奉 佳，楊 輝，顏克旭，劉增再，譚 丹，陳 智，寧華杰

（湖南省長(zhǎng)沙市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，湖南長(zhǎng)沙410013）

兩種重組禽流感病毒H5亞型疫苗免疫效果的研究

奉 佳，楊 輝，顏克旭，劉增再，譚 丹，陳 智，寧華杰※

（湖南省長(zhǎng)沙市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，湖南長(zhǎng)沙410013）

為了更好地評(píng)價(jià)禽流感疫苗免疫效果，有效預(yù)防高致病性禽流感的發(fā)生，選用兩種重組禽流感病毒H5亞型疫苗（Re-6株、Re-6株+Re-8株）對(duì)14日齡雛雞開(kāi)展免疫效果的比較試驗(yàn)，結(jié)果表明：從免疫抗體水平來(lái)看，免疫Re-6株疫苗的A組雞群在首免后90d抗體水平維持在7log2以上,之后逐漸下降；免疫Re-6株+Re-8株疫苗的B、C組雞群在首免后28d達(dá)到高峰，隨之下降，當(dāng)C組在56日齡加強(qiáng)免疫后，至180d抗體水平仍維持在7.6log2以上。從群體免疫抗體合格率來(lái)看，A組免疫合格率至180d低于70%標(biāo)準(zhǔn)，B、C組免疫合格率一直保持70%以上，但C組比B組免疫合格率更高。H5亞型疫苗（Re-6株、Re-6株+Re-8株）均能產(chǎn)生較好的免疫效果，但（Re-6株+Re-8株）疫苗的有效保護(hù)期更長(zhǎng)，尤其是加強(qiáng)免疫之后，免疫保護(hù)率更高。因此建議家禽免疫H5亞型（Re-6株+Re-8株）疫苗，蛋雞適當(dāng)加強(qiáng)免疫，從而達(dá)到有效預(yù)防禽流感的目的。

禽流感；H5亞型疫苗；免疫效果

高致病性禽流感（H i ghl y Pat hogeni c Avi an Inf l uenza,H PAI）是由正粘病毒科流感病毒屬A型流感病毒引起的以禽類(lèi)為主的烈性傳染病。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為必須報(bào)告的動(dòng)物傳染病，我國(guó)將其列為一類(lèi)動(dòng)物疫病。

目前，各國(guó)對(duì)禽流感的預(yù)防和控制采取措施各不相同，我國(guó)采用疫苗免疫和撲殺相結(jié)合的防控策略，疫苗免疫仍是當(dāng)前預(yù)防高致病性禽流感的重要手段[1]。自2005年開(kāi)始，我國(guó)開(kāi)始實(shí)施H 5N1亞型高致病性禽流感全面免疫政策，期間疫苗毒株由Re-1株、Re-4株、Re-5株不斷更替[2]。近年來(lái)，由于全國(guó)各地禽流感流行毒主要抗原位點(diǎn)變異數(shù)量增多、變異程度加劇，毒株流行趨勢(shì)不斷轉(zhuǎn)變，為了提高疫苗與流行毒株的匹配性，更好地防控禽流感，2015年12月10日，農(nóng)業(yè)部辦公廳下發(fā)《關(guān)于調(diào)整高致病性禽流感疫苗種毒的通知》（農(nóng)辦醫(yī)[2015]51號(hào)），我市禽流感政府采購(gòu)苗由重組禽流感病毒滅活疫苗（H 5N1，Re-6株）調(diào)整為重組禽流感病毒H 5亞型二價(jià)滅活疫苗（H 5N1，Re-6株+Re-8株）。為更好地防控高致病性禽流感，長(zhǎng)沙市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心開(kāi)展了兩種重組禽流感病毒H 5亞型疫苗免疫效果的研究。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)疫苗

重組禽流感病毒滅活疫苗 (H 5N1亞型，Re-6株)，批號(hào)：2015088；重組禽流感病毒H 5亞型二價(jià)滅活疫苗（H 5N1亞型，Re-6株+Re-8株），批號(hào)：2016030，均由肇慶大華農(nóng)生物藥品有限公司提供。

