涂 星，張 燕，文德鑒，胡澤華，郜紅利，向 陽(yáng)，袁德培，王利勝

(1. 湖北民族學(xué)院醫(yī)學(xué)院，湖北 恩施 445000； 2. 湖北民族學(xué)院土家醫(yī)藥研究所，湖北 恩施 445000； 3. 廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣州 510405)

【針灸研究】

土家族麝針療法“活血生新”治療缺血性腦中風(fēng)的作用機(jī)制研究?

涂 星1,2，張 燕1，文德鑒1,2，胡澤華1,2，郜紅利1,2，向 陽(yáng)1，袁德培1,2，王利勝3

(1. 湖北民族學(xué)院醫(yī)學(xué)院，湖北 恩施 445000； 2. 湖北民族學(xué)院土家醫(yī)藥研究所，湖北 恩施 445000； 3. 廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣州 510405)

目的：探討土家族麝針療法治療缺血性腦中風(fēng)的作用機(jī)制，揭示其活血化瘀誘導(dǎo)血管新生的藥理作用。方法：采用改良線栓法建立缺血性腦中風(fēng)大鼠模型，以Zea-longa為1～3分的大鼠為研究對(duì)象，以土家族麝針療法干預(yù)3個(gè)療程后，TTC染色法觀察其對(duì)大腦梗死灶體積的影響，激光散斑成像技術(shù)觀察其對(duì)腦皮質(zhì)區(qū)整體血流速度的影響，western-blot法測(cè)定血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)及其受體1(VEGFR1)的表達(dá)水平。結(jié)果：與正常組比較，缺血性腦中風(fēng)大鼠腦梗死體積顯著增加，腦皮質(zhì)區(qū)血流速度明顯減緩，腦組織中VEGF蛋白和VEGFR1蛋白表達(dá)水平均顯著增加；經(jīng)給予土家族麝針療法治療后，腦梗死體積顯著降低，腦皮質(zhì)區(qū)的血流速度顯著加快，腦組織中VEGF蛋白和VEGFR1蛋白表達(dá)水平顯著增加，且其影響隨著療程的延長(zhǎng)更為顯著。結(jié)論：土家族麝針療法能顯著改善缺血性腦中風(fēng)所致的腦梗死體積，其“活血生新”的作用機(jī)制可能與改善腦皮質(zhì)區(qū)的血流速度、增加血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子及其受體表達(dá)水平有關(guān)。

土家族麝針療法；缺血性腦中風(fēng)；活血生新；激光散斑成像技術(shù)；血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子及受體-1

腦中風(fēng)是世界第三大致死病因，其中80%為缺血性腦中風(fēng)，且其發(fā)病率呈急劇上升趨勢(shì)，并具有較高的致殘率和致死率，目前我國(guó)缺血性腦中風(fēng)致殘率高達(dá)72%以上[1-2]。缺血性腦卒中是由于各種原因引起的局部腦組織供血不足或供血障礙，導(dǎo)致腦組織發(fā)生缺血缺氧性壞死。其主要發(fā)病機(jī)制是由于腦組織發(fā)生動(dòng)脈粥樣硬化，導(dǎo)致患者血管腔出現(xiàn)狹窄、痙攣，進(jìn)而血液的凝聚性增高、黏度增加或者血流動(dòng)力學(xué)改變等原因，使患者腦內(nèi)局部動(dòng)脈供血不足，發(fā)生腦組織急性缺血、缺氧、壞死等嚴(yán)重?fù)p傷，從而在患者全身表現(xiàn)出一系列的臨床癥狀[3-4]。

研究顯示[5-6]，嚙齒類動(dòng)物在腦缺血發(fā)作的數(shù)分鐘內(nèi)與血管生成有關(guān)的基因就被上調(diào)，而與血管生成有關(guān)的蛋白則在數(shù)天至數(shù)周內(nèi)都能保持高水平；而尸體解剖時(shí)發(fā)現(xiàn)，腦組織缺血邊緣區(qū)存在血管生成增加的現(xiàn)象，而老齡患者該現(xiàn)象明顯減少。動(dòng)物模型和人類腦卒中患者的研究提示，中風(fēng)后血管生成可能與改善功能結(jié)局有關(guān)，可能是由于機(jī)體對(duì)缺血損傷產(chǎn)生響應(yīng)而出現(xiàn)“促血管生成狀態(tài)”[7]。

