丁金鳳，徐春梅，張正群，趙云賀，劉峰，慕衛(wèi)

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溴氰蟲(chóng)酰胺對(duì)雙委夜蛾生長(zhǎng)發(fā)育、繁殖和營(yíng)養(yǎng)利用的影響

丁金鳳1，徐春梅1，張正群2，趙云賀1，劉峰1，慕衛(wèi)1

（1山東農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院農(nóng)藥毒理與應(yīng)用技術(shù)省級(jí)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東泰安271018；2山東農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝科學(xué)與工程學(xué)院，山東泰安271018）

研究低劑量的溴氰蟲(chóng)酰胺對(duì)雙委夜蛾（）生長(zhǎng)發(fā)育、繁殖和營(yíng)養(yǎng)利用的影響，明確溴氰蟲(chóng)酰胺對(duì)雙委夜蛾的控制作用。采用人工飼料混毒法測(cè)定溴氰蟲(chóng)酰胺對(duì)雙委夜蛾4齡幼蟲(chóng)的毒力；利用LC5、LC25和LC50劑量的溴氰蟲(chóng)酰胺處理雙委夜蛾4齡幼蟲(chóng)，觀察其對(duì)親代幼蟲(chóng)和蛹的發(fā)育歷期、成蟲(chóng)壽命、產(chǎn)卵量、化蛹率和羽化率等生長(zhǎng)發(fā)育指標(biāo)的影響；測(cè)定溴氰蟲(chóng)酰胺處理72 h后對(duì)幼蟲(chóng)的近似消化率（AD）、相對(duì)取食量（RCR）、相對(duì)生長(zhǎng)量（RGR）、攝入食物轉(zhuǎn)化效率（ECI）、消化食物轉(zhuǎn)化效率（ECD）等營(yíng)養(yǎng)利用指數(shù)的影響；分析溴氰蟲(chóng)酰胺處理24、48和72 h后幼蟲(chóng)體內(nèi)糖類、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)含量的變化。溴氰蟲(chóng)酰胺對(duì)雙委夜蛾4齡幼蟲(chóng)具有較高毒力，LC5、LC25和LC50分別為0.13、0.34和0.66 μg·g-1混毒飼料；與對(duì)照組相比，LC5、LC25和LC50劑量下雙委夜蛾4—6齡幼蟲(chóng)的發(fā)育歷期分別延長(zhǎng)了1.63、1.75和5.48 d，同時(shí)蛹的發(fā)育歷期延長(zhǎng)，雌雄成蟲(chóng)的壽命縮短，并顯著降低了雙委夜蛾幼蟲(chóng)的化蛹率和蛹的羽化率，LC5、LC25和LC50處理組雌蛹重分別為130.2、127.8和127.5 mg，顯著低于對(duì)照組的蛹重（146.7 mg），但是對(duì)雄蛹重?zé)o顯著影響。溴氰蟲(chóng)酰胺處理后，LC5、LC25和LC50組的單雌產(chǎn)卵量分別為558.8、506.9和462.8粒，顯著低于對(duì)照組（755.1粒）。同時(shí)，溴氰蟲(chóng)酰胺處理組縮短了成蟲(chóng)的產(chǎn)卵歷期，但是對(duì)成蟲(chóng)產(chǎn)卵前期的影響不明顯。此外，與對(duì)照組相比，LC5、LC25和LC50劑量的溴氰蟲(chóng)酰胺顯著降低了雙委夜蛾4齡幼蟲(chóng)的RGR、RCR、ECI和ECD，降低了幼蟲(chóng)將食物轉(zhuǎn)化為生物量的能力；溴氰蟲(chóng)酰胺處理雙委夜蛾4齡幼蟲(chóng)24 h后顯著降低了其體內(nèi)碳水化合物的含量，而且這種不利影響持續(xù)到48 h和72 h，同時(shí)，溴氰蟲(chóng)酰胺處理也顯著降低了4齡幼蟲(chóng)體內(nèi)脂質(zhì)和蛋白質(zhì)的含量，阻礙了雙委夜蛾幼蟲(chóng)正常的生長(zhǎng)發(fā)育和繁殖。較低致死劑量的溴氰蟲(chóng)酰胺可以抑制雙委夜蛾種群的生長(zhǎng)發(fā)育和繁殖，有利于長(zhǎng)期有效控制雙委夜蛾的發(fā)生。