1.1.2 試驗(yàn)試劑

禽流感病毒H 5亞型Re-6株血凝抑制試驗(yàn)抗原，批號(hào)：2015021；禽流感病毒H 5亞型Re-6株陽(yáng)性血清，批號(hào)：2015004；禽流感病毒H 5亞型Re-8株血凝抑制試驗(yàn)抗原，批號(hào)：2016005；禽流感病毒H 5亞型Re-8株陽(yáng)性血清，批號(hào)：2016001，均由哈爾濱維科生物技術(shù)有限公司提供。

1.1.3 試驗(yàn)動(dòng)物

瀏陽(yáng)市淳口鎮(zhèn)某家禽養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)14日齡雛雞（廣東清遠(yuǎn)雞）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)分組及設(shè)計(jì)：試驗(yàn)分組見(jiàn)表1。

表1 兩種重組禽流感病毒H5亞型疫苗免疫試驗(yàn)分組情況

A組、B組和C組首免后分別于28d、60d、90d、120d、150d、180d隨機(jī)采集60只雞血樣；每次采樣D組隨機(jī)采集30只雞血樣，同時(shí)檢測(cè)禽流感病毒H 5亞型Re-6株、Re-8株的H I抗體效價(jià)。

1.2.2 檢測(cè)方法及判定

血凝（H A）和血凝抑制（H I）試驗(yàn)嚴(yán)格按照高致病性禽流感診斷技術(shù)（GB/T 18936-2003）中血凝（H A）和血凝抑制（H I）試驗(yàn)方法,結(jié)果判定以完全抑制4H AU抗原的血清最高稀釋倍數(shù)作為H I滴度。只有陰性對(duì)照孔血清滴度不大于2l og2，陽(yáng)性對(duì)照孔血清誤差不超過(guò)1個(gè)滴度，實(shí)驗(yàn)結(jié)果才有效。H I價(jià)小于或等于3l og2判定H I試驗(yàn)陰性，H I價(jià)等于4l og2為可疑，需重復(fù)試驗(yàn)，H I價(jià)大于或等于5l og2為陽(yáng)性。當(dāng)H I價(jià)為陽(yáng)性時(shí)，判定為免疫抗體合格。

2 結(jié)果

2.1 兩種重組禽流感病毒H5亞型疫苗免疫后H5亞型Re-6株、Re-8株HI抗體水平

表3 各組H5亞型Re-8株HI抗體均值

試驗(yàn)結(jié)果表明，首免后28d禽流感病毒（Re-6株）免疫雞群（A、B、C組）抗體效價(jià)均值7.8～8.0 l og2。A組Re-6株有效保護(hù)期為5個(gè)月（150d）左右，B、C 組 Re-6株在 6個(gè)月（180d）以上。D組在不免疫基礎(chǔ)上，雞群28d抗體效價(jià)均值為3.5 l og2。禽流感病毒（Re-8株）免疫雞群（B、C組）在首免 28d抗體效價(jià)均值 7.8～8.0l og2，60d B組抗體水平下降至 6.1 l og2，C組因56日齡加強(qiáng)免疫一次，抗體水平一直維持在7.9 l og2，未免疫雞群（A、D組）H I抗體效價(jià)均值在0～4.4 l og2，詳見(jiàn)表 2、3，圖 1。

圖1 不同組別禽流感病毒H5亞型Re-6株、Re-8株HI抗體效價(jià)比較

2.2 兩種重組禽流感病毒H5亞型疫苗免疫后H5亞型 Re-6株、Re-8株群體抗體免疫合格率比較

試驗(yàn)結(jié)果表明，B、C組首免后28d禽流感病毒（Re-6株）和禽流感病毒（Re-8株）群體抗體免疫合格率100%，180d C組群體抗體免疫合格率高于B組6.1個(gè)百分點(diǎn)。A組雞群免疫禽流感病毒（Re-6株）疫苗90d群體抗體免疫合格率達(dá)100%，120d后群體抗體免疫合格率下降明顯，180d比120d下降48.3%，禽流感病毒（Re-8株）疫苗群體免疫合格率在(11.1～61.7)%，詳見(jiàn)表4、5。