前期研究發(fā)現(xiàn)[8]，土家族麝針療法對(duì)缺血性腦中風(fēng)大鼠的血液流變學(xué)具有較好的改善作用，那么該療法是否能通過(guò)改善血液流變學(xué)，調(diào)節(jié)與血管生成相關(guān)的細(xì)胞因子或蛋白的釋放與表達(dá)，促進(jìn)微血管新生而達(dá)到治療缺血性損傷的作用呢？本研究擬采用激光散斑成像技術(shù)、Western-blot等技術(shù)方法對(duì)該假設(shè)進(jìn)行驗(yàn)證，以期揭示土家族麝針療法治療缺血性腦中風(fēng)的作用機(jī)制。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

清潔級(jí)、健康SD大鼠240只，雌雄不限，5～7周齡，體質(zhì)量(200±20) g，購(gòu)于安陸瑞森實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司(許可證號(hào)SCXK(鄂)2014-0016)。飼養(yǎng)環(huán)境溫度(20±2) ℃，濕度55%～75%，12 h/12 h光暗體系。

1.2 藥物與試劑

土家族麝針(實(shí)驗(yàn)室自制)；人工麝香(純麝香粉，批號(hào)20141025，安徽亳州國(guó)藥中藥草堂)；水合氯醛(CP，批號(hào)150307，廣州化學(xué)試劑廠)；TTC染色液(寶生物工程大連有限公司)； 0.01MPBS緩沖液、SP免疫組化染色試劑盒(北京中山金橋生物技術(shù)有限公司)；兔抗大鼠 VEGF 及 VEGFR1多克隆抗體(美國(guó)Pepro Tech)，羊抗兔二抗、蛋白marker(上海歌帆生物科技有限公司)；考馬斯亮藍(lán)G250(上海源葉生物)；其他試劑均為分析純。

1.3 主要儀器

激光散斑成像系統(tǒng)；十萬(wàn)分之一島津電子分析天平(日本島津)；5810R高速冷凍離心機(jī)(德國(guó)eppendorf)；OLYMPUS直立光照照相系統(tǒng)(日本OLYMPUS)、微量移液器(德國(guó)eppendorf)；電泳裝置、轉(zhuǎn)移裝置、恒流恒溫電泳儀、脫色搖床(美國(guó)BIO-RAD)；SHA-B恒溫水浴鍋(金壇精達(dá)儀器制造廠)等。

2 方法

2.1 造模與分組

大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，采用隨機(jī)數(shù)字表法分成正常組60只和模型組180只，模型組大鼠10%水合氯醛固定于大鼠腦立體定位儀上，以高速電動(dòng)顱鉆在保持硬腦膜完好的前提下打磨顱骨形成一個(gè)10×15 mm的顱骨窗(定位為前至前囟，左至矢狀縫，右至右側(cè)顳線，后至冠狀縫)。參考前期研究[8]，采用改良線栓法建立缺血性腦中風(fēng)大鼠模型，以Zea-longa評(píng)分為1～3分的大鼠(145只，造模成功率80.56%)隨機(jī)分為模型組65只和土家族麝針治療組80只。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程及顱骨打磨過(guò)程死亡，土家族麝針治療組剩余大鼠58只，模型組60只納入研究。

2.2 土家族麝針的制備和治療

分別稱取人工麝香10 g溶于100 ml 95%乙醇溶液中，待完全溶解呈淡黃棕色溶液后，將5號(hào)一次性注射針頭浸泡入內(nèi)1周后取出，以顯微鏡下觀察針頭部附著黃色結(jié)晶物為成功的麝針。土家族麝針組大鼠以俯臥位固定，選取其對(duì)側(cè)頭皮的運(yùn)動(dòng)區(qū)、感覺區(qū)和足運(yùn)感區(qū)。采用自制麝針進(jìn)針，針應(yīng)刺在肌層，以200次/min以上的速度快速捻針，至針刺區(qū)微感發(fā)熱。捻轉(zhuǎn)5 min后，留針5 min，反復(fù)捻針留針3次后起針，每日進(jìn)行2次，5 d為1個(gè)療程，每療程間休息2 d，治療3個(gè)療程。正常組和模型組同法按照土家族麝針組固定30 min，不做其他處理。

2.3 腦組織梗死灶體積檢測(cè)

