薄士儒，宋學(xué)良，王全凱

（1.吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院，吉林吉林132101；2.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)中藥材學(xué)院，吉林長春130000）

銀翹散對炎癥小鼠中性粒細(xì)胞吞噬力影響的試驗研究

薄士儒1*，宋學(xué)良1，王全凱2

（1.吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院，吉林吉林132101；2.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)中藥材學(xué)院，吉林長春130000）

通過試驗研究銀翹散湯劑對于細(xì)菌感染的小鼠中性粒細(xì)胞吞噬力產(chǎn)生的影響，旨在探究銀翹散對中性粒細(xì)胞吞噬率的影響效果。隨著不斷給藥，用藥組小鼠血液中的中性粒細(xì)胞吞噬率不斷增強，遠(yuǎn)高于模型對照組，并且高于正常水平。這表明，銀翹散可以促進血液中性粒細(xì)胞對細(xì)菌的吞噬能力，進而改善機體的免疫功能。

銀翹散；中性粒細(xì)胞；吞噬能力

銀翹散是十分著名的傳統(tǒng)中藥方劑，而作為免疫系統(tǒng)的“先鋒官”——中性粒細(xì)胞是免疫能力強弱的一個標(biāo)識，如何促進其功能的增強是一個重要的研究方向。因此，本次試驗銀翹散為研究對象，研究其對血液中性粒細(xì)胞吞噬能力的作用，進而探究銀翹散對于機體免疫功能的影響。

1 儀器與材料

分析天平；顯微鏡；高壓蒸汽滅菌器；微量移液器等均為實驗常用儀器。

金銀花，桔梗，竹葉，連翹，生甘草，薄荷，淡豆豉，荊芥，牛蒡子（均購自吉林市科田大藥房）；PBS、肝素鈉、淋巴細(xì)胞分離液（賽奧克試劑公司）；乙醚、乙醇等試劑均為分析純。

2 實驗方法

2.1 銀翹散湯劑的制備

按組方配比稱取各藥煮沸、過濾，并將所得濾液進行濃縮，使其藥液濃度為1g/ml。將所得藥液密封，冷卻。放入4℃冰箱中備用。

2.2 細(xì)菌菌液的制備

培養(yǎng)基及菌液按照文獻方法進行制備，并通過預(yù)實驗確定細(xì)菌接種濃度為1×108CFU/ml。

2.3 建立動物模型

將48只健康清潔級小鼠隨機分為用藥組，健康對照組以及模型對照組。麻醉，接種細(xì)菌（注射量為0.2ml/只）。感染細(xì)菌后2小時，對用藥組小鼠進行灌胃給藥（0.4ml/只），并將等量的無菌生理鹽水對模型對照組以及健康對照組小鼠進行灌胃。分別于用藥前，用藥后48小時、用藥后72小時通過眼球取血。

2.4 細(xì)胞吞噬試驗

吸取2ml加入肝素鈉的抗凝血，再加2mlPBS進行稀釋。將稀釋后的混合液注入到裝有4ml淋巴細(xì)胞分層液的離心管中，使用水平離心機2000rpm/min離心20min，離心后的細(xì)胞出現(xiàn)分層現(xiàn)象。吸出上面的三層（血漿，單核細(xì)胞層以及分層液）向離心管中加入5倍體積的PBS混合均勻后離心3次（1500rpm/min，離心15min）。取粒細(xì)胞加入5ml濃度為（8.3g/L）氯化銨溶液，破壞紅細(xì)胞后，37℃水浴 10min 之后離心（2000rpm/min，10min），棄去上清液，加入100μlPBS制成細(xì)胞懸液,進行推片染色及顯微觀察中性粒細(xì)胞吞噬金黃色葡萄球菌情況，并統(tǒng)計吞噬指數(shù)與吞噬率。

吞噬細(xì)胞百分率（%）：即100個中性粒細(xì)胞中吞噬細(xì)菌的細(xì)胞數(shù)。

吞噬指數(shù)：將100個中性粒細(xì)胞所吞噬的細(xì)菌總數(shù)除以100，得到的每個細(xì)胞吞噬細(xì)菌的平均數(shù)。

3 實驗結(jié)果與分析

3.1 試驗數(shù)據(jù)

應(yīng)用SPSS軟件對試驗數(shù)據(jù)進行分析處理。

3.2 結(jié)果分析

通過表1、表2可以看出：在給藥前，由于接種了金黃色葡萄球菌的菌液，從而導(dǎo)致健康對照組小鼠血液中的中性粒細(xì)胞吞噬率及吞噬指數(shù)明顯高于用藥組與模型對照組，且差異十分明顯；而用藥組與模型對照組小鼠的細(xì)胞吞噬率及吞噬指數(shù)基本處于相同的水平。用藥后的48小時，模型對照組與健康對照組小鼠血液中的中性粒細(xì)胞的吞噬率及吞噬指數(shù)基本與用藥前相同，用藥組小鼠血液中的中性粒細(xì)胞的吞噬率及吞噬指數(shù)呈明顯的上升趨勢，且增加的幅度較大；在用藥后72小時，用藥組小鼠血液中的中性粒細(xì)胞的吞噬率及吞噬指數(shù)持續(xù)呈上升的趨勢，并且要略高于健康對照組，而模型對照組與健康對照組基本無變化。

4 結(jié)論

通過對小鼠血液內(nèi)的中性粒細(xì)胞的吞噬能力進行測定發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過銀翹散湯劑的灌服，用藥組小鼠體內(nèi)的中性粒細(xì)胞的吞噬能力得到了很大的提高，并且高于正常水平。由此表明，銀翹散可明顯提高體內(nèi)中性粒細(xì)胞的吞噬功能，從而改善機體的免疫能力。

表1銀翹散對炎癥小鼠中性粒細(xì)胞吞噬細(xì)胞百分率試驗結(jié)果（±SD） 單位（%）

表1銀翹散對炎癥小鼠中性粒細(xì)胞吞噬細(xì)胞百分率試驗結(jié)果（±SD） 單位（%）

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表2銀翹散對炎癥小鼠中性粒細(xì)胞吞噬指數(shù)試驗結(jié)果（±SD） 單位（個）

表2銀翹散對炎癥小鼠中性粒細(xì)胞吞噬指數(shù)試驗結(jié)果（±SD） 單位（個）

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R363

A

10.14025/j.cnki.jlny.2017.23.028

薄士儒，碩士，助教，研究方向：藥用動植物資源的品質(zhì)評價與產(chǎn)品開發(fā)。