黃淑芳 王才益 陳玎玎 龔利洋 應(yīng)志豪

(杭州動(dòng)物園，杭州，310008)

181頭(只)病死圈養(yǎng)野生動(dòng)物幾種臟器帶菌情況的調(diào)查

黃淑芳 王才益 陳玎玎 龔利洋 應(yīng)志豪

(杭州動(dòng)物園，杭州，310008)

通過對2013～2015年的181頭(只)發(fā)病和死亡動(dòng)物進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，在118個(gè)陽性樣本中純培養(yǎng)出28種病原菌(138株)，陽性率為65.19%，同時(shí)存在一種動(dòng)物體內(nèi)分離多種細(xì)菌的現(xiàn)象。其中禽類陽性率為54.79%(40/73)，分離出13種病原菌；爬行類動(dòng)物陽性率為80.64%(25/31)，分離出18種病原菌；哺乳類動(dòng)物陽性率為68.83%(53/77)，分離出20種病原菌。在分離出的病原菌中，除常見的腸桿科菌、革蘭氏陽性球菌外還出現(xiàn)了巴斯德菌、假結(jié)核耶爾森氏菌、豬霍亂沙門氏菌亞利桑那亞種、支氣管炎博德特菌、枯草芽孢桿菌、解鳥氨酸烏拉爾菌等不常見的病原菌，其中假結(jié)核耶爾森氏菌在禽類的巨嘴鳥組織中分離較多，豬霍亂沙門氏菌亞利桑那亞種在爬行類紅尾蚺的內(nèi)臟組織中分離較多。

野生動(dòng)物；病原菌；圈養(yǎng)；分離；鑒定

細(xì)菌是微生物中的一個(gè)大家庭成員，廣泛存在于自然界環(huán)境及正常動(dòng)植物體內(nèi)，形成一個(gè)平衡的生態(tài)體系。一旦這一環(huán)境出現(xiàn)異常或機(jī)體免疫防御功能下降，可能會(huì)出現(xiàn)一種或幾種細(xì)菌異常繁殖，釋放毒性物質(zhì)，引起動(dòng)植物感染而致病。圈養(yǎng)野生動(dòng)物某一個(gè)或幾個(gè)細(xì)菌引起的病例時(shí)有報(bào)道[1-5]，但系統(tǒng)分析動(dòng)物病原菌的情況較少，而實(shí)踐中需要明確環(huán)境衛(wèi)生因素與動(dòng)物疾病的相關(guān)關(guān)系[6]，希望能給獸醫(yī)工作提供一點(diǎn)參考。

1 材料

1.1 樣本對象

2013年1月至2015年12月杭州動(dòng)物園內(nèi)圈養(yǎng)的患病野生動(dòng)物，樣本取其病變部位，如咽拭子、肛拭子、皮膚潰瘍分泌物、鼻腔分泌物等；死亡動(dòng)物在死亡后2～5 h內(nèi)，按要求取其心、肝、肺、脾、腎的病變組織及腸道出血處的內(nèi)容物。

1.2 試劑和設(shè)備

MH培養(yǎng)瓊脂、中國蘭瓊脂、SS瓊脂、雙糖鐵瓊脂、藥敏紙片采購于杭州濱和微生物試劑有限公司，API20E鑒定試劑條及配套的鑒定試劑、API20NE鑒定試劑條及配套的鑒定試劑、滅菌液狀石蠟、ABI細(xì)菌鑒定軟件庫采購于杭州怡丹生物技術(shù)有限公司，37℃培養(yǎng)箱、高壓滅菌鍋、直徑7和9的平皿、酒精燈、接種環(huán)、鑷子等采購于化東醫(yī)藥股份有限公司器材化劑分公司。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 取樣

在無菌條件下按要求接種大便、腸內(nèi)容物、肺病料、心病料、脾病料、肝病料等接種于中國蘭、SS、M-H或血培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)24 h，觀察菌落數(shù)量及形態(tài)。

2.2 分離

腸道樣本中細(xì)菌若只有中國蘭平皿生長不做進(jìn)一步分析，若SS平皿中也生長并且數(shù)量較多則做進(jìn)一步分析；組織器官中細(xì)菌在血平皿或者M(jìn)-H平皿中生長超過10個(gè)并且菌落比較單一，對可疑菌落進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢，并且接種雙糖管，進(jìn)行37℃純培養(yǎng)18～24 h。

2.3 鑒定

革蘭氏陰性菌純培養(yǎng)的細(xì)菌通過其對雙糖管的反應(yīng)，制備成0.5麥?zhǔn)蠁挝坏臐岫?，接種于API20E或者API20NE反應(yīng)糟中，37℃溫育24 h進(jìn)行結(jié)果分析，通過陰陽性比對得出7個(gè)數(shù)字的編碼，然后把編碼輸入ABI細(xì)菌庫中，軟件根據(jù)編碼分析出該細(xì)菌的菌種名稱，出現(xiàn)幾種細(xì)菌都可疑時(shí)就要根據(jù)提示進(jìn)行補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)。革蘭氏陽性球菌就根據(jù)革蘭氏染色觀察細(xì)菌形態(tài)，做氧化酶和觸酶試驗(yàn)來判定。革蘭氏陽性桿菌送到杭州市第一人民醫(yī)院微生物室通過MALDI-TOF-MS基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜的方法進(jìn)行鑒定。