分別于治療前、1療程、2療程和3療程結(jié)束時(shí)隨機(jī)取各組大鼠2只，脫頸椎處死后立即剝離完整腦組織，0 ℃生理鹽水中漂洗干凈，置于-20 ℃冰箱中冷凍保存30 min后，切取5片2 mm厚度的冠狀切片，進(jìn)行TTC染色后37 ℃正反面各孵育15 min，使正常腦組織染色深紅色，缺血腦組織呈蒼白色，4%多聚甲醛固定后，徠卡相機(jī)拍照后以Image impro Plus 6.0軟件對(duì)圖像進(jìn)行分析并計(jì)算梗死體積。梗死體積百分比=(正反面梗死體積之和/2×片厚)/(正反面總面積之和/2×片厚)×100%。

2.4 大腦皮質(zhì)區(qū)整體血流速度檢測(cè)

分別于治療前、1療程、2療程和3療程結(jié)束時(shí)隨機(jī)取各組大鼠6只，在激光散斑成像系統(tǒng)下觀察大腦皮質(zhì)區(qū)整體血流，每隔20 ms獲得1幀原始圖像，連續(xù)成像150幀，獲取10張腦血流分布圖進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。采用Image impro Plus 6.0軟件對(duì)圖像進(jìn)行分析，以各像素平均光密度值代表該點(diǎn)腦血流量相對(duì)值，定義正常大鼠對(duì)應(yīng)的腦血流(基礎(chǔ)血流)對(duì)應(yīng)的平均光密度為100%，以各時(shí)間點(diǎn)平均光密度值與正常大鼠光密度值的百分比代表血流量相對(duì)基礎(chǔ)血流的變化。

2.5 血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子及其受體表達(dá)量檢測(cè)

分別于治療前、1療程、2療程和3療程結(jié)束時(shí)隨機(jī)取各組大鼠6只，脫頸椎處死后立即剝離完整腦組織，用吸水濾紙吸干表面水分，稱取腦組織總重量，參考文獻(xiàn)[9]測(cè)定目的蛋白條帶和內(nèi)參蛋白條帶的灰度值，以目的蛋白/內(nèi)參蛋白的比值作為該樣本蛋白表達(dá)水平進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 對(duì)腦梗死體積和大腦皮質(zhì)區(qū)血流速度的影響

表1圖1顯示，治療前與正常組比較，模型組和土家族麝針療法組相對(duì)腦梗死體積顯著增加(P<0.05)，血流速度明顯減緩(P<0.05)，且土家族麝針療法組和模型組之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，提示本研究所建立的模型是成功的，且治療組和對(duì)照組基線平衡。土家族麝針療法組在1療程時(shí)腦梗死體積與治療前比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，在2療程和3療程時(shí)較模型組和1療程時(shí)顯著降低(P<0.05，P<0.05)，且3療程時(shí)比2療程顯著降低(P<0.05)，提示土家族麝針療法改善腦梗死體積與治療療程有關(guān)，療程越長(zhǎng)改善的效果越顯著；而土家族麝針療法組在1療程、2療程和3療程時(shí)大腦皮質(zhì)區(qū)整體血流速度較治療前與模型組均明顯提高(P<0.05，P<0.05)，且3個(gè)療程整體血流速度比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，P<0.05)，存在顯著療程依賴性。

表1 土家族麝針療法對(duì)各組大鼠不同療程腦梗死體積和皮質(zhì)區(qū)血流速度的影響(n=10或

注：與正常組比較:▲P<0.05；與模型組比較:★P<0.05；與治療前比較:aP<0.05；與1療程比較：bP<0.05；與2療程比較:cP<0.05

圖1 各組大鼠不同療程大腦皮質(zhì)區(qū)整體血流激光散斑成像圖

3.3 對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子及其受體1表達(dá)量的影響

表2圖2、3顯示，治療前與正常組比較，模型組和土家族麝針組大鼠腦組織中血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體-1(vascular endothelial cell growth factor recptor-1，VEGFR1)蛋白表達(dá)水平顯著升高(P<0.05)，且土家族麝針療法組和模型組之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；土家族麝針療法組在1療程、2療程和3療程時(shí)VEGF表達(dá)量較治療前和模型組均顯著增加(P<0.05，P<0.05)，且其表達(dá)量隨療程的延長(zhǎng)顯著增加(P<0.05，P<0.05，P<0.05)；在2個(gè)療程和3個(gè)療程時(shí)VEGFR1表達(dá)量較治療前、1個(gè)療程和模型組均顯著增加(P<0.05，P<0.05，P<0.05)，且其表達(dá)量隨著療程的的延長(zhǎng)顯著增加(P<0.05，P<0.05)。