雙委夜蛾；溴氰蟲(chóng)酰胺；生長(zhǎng)發(fā)育；繁殖；營(yíng)養(yǎng)利用

0 引言

【研究意義】雙委夜蛾（）屬鱗翅目（Lepidoptera）夜蛾科（Noctuidae），主要分布在日本、韓國(guó)、印度、菲律賓和印度尼西亞等地區(qū)，可危害玉米、小麥、大豆、花生和甘薯等作物幼嫩的芽和莖基部，嚴(yán)重時(shí)可引起斷壟[1-4]。近年來(lái)，該蟲(chóng)在山東、河南、山西等地的危害陸續(xù)被發(fā)現(xiàn)并呈上升態(tài)勢(shì)[5-6]。目前國(guó)內(nèi)尚未有登記用于防治雙委夜蛾的藥劑，尋找兼具觸殺、胃毒和內(nèi)吸的高效殺蟲(chóng)劑對(duì)雙委夜蛾的防治具有重要意義。殺蟲(chóng)劑在田間使用后，劑量會(huì)隨時(shí)間推移而逐漸降低，較低致死劑量的藥劑對(duì)靶標(biāo)害蟲(chóng)的行為、生理及種群發(fā)展也會(huì)產(chǎn)生影響[7-8]。因此，研究低致死劑量殺蟲(chóng)劑對(duì)靶標(biāo)害蟲(chóng)的影響對(duì)于科學(xué)使用農(nóng)藥、延緩抗藥性發(fā)展及降低害蟲(chóng)再猖獗的風(fēng)險(xiǎn)有重要價(jià)值?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】雙委夜蛾通常與二點(diǎn)委夜蛾（）混合發(fā)生，兩種害蟲(chóng)在生活習(xí)性、形態(tài)和危害特征上基本相似，在田間很難區(qū)分。但與二點(diǎn)委夜蛾相比，雙委夜蛾食量更大、危害期更長(zhǎng)、繁殖力更強(qiáng)，存在田間大暴發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)[5]。加之近年來(lái)由于秸稈還田，為其提供了隱蔽的場(chǎng)所，一般噴霧施藥防治效果不理想。農(nóng)藥種子包衣技術(shù)因目標(biāo)性強(qiáng)、操作方便、促進(jìn)農(nóng)作物壯苗等優(yōu)勢(shì)近年來(lái)得以廣泛應(yīng)用，尤其在地下害蟲(chóng)的防治上展現(xiàn)出廣闊的應(yīng)用前景。溴氰蟲(chóng)酰胺與氯蟲(chóng)苯甲酰胺一樣均為鄰甲酰氨基苯甲酰胺類殺蟲(chóng)劑，作用機(jī)制是激活昆蟲(chóng)肌肉細(xì)胞的魚(yú)尼丁受體，引起存儲(chǔ)于肌肉中的鈣離子釋放，使肌肉收縮癱瘓，最終導(dǎo)致昆蟲(chóng)死亡[9-11]。這類殺蟲(chóng)劑內(nèi)吸作用強(qiáng)且易被植物根吸收，可通過(guò)噴霧或種子包衣技術(shù)防治包括地下害蟲(chóng)在內(nèi)多種害蟲(chóng)[12-13]，且對(duì)農(nóng)田有益節(jié)肢動(dòng)物的安全性高[9,14-15]。目前，溴氰蟲(chóng)酰胺已用于玉米種子處理防治薊馬和蠐螬[16]，但對(duì)雙委夜蛾是否有效未見(jiàn)報(bào)道?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】相對(duì)于氯蟲(chóng)苯甲酰胺，溴氰蟲(chóng)酰胺對(duì)鱗翅目害蟲(chóng)具有更高的觸殺、胃毒和內(nèi)吸活性，種子包衣處理防治小地老虎（）、二點(diǎn)委夜蛾等地下害蟲(chóng)已展現(xiàn)出較好的應(yīng)用前景[12,17]，在廣泛使用前明確溴氰蟲(chóng)酰胺對(duì)雙委夜蛾等害蟲(chóng)是否存在引起再猖獗的風(fēng)險(xiǎn)十分必要?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】在實(shí)驗(yàn)室條件下測(cè)定溴氰蟲(chóng)酰胺在不同致死劑量下對(duì)雙委夜蛾生長(zhǎng)發(fā)育和繁殖、營(yíng)養(yǎng)利用以及生化物質(zhì)含量的影響，為在玉米田科學(xué)使用鄰甲酰氨基苯甲酰胺類殺蟲(chóng)劑防治該類害蟲(chóng)提供依據(jù)。

