闞威 蔡金山 晁易林 胡廣衛(wèi) 沈艷麗 趙全邦 馬占全 郭春蘭 河生德 李靜 王曉潤(rùn) 王小紅 （青海省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 西寧 810000 青海省海晏縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 青海省貴南縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心）

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牦牛衣原體滅活疫苗免疫保護(hù)性研究

闞威①蔡金山①晁易林①胡廣衛(wèi)①沈艷麗①趙全邦①馬占全①郭春蘭①河生德②李靜①王曉潤(rùn)①王小紅③（①青海省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 西寧 810000 ②青海省海晏縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 ③青海省貴南縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心）

為了對(duì)牦牛衣原體滅活疫苗免疫保護(hù)性做一評(píng)價(jià)，本試驗(yàn)在青海省2個(gè)示范縣貴南和海晏縣篩選懷孕母牛作為試驗(yàn)動(dòng)物，試驗(yàn)組牦牛38頭，對(duì)照組15頭。試驗(yàn)組牦牛免疫后第21天進(jìn)行攻毒，攻毒劑量為1:1(14頭)，1:10(12頭)，1:100(12頭)；對(duì)照組0d直接進(jìn)行攻毒，攻毒劑量為1:1(5頭)，1:10(5頭)，1:100(5頭)，結(jié)果顯示：試驗(yàn)組牦牛都未發(fā)生流產(chǎn)，保護(hù)率為100%；對(duì)照組流產(chǎn)11頭，流產(chǎn)率73.33%。由此可見，該疫苗免疫懷孕牦牛后具有較高的免疫保護(hù)性。

牦牛衣原體滅活疫苗 保護(hù)性

衣原體歸于衣原體科衣原體屬，流產(chǎn)嗜性衣原體是衣原體屬的一個(gè)種，可導(dǎo)致多種動(dòng)物共患的人畜共患病，它在動(dòng)物界廣泛流行。該病原體主要寄生在母畜的胎盤滋養(yǎng)層，可導(dǎo)致綿羊、山羊、牛胎兒流產(chǎn)，此外還可引起豬、馬、兔、豚鼠、小鼠的流產(chǎn)。經(jīng)研究確定，牦牛衣原體病是由流產(chǎn)嗜性衣原體感染牦牛引起的一種地方流行性的接觸性傳染病[1]，以妊娠母牛流產(chǎn)、早產(chǎn)、死產(chǎn)或產(chǎn)無活力犢牛為主要特征。根據(jù)2010年到2013年監(jiān)測(cè)，青海省牦牛衣原體病血清學(xué)陽性率逐年升高，臨床上流產(chǎn)率也隨之逐年升高，危害日益嚴(yán)重。2015年，胡廣衛(wèi)等[2]，在海晏、貴南、烏蘭、玉樹四縣市，對(duì)往年流產(chǎn)嚴(yán)重的牛群進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)，四縣合計(jì)檢測(cè)859份，平均陽性率55.76%；4縣共調(diào)查8個(gè)鄉(xiāng)16個(gè)村的104個(gè)流產(chǎn)嚴(yán)重牛群的流產(chǎn)率，平均流產(chǎn)率高達(dá)22.0%。由此可見，青海省牦牛衣原體的流產(chǎn)較為嚴(yán)重，預(yù)防此病迫在眉睫。目前防治此病基本依賴于抗生素，暫時(shí)還沒有一個(gè)好的治療方法，牦牛衣原體滅活疫苗的研發(fā)及推廣有利于該病的預(yù)防。本試驗(yàn)旨在考究牦牛衣原體滅活疫苗免疫牦牛后的保護(hù)性，為疫苗的推廣使用提供數(shù)據(jù)支持。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)疫苗 牦牛衣原體滅活疫苗(試驗(yàn)用苗：由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所和青海省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心合作研發(fā))。

1.1.2 檢測(cè)試劑 衣原體病間接血凝(IHA)抗體檢測(cè)試劑盒(生產(chǎn)批號(hào)：150430)，由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院蘭州獸醫(yī)研究所提供。

1.1.3 試驗(yàn)動(dòng)物 在貴南和海晏縣懷孕牦牛中篩選衣原體感染陰性牦牛作為試驗(yàn)動(dòng)物。篩選試驗(yàn)動(dòng)53頭，試驗(yàn)組38頭(海晏23頭，貴南15頭)，對(duì)照組15頭(貴南)。