4 討論

麝針療法是土家族民間流傳甚久的一種常用治療方法，對(duì)膿皰、癤腫、疔瘡、關(guān)節(jié)扭傷所致腫脹瘀血疼痛、急癥暴癥、傷寒頭痛等均有較好的療效。麝針是用香獐子的門牙制成，抓捕時(shí)扣掉牙(長(zhǎng)約5～8 cm，呈半圓形，根部稍大，前端尖銳，齒內(nèi)有骨髓填滿)，挑出骨髓，從根部放入0.2～0.6 g麝香，然后將根部扎緊、封閉將前端磨銳即得[10]。該方法體現(xiàn)了傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中“針?biāo)幗Y(jié)合”的治療特色。

機(jī)體腦血流始終保持著相對(duì)恒定的循環(huán)，以維持機(jī)體的正常生理功能。研究表明[11-12]，缺血性腦中風(fēng)患者全血黏度、紅細(xì)胞壓積和血小板最大聚集率顯著增加，而凝血酶時(shí)間和凝血酶原時(shí)間顯著下降。前期研究[9]證實(shí)，土家族麝針療法可顯著改善缺血性中風(fēng)大鼠的全血黏度，抑制血小板最大聚集率，增加凝血酶原時(shí)間，有效防止缺血腦組織的進(jìn)一步損害，但未能直觀地反映血液流速的變化。目前動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)腦血流的方法主要有Xe吸收法、單射斷層掃描法、正電子發(fā)射斷層掃描法和經(jīng)顱多普勒超聲等[13-16]。本研究采用激光散斑成像技術(shù)，通過(guò)分析時(shí)間積分上班的空間統(tǒng)計(jì)特性來(lái)提取血流速度信息，研究發(fā)現(xiàn)土家族麝針療法能顯著改善腦皮質(zhì)血流速度，促進(jìn)血液運(yùn)行，提示該療法具有一定的“活血”作用。

表2 土家族麝針療法對(duì)各組大鼠不同療程血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子及其受體1表達(dá)量的影響

注：與正常組比較:▲P<0.05；與模型組比較:★P<0.05；與治療前比較:aP<0.05；與1療程比較，bP<0.05；與2療程比較:cP<0.05

圖2 各組大鼠不同療程腦組織中VEGF(上)、VEGFR1(下)表達(dá)水平注：1.治療前；2.1療程；3.2療程；4.3療程

血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)作為血管新生過(guò)程中的重要因子，是一種內(nèi)皮細(xì)胞特異性最強(qiáng)、促血管構(gòu)建作用最強(qiáng)的調(diào)節(jié)生長(zhǎng)因子，可通過(guò)與其受體VEGFR1和VEGFR2等結(jié)合發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)，促進(jìn)胃血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移和血管新生，并可增加小靜脈血管與微血管的通透性，促進(jìn)血管再通[17-20]。研究表明，VEGF對(duì)缺血性腦中風(fēng)有顯著的血管新生和神經(jīng)保護(hù)作用[21-23]，而其受體VEGFR1可促進(jìn)血管內(nèi)皮分化，VEGFR2可促進(jìn)新生血管塑形成熟[24-25]。研究發(fā)現(xiàn)，大鼠腦缺血中風(fēng)后，腦組織中VEGF和VEGFR1的蛋白表達(dá)量均顯著增加，提示腦缺血后機(jī)體通過(guò)調(diào)節(jié)VEGF和VEGFR1的表達(dá)發(fā)揮自我保護(hù)作用；給予土家族麝針治療后，其蛋白表達(dá)量均顯著提高，提示該療法可通過(guò)上調(diào)其表達(dá)水平達(dá)到“生新”的治療作用。

結(jié)合土家族麝針療法對(duì)缺血性腦中風(fēng)大鼠的腦梗死體積的改善作用，初步得出該療法可能是通過(guò)加快腦皮質(zhì)血流速度，調(diào)節(jié)VEGF及其受體表達(dá)促進(jìn)血管生成達(dá)到改善腦梗死的效果。由于實(shí)驗(yàn)條件和經(jīng)費(fèi)的限制，未能對(duì)VEGF的其他受體如VEGFR2、VEGFR3、激酶插入?yún)^(qū)Kappa Opioid受體(KOR)等進(jìn)行檢測(cè)；此外，土家族麝針療法治療缺血性腦中風(fēng)發(fā)揮作用的到底是針刺的作用還是麝香的作用，尚有待進(jìn)一步研究。

[1] 王文志.中國(guó)腦卒中流行病學(xué)特征和社區(qū)人群干預(yù)[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)前沿雜志,2009,1(2):49- 53.