1 材料與方法

試驗(yàn)于2015—2016年在山東農(nóng)業(yè)大學(xué)完成。

1.1 試蟲(chóng)和藥劑

供試雙委夜蛾幼蟲(chóng)于2015年采集于河南洛陽(yáng)玉米田，以人工飼料（含玉米粉、小麥胚芽、啤酒酵母、復(fù)合維生素、尼泊金甲酯、蔗糖等）于實(shí)驗(yàn)室繼代飼養(yǎng)，成蟲(chóng)飼喂20%蜂蜜營(yíng)養(yǎng)液。飼養(yǎng)環(huán)境為（26±1）℃，（75±5）% RH，光周期為16 L﹕8 D。

94%溴氰蟲(chóng)酰胺原藥（上海杜邦農(nóng)化有限公司），先用丙酮配制成母液，再用0.05% Triton X-100水溶液稀釋成系列濃度，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.2 生物測(cè)定

采用殺蟲(chóng)劑混毒人工飼料法[18]。當(dāng)新制備的人工飼料溫度約40—50℃時(shí)，加入已配制好的6個(gè)濃度梯度的藥劑溶液，充分?jǐn)噭?，制備?.125、0.25、0.5、1、2、4 μg·g-1溴氰蟲(chóng)酰胺的混毒人工飼料。對(duì)照組用不含溴氰蟲(chóng)酰胺的0.05% Triton X-100水溶液處理。待不同處理的人工飼料冷凝后放入已滅菌的指形管中，約1 cm3每管。挑選新蛻皮的長(zhǎng)勢(shì)一致的健康4齡幼蟲(chóng)（12 h內(nèi)）于含人工飼料的指形管中，每管1頭幼蟲(chóng)。每濃度設(shè)置5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20頭幼蟲(chóng)。于溫度（26±1）℃，（75±5）% RH，光周期為16 L﹕8 D條件下飼養(yǎng)72 h后檢查死亡數(shù)并計(jì)算死亡率。以幼蟲(chóng)不能正常爬行，或用毛筆輕觸無(wú)反應(yīng)，或與對(duì)照組相比蟲(chóng)體嚴(yán)重皺縮為死亡。計(jì)算LC5、LC25、LC50和LC95。

1.3 溴氰蟲(chóng)酰胺對(duì)雙委夜蛾生長(zhǎng)發(fā)育和繁殖的影響

挑選同日蛻皮的600頭4齡幼蟲(chóng)進(jìn)行溴氰蟲(chóng)酰胺對(duì)雙委夜蛾生長(zhǎng)發(fā)育和繁殖影響的測(cè)定，其中，對(duì)照組（control）、LC5、LC25和LC50處理組分別為150頭幼蟲(chóng)。將挑取的新蛻皮4齡幼蟲(chóng)（12 h內(nèi)）挑入滅菌的指形管內(nèi)，每管1頭，飼喂含LC5、LC25和LC50劑量溴氰蟲(chóng)酰胺的人工飼料或者無(wú)毒飼料（對(duì)照組）（約1 cm3，制備方法同1.2），試驗(yàn)條件為溫度（26±1）℃，（75±5）% RH，光周期為16 L﹕8 D。于處理72 h后，將所有處理組中存活的個(gè)體轉(zhuǎn)移到裝有無(wú)毒人工飼料的滅菌新指形管內(nèi)，繼續(xù)飼養(yǎng)至化蛹，每日8：00觀察并記錄每頭幼蟲(chóng)4齡至化蛹的發(fā)育歷期。飼養(yǎng)期間，人工飼料保持新鮮以確保幼蟲(chóng)的正常生長(zhǎng)。將所有2日齡蛹編號(hào)并稱重，然后轉(zhuǎn)移到一次性塑料杯中（50 ml）至羽化為成蟲(chóng)，若20 d蛹未羽化則判定為死亡，記錄蛹的發(fā)育歷期。待蛹羽化后，分別隨機(jī)挑選29頭雌蟲(chóng)和雄蟲(chóng)對(duì)應(yīng)的2日齡蛹重進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。成蟲(chóng)以單雌和單雄配對(duì)于一次性產(chǎn)卵容器中（300 ml），飼喂20%蜂蜜營(yíng)養(yǎng)液。開(kāi)始產(chǎn)卵后，每日收集產(chǎn)在尼龍紗布上的卵并更換新紗布，計(jì)數(shù)每對(duì)成蟲(chóng)的日產(chǎn)卵量，記錄成蟲(chóng)的存活壽命和單雌產(chǎn)卵量。

