林翠鳳

（廣東省陽(yáng)江市江城區(qū)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，廣東陽(yáng)江 529500）

豬流行性腹瀉病毒分離鑒定和滅活疫苗免疫保護(hù)效果探討

林翠鳳

（廣東省陽(yáng)江市江城區(qū)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，廣東陽(yáng)江 529500）

豬流行性腹瀉病毒是誘發(fā)豬流行性腹瀉的關(guān)鍵因素，而豬流行性腹瀉容易造成養(yǎng)殖豬，尤其是豬仔的死亡，進(jìn)而給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失?；诖耍疚氖紫汝U述了豬流行性腹瀉的流行病學(xué)，緊接著分析了豬流行性腹瀉的臨床癥狀與病理變化，然后分析了豬流行性腹瀉病毒的分離鑒定，并進(jìn)行滅活免疫實(shí)驗(yàn)探究，希望能夠?yàn)榻窈笙嚓P(guān)問(wèn)題的研究提供一定的參考依據(jù)。

豬流行性腹瀉病毒；分離鑒定；滅活疫苗免疫保護(hù)

0 引言

豬流行性腹瀉是由豬流行性腹瀉病毒引起的急性、高度傳染性的腸道疾病，主要癥狀表現(xiàn)為嘔吐、水樣腹瀉以及脫水，容易造成感染豬仔的死亡。20世紀(jì)70年代中后期在比利時(shí)首次被發(fā)現(xiàn)，1982年正式被命名為豬流行性腹瀉，我國(guó)于1980年首次分離得到豬流行性腹瀉病毒。近些年來(lái)，我國(guó)各地區(qū)陸續(xù)發(fā)生了豬流行性腹瀉現(xiàn)象，帶來(lái)了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。

1 流行病學(xué)

豬流行性腹瀉可單一發(fā)生或者豬傳染性胃腸炎混合感染。豬流行性腹瀉病毒為類冠狀病毒，該病毒的殺死方法多種多樣。比如，在溫度達(dá)到65℃左右的環(huán)境下，經(jīng)過(guò)10min的時(shí)間就能夠?qū)⒃摬《練⑺?；又比如，?yáng)光下7h左右能夠滅活；還有，用濃度為0.5%苯酚將病毒暴露在37℃溫度中持續(xù)半個(gè)小時(shí)便能夠殺死[1]。由于市面上出售的疫苗種類多種多樣，既有聯(lián)合疫苗，又有基因缺失疫苗，不同疫苗的質(zhì)量也各不相同，再加上抗生素的濫用，導(dǎo)致豬流行性腹瀉的主流方式差異明顯，疫苗亂用現(xiàn)象隨處可見(jiàn)，嚴(yán)重影響了豬流行性腹瀉的有效治療[2]。

2 臨床癥狀與病理變化

人工感染的潛伏期，新生豬仔在15～30h的范圍內(nèi)，育肥豬通常為2d，自然感染的潛伏期則相對(duì)較長(zhǎng)。豬流行性腹瀉發(fā)生時(shí)，豬主要表現(xiàn)為水樣腹瀉，經(jīng)常性會(huì)伴有嘔吐。

豬流行性腹瀉經(jīng)常會(huì)以爆發(fā)性腹瀉的形式發(fā)生在非免疫斷奶豬仔（Ⅰ型）或者各年齡段豬（Ⅱ型）。豬流行性腹瀉癥狀在不同年齡豬上表現(xiàn)有一定的差異，年齡越大，癥狀越輕，年齡越小，癥狀越重，嚴(yán)重者極易導(dǎo)致患豬的死亡。在對(duì)豬流行性腹瀉進(jìn)行檢查的時(shí)候，主要病變?yōu)樾∧c膨脹，充滿淡黃色液體，腸壁變薄，個(gè)別小腸黏膜有出血點(diǎn)，腸系膜淋巴結(jié)水腫，小腸絨毛變短，重癥者絨毛萎縮，甚至消失。

3 滅活疫苗免疫試驗(yàn)

3.1 試驗(yàn)材料

2016年10月～2016年12月，選取本地某豬養(yǎng)殖企業(yè)感染流行性腹瀉病毒的24頭患豬進(jìn)行研究，并隨機(jī)分為四個(gè)組：A、B、C、D組，每組均為6頭，分別予以不同的滅活免疫苗保護(hù)措施。

試驗(yàn)時(shí)所用的疫苗均通過(guò)正常渠道從市場(chǎng)上選購(gòu)，分別為TB腹瀉特質(zhì)二聯(lián)滅活苗、青島易邦PEDV基因缺失苗。