1.1.4 攻毒用液的制備 收集1枚做苗雞胚的尿囊液和卵黃膜，并研磨搗碎，將研磨好的混合物加生理鹽水定量在40ml(原則上一枚雞胚可生產(chǎn)40ml疫苗)，此液作為攻毒試驗(yàn)原液，備用。

1.2 方法

1.2.1 牦牛衣原體滅活疫苗的制備 制備方法參照邱昌慶、周繼章等[3]發(fā)表的文章進(jìn)行制備。

1.2.2 攻毒試驗(yàn) 按攻毒劑量1:1、1:10、1:100，將攻毒用原液加生理鹽水進(jìn)行等體積稀釋即可。試驗(yàn)組：免疫后第21天進(jìn)行攻毒，攻毒劑量為1:1(14頭)，1:10(12頭)，1:100(12頭)，每頭牦牛按攻毒劑量肌肉注射2ml，攻毒劑量為1:1(5頭)，1:10(5頭)，1:100(5頭)，每頭牦牛按攻毒劑量肌肉注射2ml，攻毒后收集并記錄流產(chǎn)信息。

2 結(jié)果

試驗(yàn)組牦牛都未發(fā)生流產(chǎn)，保護(hù)率為100%；對(duì)照組流產(chǎn)11頭，流產(chǎn)率73.33%，保護(hù)率26.67%，詳細(xì)結(jié)果見下表1。其中對(duì)照組1:1劑量組100%流產(chǎn)，1:10為80%，1:100為40%。

表1 流產(chǎn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)表

3 討論與小結(jié)

牦牛衣原體病是導(dǎo)致牧區(qū)牦牛流產(chǎn)的主要病之一，它的自然傳播方式目前還不清楚。病牛和隱性帶菌者是主要的傳染源。牧區(qū)牛羊之間的相互傳播也有可能。患病懷孕牛流產(chǎn)或產(chǎn)犢時(shí)，大量衣原體會(huì)隨羊水排出體外污染環(huán)境，通過消化道和呼吸道感染其他健康牛[4]。青海省牦牛存欄量約570萬頭，占世界牦牛的三分之一多。牦牛產(chǎn)業(yè)是我省牧民賴以生存的物質(zhì)基礎(chǔ)和支柱產(chǎn)業(yè)，通過牦牛衣原體病滅活疫苗的研制和推廣，采取免疫預(yù)防等綜合防治，降低牦牛空懷率和流產(chǎn)率，提高仔畜成活率，保障牦牛產(chǎn)業(yè)的穩(wěn)定發(fā)展。

目前青海省牧區(qū)的牦牛衣原體病感染和危害日趨嚴(yán)重，全省普遍需要防治衣原體病，但是缺乏有效的防治疫苗和方法，全世界沒有牦牛上使用的疫苗，這是牦牛衣原體病得不到有效防治的最根本的原因，牦牛衣原體病已成為影響牦牛正常繁殖和牦牛產(chǎn)業(yè)發(fā)展的瓶頸問題。本疫苗的成功研制為我國(guó)牦牛衣原體病的有效控制和牦牛養(yǎng)殖牛業(yè)的可持續(xù)發(fā)展提供了技術(shù)支持。經(jīng)攻毒測(cè)試，該疫苗免疫接種后對(duì)牦牛流產(chǎn)保護(hù)率可達(dá)100%，此疫苗的應(yīng)用可以大大減少牧民因牦牛流產(chǎn)而帶來的經(jīng)濟(jì)收入。

[1]Zhaocai Li，Yilin Chao，Jinshan Cai et al.Identification and Characterization of Chlamydia abortus Isolates from Yaks in Qinghai，China [J]. Volume 2015(2015), Article ID 658519，6 pages.

[2] 胡廣衛(wèi)，沈艷麗, 晁宜林等. 青海省牛羊衣原體病血清學(xué)調(diào)查[J]. 黑龍江畜牧獸醫(yī), 2015, 12: 101-102.

[3] 邱昌慶, 周繼章, 程淑敏等. 乳牛衣原體病滅活疫苗的研制[J]. 中國(guó)獸醫(yī)科學(xué), 2006, 05: 343-347.

[4] Ehret W J, Schutte A P, Pienaar J G,et al. Chlamydiosis in abeef herd [J]. S Afr Vet Assoc, 1975,46(2): 171-179.

S851.33

A

1007-1733(2017)11-0013-02

（2017–07–03）

青海省科技廳項(xiàng)目《牦牛衣原體滅活疫苗研究與推廣》，項(xiàng)目編號(hào)為：2014-NK-532。

*通訊作者