1.4 溴氰蟲(chóng)酰胺對(duì)雙委夜蛾4齡幼蟲(chóng)營(yíng)養(yǎng)利用的影響

參考Xu等[19]的方法測(cè)定。將含LC5、LC25和LC50劑量溴氰蟲(chóng)酰胺的人工飼料或無(wú)毒飼料（1.3同期制備）切成約1 cm3的體積，稱重，裝入滅菌的指形管內(nèi)。挑選新蛻皮（12 h內(nèi)）的長(zhǎng)勢(shì)一致的健康4齡幼蟲(chóng)，逐頭稱重后放入裝有人工飼料的指形管中，每處理設(shè)5個(gè)重復(fù)，每重復(fù)10頭（=50）。于溫度（26±1）℃，（75±5）% RH，光周期為16 L﹕8 D條件下處理72 h，將幼蟲(chóng)、剩余的人工飼料、產(chǎn)生的糞便分離，于45℃恒溫干燥箱處理72 h后分別稱重。另外，再挑選30頭新蛻皮（12 h內(nèi)）長(zhǎng)勢(shì)一致的健康4齡幼蟲(chóng)稱重，于45℃恒溫干燥箱處理72 h后稱蟲(chóng)干重，計(jì)算幼蟲(chóng)的鮮重﹕干重比值，折算藥劑處理前所有處理組幼蟲(chóng)個(gè)體的干重。同樣方法計(jì)算各處理人工飼料的鮮重﹕干重比值折算試驗(yàn)初始飼料干重值。計(jì)算各處理幼蟲(chóng)取食人工飼料、體重增長(zhǎng)及產(chǎn)生糞便的干重，所有質(zhì)量均精確至0.01 mg（Sartorius BT 125D）。采用Waldbauer[20]的公式計(jì)算營(yíng)養(yǎng)利用指數(shù)：

近似消化率（approximate digestibility，AD）=100（-）/，相對(duì)取食量（relative consumption rate，RCR）=/，相對(duì)生長(zhǎng)量（relative growth rate，RGR）=/，攝入食物轉(zhuǎn)化效率（efficiency of conversion of ingested food，ECI）=100/，消化食物轉(zhuǎn)化效率（efficiency of conversion of digested food，ECD）=100/（-），其中，為實(shí)驗(yàn)周期持續(xù)的天數(shù)，為幼蟲(chóng)初始平均干重，為取食食物的干重，為產(chǎn)生糞便的干重，為蟲(chóng)體增加的干重。

1.5 生化指標(biāo)測(cè)定樣品準(zhǔn)備

挑選新蛻皮（12 h內(nèi)）長(zhǎng)勢(shì)一致的健康4齡幼蟲(chóng)飼喂含溴氰蟲(chóng)酰胺的人工飼料或無(wú)毒飼料（對(duì)照組），每處理200頭幼蟲(chóng)。于溫度（26±1）℃，（75±5）% RH，光周期16 L﹕8 D條件下處理24、48和72 h后，在每個(gè)處理中分別挑選30頭存活的試蟲(chóng)用滅菌去離子水清洗，并用液氮冷凍后保存于-80℃冰箱，備用。每個(gè)生化指標(biāo)設(shè)置4個(gè)重復(fù)，每重復(fù)1頭幼蟲(chóng)。

1.6 碳水化合物、脂質(zhì)和蛋白質(zhì)含量的測(cè)定

碳水化合物含量測(cè)定參考Zhao等[21]的方法。取1頭試蟲(chóng)，加入500 μl 10%三氯乙酸（TCA），冰浴下充分勻漿，12 000 r/min離心10 min（4℃）。每個(gè)樣品取20 μl上清液轉(zhuǎn)移到新的1.5 ml離心管中，加入80 μl 10% TCA。再向每個(gè)樣品加入600 μl 0.2%蒽酮（200 mg蒽酮溶解于100 ml H2SO4），90℃恒溫水浴加熱10 min。所有樣品于波長(zhǎng)630 nm處測(cè)定吸光度。用葡萄糖制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算每個(gè)樣品中碳水化合物的含量。

脂質(zhì)含量測(cè)定參考Xu等[19]的方法。取1頭幼蟲(chóng)加入200 μl 2% Na2SO4溶液，冰浴下充分勻漿，加入750 μl氯仿﹕甲醇（2﹕1）混合溶液進(jìn)行提取，離心10 min（12 000 r/min，4℃）。再?gòu)拿總€(gè)樣品中各取500 μl上清液轉(zhuǎn)移到新的1.5 ml離心管，于40℃干燥。最后，每個(gè)樣品用500 μl H2SO4溶解，于90℃恒溫水浴鍋中水浴10 min。分別取30 μl樣品和270 μl香蘭素（Aladdin Industrial Inc., 上海）加入酶標(biāo)板中反應(yīng)30 min。用膽固醇（Solarbio，北京）制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。所有樣品于波長(zhǎng)530 nm處測(cè)定吸光度。