本次試驗(yàn)的病毒來(lái)源均來(lái)自經(jīng)過(guò)分離鑒定的毒株，RT-PCR檢測(cè)之后為PEDV陽(yáng)性，將霉素研磨、青霉素加入其中，調(diào)整濃度至1000IU/ml，再加入濃度為30%的甘油生理鹽水，保存在溫度-20℃環(huán)境下。

3.2 試驗(yàn)開(kāi)展

首先，做好試驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作。試驗(yàn)開(kāi)始之前，相關(guān)人員應(yīng)當(dāng)對(duì)母豬進(jìn)行稱重、耳朵標(biāo)號(hào)，對(duì)豬的攝食量進(jìn)行觀察，同時(shí)還要注意豬的精神狀況以及分別情況，并記錄下來(lái)。對(duì)豬行RTPCR方法檢測(cè)，檢測(cè)內(nèi)容有豬瘟、豬流行性腹瀉、豬傳染性胃腸炎等，檢測(cè)為陰性。

其次，做好疫苗接種工作。嚴(yán)格按照相關(guān)說(shuō)明對(duì)所選取的24頭患豬后海穴注射疫苗。A組在產(chǎn)前70d左右的時(shí)間折射TB腹瀉特質(zhì)二聯(lián)滅活苗，在產(chǎn)前40d左右再次注射；B組在產(chǎn)前60d左右接種PEDV基因缺失疫苗，產(chǎn)前40d左右進(jìn)行1次加強(qiáng)；C組產(chǎn)前70d注射TB腹瀉特質(zhì)二聯(lián)滅活苗，產(chǎn)前40d加強(qiáng)1次，并于產(chǎn)前60d上下接種PEDV基因缺失疫苗，產(chǎn)前40d再次加強(qiáng)；D組產(chǎn)前40d實(shí)行反飼試驗(yàn)，直接飼喂經(jīng)抗生素處理得當(dāng)PEDV陽(yáng)性豬仔倡導(dǎo)及內(nèi)容物5ml/d，飼喂3d。

最后，做好攻毒工作。劑量控制在5ml/頭，口服。實(shí)施攻毒處理之后，工作人員需要做好相關(guān)記錄，主要包括豬的采食量、精神狀態(tài)、排便情況以及發(fā)病和死亡情況等。

3.3 結(jié)果分析

攻毒之后，豬的基本情況下表1所示。從表1不難看出，母豬的腹瀉率都比較高，三組的腹瀉率高達(dá)100%。7日齡內(nèi)豬仔死亡率比較高，最高達(dá)到73.8%，總死亡率最高達(dá)到了93.6%?；蛉笔б呙绲男Ч麅?yōu)于TB二聯(lián)苗免疫效果，二者聯(lián)合使用的效果又要好于單獨(dú)使用，7日齡以后的死亡率只有3.3%。另外，采用反飼料方案效果好于單用疫苗方案，總死亡率為36.5%。

表1 攻毒后豬的基本情況分析

4 結(jié)語(yǔ)

通過(guò)上訴研究分析，結(jié)合相關(guān)的試驗(yàn)結(jié)果分析，得到：產(chǎn)前70d注射TB腹瀉特質(zhì)二聯(lián)滅活苗，產(chǎn)前40d加強(qiáng)1次，并于產(chǎn)前60d上下接種PEDV基因缺失疫苗，產(chǎn)前40d再次加強(qiáng)，能夠?qū)ωi群實(shí)現(xiàn)免疫保護(hù)。另外，由于豬流行性腹瀉是豬流行性腹瀉病毒一起的，盡管當(dāng)前在這方面并沒(méi)有徹底治愈的藥物，但是可以通過(guò)使用一些藥物來(lái)減輕腹瀉癥狀，比如口服楊花口服液等?？傊瑢?duì)于豬流行性腹瀉一定要做好綜合性的防治工作，保證豬仔的健康成長(zhǎng)，減少因豬流行性腹瀉帶來(lái)的損失。

[1] 代洪波，岳豐雄，徐宏軍，等.豬流行性腹瀉病毒分離鑒定及其滅活疫苗免疫保護(hù)效果研究[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2017，38（1）：50-55.

[2] 徐宏軍，楊鵬程，任麗，等.豬流行性腹瀉病毒滅活疫苗的制備及攻毒保護(hù)研究[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2015，25（1）：35-39.