3 結(jié)果

73只禽類患病動(dòng)物中有40只分離出13種病原菌(表1)。31只(條)爬行類患病動(dòng)物中，25只(條)分離出18病原菌(表2)。77只(頭)哺乳類患病動(dòng)物中，53只(頭)分離出20種病原菌(表3)。

共分離出138株病原菌，其中腸桿科菌18種104株，占總菌株的75.36%；弧菌科2種10株，占總菌株的7.25%，非發(fā)酵菌1種4株，占總菌株的2.90%；其他革蘭氏陰性菌4種6株，占總菌株4.35%；革蘭氏陽性菌3種14株，占總菌株的10.14%(表4)。

從分離出細(xì)菌的部位來看，心、肝、肺、脾和腎共有84次，其中肺組織48次；腸道組織56次，其他組織15次(表5)。

表1 禽類動(dòng)物病原菌情況

Tab.1 The pathogens of avians

續(xù)表1

表2 爬行類動(dòng)物病原菌情況

Tab.2 The pathogens of amphibians and reptiles

表3 哺乳類動(dòng)物病原菌情況

Tab.3 The pathogens of mammals

續(xù)表3

表4 病原菌情況分析

Tab.4 Analysis of the pathogens

續(xù)表4

表5 不同種類動(dòng)物組織分離出的病原菌次數(shù)

Tab.5 The number of pathogenic bacteria isolated from the different kinds of animal tissue

續(xù)表5

續(xù)表5

4 討論與分析

4.1 物種帶菌率

從病原菌分離的陽性率來分析，禽類動(dòng)物陽性率最低54.79%，爬行類動(dòng)物陽性率最高80.64%，哺乳類動(dòng)物陽性率68.83%，說明爬行類和哺乳類動(dòng)物平時(shí)帶菌情況比禽類動(dòng)物高，在機(jī)體抵抗力下降時(shí)病原菌就可能導(dǎo)致出現(xiàn)感染。爬行類動(dòng)物混合感染現(xiàn)象較多，感染后臨床癥狀往往表現(xiàn)不突出，對其環(huán)境衛(wèi)生的要求就要更高。

4.2 獸醫(yī)工作思考

分離的138株病原菌中，除沙門氏菌外其他大部分是條件致病菌，其中腸桿科菌所占比達(dá)到近80%，分離的病原菌中沙雷氏菌、大腸埃希氏菌、假結(jié)核耶爾森氏菌、鏈球菌、葡萄球菌等與伍清林、張鄧華等[7-9]在動(dòng)物籠舍環(huán)境中分離的病原菌相同，提示平時(shí)在獸醫(yī)的預(yù)防工作中要重視革蘭氏陰性菌的消毒及防治，認(rèn)識籠舍衛(wèi)生及消毒的重要性。

巴斯德菌、假結(jié)核耶爾森氏菌、豬霍亂沙門氏菌、支氣管炎博德特菌、鳥氨酸烏拉爾菌這幾種病原菌雖然不常見，但也有過報(bào)道[10-12]，豬霍亂沙門氏菌亞利桑那亞種在紅尾蚺的心肝肺中出現(xiàn)7次，假結(jié)核耶爾森氏菌在巨嘴鳥的肝中出現(xiàn)4次，脾中出現(xiàn)1次，這2種菌集中出現(xiàn)某一區(qū)域某一種類動(dòng)物體內(nèi)，提示必要的預(yù)防措施。

4.3 由于條件所致所有病原菌株均未進(jìn)行動(dòng)物復(fù)制實(shí)驗(yàn)，對于致病性還有待于進(jìn)一步研究。

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Investigation of Pathogenic Bacteria Isolated from Organs of 181 Captive Wildlife Individuals

Huang Shufang Wang Caiyi Chen Dingding Gong Liyang Ying Zhihao

(Hangzhou Zoo，Hangzhou，310008，China)

We cultured samples from 181 animal individuals during 2013 to 2015，and isolated 138 strains of pathogenic bacteria of 28 species from 118 samples，the positive rate of culture was 65%.We separated more than one strain of bacteria in one individual.Thirteen species of pathogenic bacteria were isolated from 40 of 73 birds，for a positive rate of 55%.Among 31 amphibians and reptiles，we isolated 18 pathogens from 25 animals for a positive rate of 81%.As for the 77 mammals，20 pathogenic bacteria were isolated from 53 samples for a positive rate of 69%.Pathogens were mostly intestinal bacteria and gram positive coccus.Also included were uncommon bacteria likePasteur，Yersiniapseudotuberculosis，Salmonellacholeraesuissubsp.diarizonae，Bordetellabronchiseptica，BacillussubtilisandRaoultellaornithinolytica.Y.pseudotuberculosiswas mostly isolated from toucan tissues，andSalmonellacholeraesuissubsp.diarizonaewas mostly isolated from Red Tail Boa.

Wildlife；Pathogen；Captive；Separation；Identification

稿件運(yùn)行過程

2016-09-23

修回日期：2017-02-14

發(fā)表日期：2017-08-10

S858.9

A

2310-1490(2017)03-360-07

黃淑芳，女，39歲，高級獸醫(yī)師；主要從事野生動(dòng)物臨床檢驗(yàn)和動(dòng)物疾病預(yù)防工作。E-mail：376000527@qq.com