蛋白質(zhì)測(cè)定參照Bradford[22]的方法。取1頭幼蟲(chóng)加入400 μl Tris-HCl（pH 7.1）（50 mmol·L-1，0.5% Triton X-100和20%蔗糖），冰浴下充分勻漿，12 000 r/min離心10 min（4℃）。再取30 μl上清液于酶標(biāo)板中，加入150 μl 0.01%考馬斯亮藍(lán)G-250（Solarbio，北京），反應(yīng)5 min，于波長(zhǎng)595 nm處測(cè)定吸光度。使用牛血清蛋白（Solarbio，北京）制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。本研究所有吸光度均使用BioTek SynergyTM2 Multi-Mode Reader（BioTek Instruments，Inc. Winooski，Vermont，USA）測(cè)定。

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

采用Abbott’s公式，利用對(duì)照組的死亡率將藥劑處理組死亡率進(jìn)行校正，并用SPSS 軟件進(jìn)行probit分析（version 17.0，SPSS Inc.，USA）。營(yíng)養(yǎng)利用及生化物質(zhì)含量數(shù)據(jù)用單因素方差分析（ANOVA），Tukey test（＜0.05）。應(yīng)用SigmaPlot 12.5作圖。

2 結(jié)果

2.1 溴氰蟲(chóng)酰胺對(duì)雙委夜蛾4齡幼蟲(chóng)的毒力

藥劑處理72 h后，溴氰蟲(chóng)酰胺對(duì)雙委夜蛾4齡幼蟲(chóng)的LC5、LC25、LC50和LC95分別為0.13、0.34、0.66和3.36 μg·g-1人工飼料（表1）。

表1 溴氰蟲(chóng)酰胺對(duì)雙委夜蛾4齡幼蟲(chóng)的毒力

2.2 溴氰蟲(chóng)酰胺對(duì)雙委夜蛾生長(zhǎng)發(fā)育和繁殖的影響

溴氰蟲(chóng)酰胺處理對(duì)雙委夜蛾的生長(zhǎng)發(fā)育產(chǎn)生了明顯的影響。與對(duì)照組相比，處理組幼蟲(chóng)的發(fā)育歷期顯著延長(zhǎng)，LC5、LC25和LC50劑量下幼蟲(chóng)的發(fā)育歷期分別延長(zhǎng)了1.63、1.75和5.48 d。溴氰蟲(chóng)酰胺處理后影響了雌、雄蛹的發(fā)育歷期，與對(duì)照組（13.63 d）相比，僅LC50處理（15.03 d）雌蛹的歷期顯著延長(zhǎng)，而LC25和LC50處理組雄蛹的歷期分別為14.89和15.65 d，顯著長(zhǎng)于對(duì)照組的14.09 d。另外，溴氰蟲(chóng)酰胺處理組縮短了雌、雄成蟲(chóng)的壽命，但與對(duì)照組差異不顯著（表2）。

由圖1可見(jiàn)，溴氰蟲(chóng)酰胺處理顯著降低了雙委夜蛾幼蟲(chóng)的化蛹率（＜0.001）和蛹的羽化率（＜0.001），對(duì)雌雄蛹量、單雌產(chǎn)卵量、產(chǎn)卵歷期和成蟲(chóng)產(chǎn)卵前期（adult preoviposition period，APOP）也存在影響（表3）。LC5、LC25和LC50處理組雌蛹重分別為130.2、127.8和127.5 mg，顯著低于對(duì)照組的蛹重（146.7 mg），但是對(duì)雄蛹重?zé)o顯著影響。溴氰蟲(chóng)酰胺處理后，LC5、LC25和LC50組的單雌產(chǎn)卵量分別為558.8、506.9和462.8粒，顯著低于對(duì)照組（755.1粒）。此外，溴氰蟲(chóng)酰胺處理組縮短了成蟲(chóng)的產(chǎn)卵歷期，但是對(duì)成蟲(chóng)產(chǎn)卵前期的影響不明顯。

圖1 溴氰蟲(chóng)酰胺對(duì)雙委夜蛾幼蟲(chóng)化蛹率和蛹羽化率的影響

表2 溴氰蟲(chóng)酰胺對(duì)雙委夜蛾幼蟲(chóng)和蛹發(fā)育歷期及成蟲(chóng)壽命的影響

數(shù)據(jù)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤，同一列數(shù)值后面不同字母表示差異顯著（＜0.05）（Tukey test）。下同