表4 各組禽流感病毒H5亞型Re-6株免疫抗體合格率

表5 各組禽流感病毒H5亞型Re-8株免疫抗體合格率

3 討論與分析

3.1疫苗免疫是當(dāng)前防控高致病性禽流感的主動(dòng)措施和關(guān)鍵環(huán)節(jié)。近年來(lái)，Cl ade2.3.2.1分支毒株、Cl ade2.3.4.4分支毒株成為在我國(guó)大范圍存在的優(yōu)勢(shì)毒株[2]。為有效控制疫情發(fā)生，農(nóng)業(yè)部決定將生產(chǎn)種毒Re-6株更換成Re-6株+Re-8株。本研究表明，重組禽流感病毒H 5亞型二價(jià)滅活疫苗（H 5N1亞型，Re-6株+Re-8株）針對(duì)當(dāng)前流行毒株能產(chǎn)生良好的抗體反應(yīng)，具有較強(qiáng)的抗原針對(duì)性，能抵御病毒攻擊，達(dá)到免疫預(yù)防的效果。

3.2從表2、3可見(jiàn)，禽流感病毒（Re-6株）免疫雞群在首免28天后均達(dá)到較高抗體效價(jià) (抗體效價(jià)均值7.8～8l og2)，能有效保護(hù)雞群，符合H 5禽流感疫苗在免疫后第25～30天抗體水平達(dá)到高峰[3]。120d加強(qiáng)免疫組（C組）抗體均值明顯高于不加強(qiáng)免疫組（B組）2～3滴度，加強(qiáng)免疫比不加強(qiáng)免疫的效果明顯，與金大春[4]、張濟(jì)培[5]結(jié)論一致，禽流感疫苗2次免疫的免疫效果較好。

3.3從圖1可見(jiàn)，試驗(yàn)用抗原效價(jià)為Re-6株雞胚液H A效價(jià)不低于1∶512、Re-8株雞胚液H A效價(jià)不低于1∶256的疫苗免疫后，Re-6株、Re-8株免疫持續(xù)期可達(dá)6個(gè)月以上，與Bol t z等[6]報(bào)道禽流感加強(qiáng)免疫后5個(gè)月效價(jià)大幅下降時(shí)間有所延長(zhǎng)，可能與試驗(yàn)家禽的日齡、品種不同，對(duì)禽流感免疫產(chǎn)生H I抗體時(shí)間和所能達(dá)到的高度及維持的時(shí)間存在差異。

3.4從表4、5可見(jiàn)，A組禽流感（Re-6株）群體免疫抗體合格率在180d低于農(nóng)業(yè)部要求的70%的標(biāo)準(zhǔn)，群體免疫不合格，達(dá)不到免疫保護(hù)要求，應(yīng)加強(qiáng)免疫。B、C組群體免疫抗體合格率（88.3～100%）高于農(nóng)業(yè)部要求的70%的標(biāo)準(zhǔn)，從而能夠有效地控制動(dòng)物疫病的發(fā)生和流行。群體免疫抗體合格率是衡量免疫質(zhì)量、預(yù)警重大疫病的指標(biāo)之一。

[1]曾顯營(yíng)，田國(guó)彬，馮華朋，等.H5N1亞型禽流感滅活疫苗種毒Re-6株的生物學(xué)特性及免疫原性研究[C].第三屆中國(guó)黃羽肉雞行業(yè)發(fā)展大會(huì)，2012：233-237.

[2]蔣文明，李金平，侯廣宇，等.H5亞型高致病性禽流感病毒抗原性變異分析[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫，2016,33（9）：27-32.

[3]張?jiān)u滸，任濤，唐應(yīng)華，等.免疫程序與母源抗體對(duì)H5禽流感疫苗免疫鴨和鵝HI抗體水平的影響[J].中國(guó)獸醫(yī)科技，2005,35（8）：638-642.

[4]金大春，王躍川，潘杭君，等.快速型肉雞禽流感母源抗體消長(zhǎng)變化的觀察及最佳首免日齡的探討 [J].中國(guó)家禽，2008,30（24）：54-55.

[5]張濟(jì)培，陳建紅，陳響坤，等.肉鵝H5亞型禽流感疫苗免疫效果的研究[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2006,33（12）：94-97.

[6]Boltz D A，Douangngeun B，Sinthasak S，et al.Fieldassessment of an H5N1 inactivated vaccine in chickens and ducks in Lao PDR[J].Archives of Virology，2009，154（6）：939-944.

S851.34

A

1006-4907（2017）05-0028-03

10.3969/j.issn.1006-4907.2017.05.013

奉佳（1982～），女，瑤族，湖南溆浦人，獸醫(yī)師，碩士，主要從事動(dòng)物疫病防控工作，66775070@qq.com。

寧華杰，317660608@qq.com

2017-09-17