)：120-123．

[3] 張亞男，王昌祿，李貞景，等．金針菇根部多糖的結(jié)構(gòu)特征[J]．食品科技，2015，40(3)：283-286．

[4] 蔡輝益，劉國華，常文環(huán)，等．肉雞生物飼料添加劑生產(chǎn)與應(yīng)用技術(shù)新進(jìn)展[J]．中國家禽，2015，37(4)：37-39．

[5] 郭麗青，占秀安．早期營養(yǎng)對(duì)肉雞腸道發(fā)育和免疫功能影響的研究進(jìn)展[J]．中國家禽，2015，37(18)：37-40．

[6] XuC L, Wang Y M, Sun R,etal. Modulatory Effects of Vasoactive Intestinal Peptide on Intestinal Mucosal Immunity and Microbial Community of Weaned Piglets Challenged by an Enterotoxigenic Escherichia coli (K88)[J]. PLoS ONE, 2014, 9(8): e104183.

[7] 邢亞麗，宋慧，姜云瑤，等．樹舌發(fā)酵浸膏多糖對(duì)肉雞腸黏膜組織結(jié)構(gòu)及腸道免疫細(xì)胞的影響[J]．中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2015，20(3)：126-132．

[8] Corthesy B. Multi-faceted functions of secretory IgA at mucosal surfaces[J]. Front Immunol， 2013, 4: 1-11.

[9] 張彤瑤，高雅松，張愛龍，等．金針菇菇腳對(duì)肉雞T、B淋巴細(xì)胞免疫功能的影響[J]．中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2016，21(4)：86-94．

[10] 曾巧莉，宋慧，郭慧慧，等．金針菇菇腳對(duì)肉雞盲腸菌群及短鏈脂肪酸的影響[J]．中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2016，21(5)：104-114．

EffectsofFlammulinavelutipesstembaseonMorphologyandImmuneIndexesofBroilerssmallintestinalmucosa

GAO Ya-song1, WANG Jian1, WEI Jia-li1, CHEN Mo1, SONG Hui1,2

(1. School of Life Science, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China; 2. Engineering Research Center of Chinese Ministry of Education for Edible and Medicinal Fungi, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China)

The experiment was conducted to study the effects of different contents ofFlammulinavelutipesstembase (FVS) as dietary supplements on morphology and immune indexes of broilers small intestinal mucosa. A total of 4500 one-day-old Arbor Acre+ (AA+) broilers were randomly divided into five groups with seven replications per group. The experimental period was 43 days. The detection indexes at 22 and 43 days were the villus height (VH, V), crypt depth (CD, C), IL-2, IL-4 and S-IgA of small intestinal. We concluded that diets of FVS could improve V/C, IL-2 IL-4 and S-IgA content of broilers.

Flammulinavelutipes; broilers ; intestinal ; immune

SONG Hui

S831.5

A

0529-6005(2017)10-0051-04

2016-12-26

吉林省經(jīng)濟(jì)菌物創(chuàng)新平臺(tái)(2014-2016)

高雅松(1988-)，女(回族)，碩士，研究方向?yàn)樯锘瘜W(xué)與分子生物學(xué)，E-mail:gaoyasong2016@126.com

宋慧，E-mail:songhuinongda@163.com