Data were mean±SE, means marked with different letters in the same column indicated significantly different at＜0.05 level (Tukey test). The same as below

2.3 溴氰蟲(chóng)酰胺對(duì)雙委夜蛾4齡幼蟲(chóng)營(yíng)養(yǎng)利用的影響

溴氰蟲(chóng)酰胺處理雙委夜蛾4齡幼蟲(chóng)后對(duì)其營(yíng)養(yǎng)利用指數(shù)影響較大（表4）。與對(duì)照組相比，溴氰蟲(chóng)酰胺處理組幼蟲(chóng)的相對(duì)生長(zhǎng)量（RGR）、相對(duì)取食量（RCR）、攝入食物轉(zhuǎn)化效率（ECI）和消化食物轉(zhuǎn)化效率（ECD）均顯著降低，LC25和LC50兩個(gè)處理組差異不顯著。但是，溴氰蟲(chóng)酰胺處理組增加了雙委夜蛾幼蟲(chóng)的近似消化率（AD），對(duì)照組和LC5處理之間無(wú)顯著差異。

2.4 溴氰蟲(chóng)酰胺對(duì)雙委夜蛾4齡幼蟲(chóng)生化物質(zhì)含量的影響

由圖2可以看出，雙委夜蛾幼蟲(chóng)暴露于不同劑量的溴氰蟲(chóng)酰胺后，其體內(nèi)的碳水化合物、脂質(zhì)及蛋白質(zhì)的含量發(fā)生了顯著變化。LC5、LC25和LC50劑量的溴氰蟲(chóng)酰胺處理雙委夜蛾4齡幼蟲(chóng)24 h后顯著降低了其體內(nèi)碳水化合物的含量，而且這種不利影響持續(xù)到48 h和72 h（＜0.001）（圖2-A）。同時(shí)，溴氰蟲(chóng)酰胺處理也顯著降低了4齡幼蟲(chóng)體內(nèi)脂質(zhì)（24 h：＜0.001；48 h：＜0.001；72 h：＜0.001）（圖2-B）和蛋白質(zhì)的含量（24 h：=0.0012；48 h：=0.0113；72 h：＜0.001）（圖2-C）。

表3 溴氰蟲(chóng)酰胺對(duì)雙委夜蛾蛹重、產(chǎn)卵量、產(chǎn)卵歷期和成蟲(chóng)產(chǎn)卵前期的影響

表4 溴氰蟲(chóng)酰胺處理雙委夜蛾4齡幼蟲(chóng)72 h對(duì)營(yíng)養(yǎng)利用的影響

圖2 溴氰蟲(chóng)酰胺對(duì)雙委夜蛾4齡幼蟲(chóng)碳水化合物（A）、脂質(zhì)（B）及蛋白質(zhì)（C）含量的影響

Fig. 2 Effects of cyantraniliprole at different dosages on content of carbohydrate (A), lipid (B), and protein (C) ofafter treated on the 4th instar larvae

3 討論

明確殺蟲(chóng)劑對(duì)靶標(biāo)害蟲(chóng)的低致死效應(yīng)對(duì)于指導(dǎo)新農(nóng)藥科學(xué)使用、延緩昆蟲(chóng)抗藥性發(fā)展、避免害蟲(chóng)再猖獗等均有重要價(jià)值。在田間狀態(tài)下，雖然殺蟲(chóng)劑最初的高劑量可以直接殺死害蟲(chóng)，但這種劑量往往只能維持較短的時(shí)間，隨著藥劑降解和代謝，劑量多降為相對(duì)較低甚至亞致死的劑量，存活下來(lái)的害蟲(chóng)會(huì)相對(duì)長(zhǎng)期接觸這種劑量的殺蟲(chóng)劑，也能引起一系列生理或行為上的變化[8,23]。溴氰蟲(chóng)酰胺對(duì)多種鱗翅目害蟲(chóng)幼蟲(chóng)具有較高活性[17-19,24-25]。本研究表明，溴氰蟲(chóng)酰胺對(duì)雙委夜蛾4齡幼蟲(chóng)同樣毒力較高，而接觸相對(duì)較低劑量的溴氰蟲(chóng)酰胺能夠使雙委夜蛾幼蟲(chóng)的取食能力下降，減緩幼蟲(chóng)的正常生長(zhǎng)，降低幼蟲(chóng)的質(zhì)量和延長(zhǎng)發(fā)育歷期。并且在幼蟲(chóng)變態(tài)為蛹的過(guò)程中，由于溴氰蟲(chóng)酰胺處理組幼蟲(chóng)能量物質(zhì)積累不足導(dǎo)致化蛹率降低，并出現(xiàn)了部分低質(zhì)量的蛹，蛹的發(fā)育歷期也有所延長(zhǎng)。近似的結(jié)果在其他鱗翅目害蟲(chóng)如煙青蟲(chóng)（）[18]、斜紋夜蛾（）[24]上也有報(bào)道。

相對(duì)較低致死劑量的溴氰蟲(chóng)酰胺延長(zhǎng)了雙委夜蛾幼蟲(chóng)的發(fā)育歷期，這與其他研究報(bào)道一致[18-19,24-25]。原因可能是多方面的，一種解釋是溴氰蟲(chóng)酰胺降低了昆蟲(chóng)的取食能力后，其體內(nèi)的碳水化合物、脂質(zhì)和蛋白質(zhì)等化學(xué)物質(zhì)的含量也相應(yīng)降低，直接影響到昆蟲(chóng)正常的生理和生化反應(yīng)過(guò)程[26]，導(dǎo)致幼蟲(chóng)發(fā)育時(shí)間延長(zhǎng)[27-28]。另外，幼蟲(chóng)體內(nèi)的能量物質(zhì)更多用于代謝解毒，無(wú)法維持蟲(chóng)體的正常生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程，因此溴氰蟲(chóng)酰胺處理后的幼蟲(chóng)需要更長(zhǎng)的時(shí)間去積累足夠的能量物質(zhì)滿足正常的生長(zhǎng)發(fā)育所需。再有一種可能是藥劑影響到昆蟲(chóng)對(duì)營(yíng)養(yǎng)的利用效率。

昆蟲(chóng)的營(yíng)養(yǎng)利用是指昆蟲(chóng)將所取食的食物轉(zhuǎn)化為生物量的能力，是攝食生態(tài)學(xué)的重要組成部分[26,29]，植物提取物或殺蟲(chóng)劑往往會(huì)對(duì)昆蟲(chóng)的營(yíng)養(yǎng)利用效率產(chǎn)生不利的影響[19,26]。本研究中，溴氰蟲(chóng)酰胺處理雙委夜蛾幼蟲(chóng)后提高了近似消化率，這是因?yàn)橛紫x(chóng)需要克服和彌補(bǔ)由拒食影響導(dǎo)致的缺陷和不足，降低了食物在消化道中的蠕動(dòng)速度，進(jìn)而導(dǎo)致了相對(duì)生長(zhǎng)量的降低[26]。相對(duì)生長(zhǎng)量是和昆蟲(chóng)的體重密切相關(guān)的物理量，相對(duì)生長(zhǎng)量降低表明含溴氰蟲(chóng)酰胺的人工飼料不適合雙委夜蛾幼蟲(chóng)的取食，表現(xiàn)為拒食效應(yīng)[19,29]。本研究中溴氰蟲(chóng)酰胺處理組的幼蟲(chóng)可以暫時(shí)維持相對(duì)消化率，卻無(wú)法維持相對(duì)生長(zhǎng)量，也為幼蟲(chóng)通過(guò)取食和消化食物得到的大部分能量物質(zhì)參與了解毒過(guò)程而不是維持幼蟲(chóng)的正常生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程提供了間接證據(jù)。不過(guò)溴氰蟲(chóng)酰胺處理后對(duì)雌蛹和雄蛹質(zhì)量的影響存在著明顯的不同，反映出不同性別幼蟲(chóng)對(duì)營(yíng)養(yǎng)需求存在差異，那么溴氰蟲(chóng)酰胺處理對(duì)雙委夜蛾種群的性別組成存在何種影響還需要進(jìn)一步明確。

此外，殺蟲(chóng)劑會(huì)對(duì)昆蟲(chóng)成蟲(chóng)的交配行為等產(chǎn)生一定的影響[19,30-31]。低劑量的溴氰蟲(chóng)酰胺對(duì)雙委夜蛾的成蟲(chóng)壽命及成蟲(chóng)產(chǎn)卵前期未產(chǎn)生顯著影響。但縮短了成蟲(chóng)的產(chǎn)卵歷期，這些改變導(dǎo)致了雌成蟲(chóng)的產(chǎn)卵量顯著降低，從而不利于種群的發(fā)展。

總之，溴氰蟲(chóng)酰胺對(duì)雙委夜蛾幼蟲(chóng)具有較高的致死活性，同時(shí)在低劑量下對(duì)雙委夜蛾種群的發(fā)展也存在不利影響。但是，由于本試驗(yàn)雙委夜蛾是實(shí)驗(yàn)室繼代飼養(yǎng)，其敏感性可能與田間種群存在一定誤差，因此影響其防控效果。然而，當(dāng)雙委夜蛾暴露于低于無(wú)可觀察效應(yīng)濃度（no observed effect concentration， NOEC）的溴氰蟲(chóng)酰胺時(shí)是否有刺激現(xiàn)象還需進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

溴氰蟲(chóng)酰胺對(duì)雙委夜蛾個(gè)體存在較強(qiáng)的急性致死效應(yīng)，而幸存?zhèn)€體在較低致死劑量下，溴氰蟲(chóng)酰胺還可進(jìn)一步抑制其種群增長(zhǎng)，再猖獗的風(fēng)險(xiǎn)較低。低致死劑量種群抑制效應(yīng)提示，將鄰甲酰氨基苯甲酰胺類殺蟲(chóng)劑納入對(duì)雙委夜蛾類農(nóng)業(yè)害蟲(chóng)的綜合治理是合理的。

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（責(zé)任編輯 岳梅）

Effects of cyantraniliprole on development, fecundity and nutritional utilization of

DING JinFeng1, XU ChunMei1, ZHANG ZhengQun2, ZHAO YunHe1, LIU Feng1, MU Wei1

(1Shandong Provincial Key Laboratory of Pesticide Toxicology & Application Technique, College of Plant Protection, Shandong Agricultural University, Taian 271018, Shandong;2College of Horticultural Science and Engineering, Shandong Agricultural University, Taian 271018, Shandong)

In order to clarify the control effect of cyantraniliprole on, the effects of cyantraniliprole at low-lethal dosages on the growth, reproduction and nutritional utilization were studied after treated the 4th instar larvae of.The toxicity, as well as the nutritional utilization and the content of biochemical substances of cyantraniliprole on the 4th instar larvae ofwere determined by using the method of artificial diet mixed with insecticides. The sublethal effects of cyantraniliprole on growth and development index: developmental time of larvae and pupae, mean longevity of adults, fecundity of females, the rate of pupation and eclosion were investigated. The feeding indices, such as the approximate digestibility (AD), the relative consumption rate (RCR), the relative growth rate (RGR), the efficiency of conversion of ingested food (ECI), and the efficiency of conversion of digested food (ECD) were determined at 72 h after treatment with different dosages of cyantraniliprole, and the contents of nutrients such as carbohydrates, proteins and lipids were also analyzed at 24, 48 and 72 h after cyantraniliprole treatment.The result of bioassay showed that cyantraniliprole had high toxicity against 4th instar larvae of, the LC50value was 0.66 μg·g-1artificial diet. The concentrations that caused 5% and 25% mortalities were 0.13 and 0.34 μg·g-1artificial diet, respectively. After being treated with cyantraniliprole, the durations of the 4th instar to 6th instar larvae stage were significantly prolonged 1.63, 1.75 and 5.48 days in the LC5, LC25and LC50treatments, respectively. The period of pupae was prolonged while the period of adults was shortened, the pupation and eclosion rate were also declined. In addition, the pupal weight of femalein LC5(130.2 mg), LC25(127.8 mg) and LC50(127.5 mg) treatment groups was significantly reduced compared with the control group (146.7 mg). However, there was no significant difference in the pupal weight of male. The fecundity of female adults was also greatly decreased after treated with sublethal concentrations of cyantraniliprole, with 755.1, 558.8, 506.9 and 462.8 eggs/female, in the control, LC5, LC25, and LC50group, respectively. Meanwhile, the oviposition period was also significantly shortened, but cyantraniliprole did not have significant effect on the adult preoviposition period. compared with the control group, cyantraniliprole had markedly antifeedant effects, which significantly decreased the RGR, RCR, ECI and ECD of larvae. The amount of total carbohydrate in the 4th instar larvae ofin cyantraniliprole-treated groups decreased significantly compared with the control group in 24 h, similarly, from 48 h to 72 h. Meanwhile, the effects on the contents of proteins and lipids in the treatment groups were similar to carbohydrates. All these adversely affected the normal growth and development of.Low-lethal dosages of cyantraniliprole can suppress the development and fecundity ofpopulation, which is beneficial to the long-term control of

; cyantraniliprole; development; fecundity; nutritional utilization

2017-05-27；

國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃（2016YFD0200500）

接受日期：2017-06-16

聯(lián)系方式：丁金鳳，E-mail：zcxdjf@163.com。通信作者慕衛(wèi)，Tel/Fax：0538-8242611；E-mail：muwei@sdau.edu.cn