[2 ] FEIGIN VL. Stroke epidemiology in the developing world[J]. Lancet, 2005, 365 (9478):2160- 2161.

[3] 吳建峰. 中西醫(yī)結(jié)合治療缺血性腦中風(fēng)的療效及對(duì)血液流變學(xué)指標(biāo)的影響[J]. 現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2014,23(34):3833-3834.

[4] BANERJEE A, ZHANG X, MANDA KR, et al. HIV proteins(gp120 and tat) and methamphetamine in oxidative stress-induced damage in the brain: potential role of the thiol antioxidant N-acetylcysteine amide[J]. Free Radic Biol Med, 2010,48(10): 1388-1398.

[5] SZPAK GM, LECHOWICZ W, LEWANDOWSKA E, et al. Border zone neovascularization in cerebral ischemic infarct[J]. Folia Neuropathol, 1999, 37(4):264- 268.

[6] HAYASHI T, NOSHITA N, SUGAWARA T, et al. Temporal profile of angiogenesis and expression of related genes in the brain after ischemia[J]. J Cereb Blood Flow Metab， 2003, 23(2):166-180.

[7] KRUPINSKI J, ISSA R, BUJNY T, et al. A putative role for platelet-derived growth factor in angiogenesis and neuroprotection after ischemic stroke in humans[J]. Stroke, 1997, 28(3):564-573.

[8] 涂星,張燕,向陽(yáng),等.土家族麝針療法對(duì)缺血性腦中風(fēng)大鼠的腦保護(hù)作用機(jī)制研究[J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥,2016,25(10):2- 7.

[9] 邵妍,王鵬琴,王樹東,等. 眼針運(yùn)動(dòng)療法對(duì)腦缺血再灌注大鼠腦缺血半暗帶區(qū)VEGF蛋白及VEGF mRNA表達(dá)的影響[J].中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志,2015, 21(4):445- 448.

[10] 侯智利.土家族麝針療法[N].醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào),2007-01-08(6).

[11] 王愛云,陸茵,嚴(yán)令耕,等.通塞脈微丸改善缺血性中風(fēng)大鼠血液流變狀態(tài)的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)血液流變學(xué)雜志,2007,17 (1):52- 54．[12] 薛黎,曹玲,曹文艷.血液流變學(xué)檢測(cè)指標(biāo)對(duì)缺血性與出血性腦中風(fēng)鑒別診斷的臨床評(píng)價(jià)[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2009,32 (11):1554-1556．

[13] 楊弋,吳江,王靜,等. 頸內(nèi)動(dòng)脈系統(tǒng) TIA 患者 Xe-CT 腦血流檢測(cè)的臨床意義[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2009,13(1):60- 62.

[14] 李文雅. SPECT腦血流灌注顯像局部腦血流測(cè)定在短暫性腦缺血中的應(yīng)用[J].中國(guó)醫(yī)藥指南,2016,14(5):87.

[15] 王前友,王文靜,劉亮,等. 輕度認(rèn)知障礙患者的 SPECT 與 TCD 腦血流改變[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2013,48(1):69- 73.

[16] 汪恩煥,郭之通,王廷友,等.133Xe 吸入法對(duì)輕度顱腦損傷患者rCBF定量研究[J].實(shí)用全科醫(yī)學(xué),2004,2(4):304- 305.

[17] DVORAK HF. Vascular permeability factor/vascular endothelial growth factor: a critical cytokine in tumor angiogenesis and a potential target for diagnosis and therapy[J]. J Clin Oncol, 2002, 20(21): 4368- 4380.

[18] ZHANG P, LEI X, SUN Y, et al. Regenerative repair of Pifithrin-α in cerebral ischemia via VEGF dependent manner[J]. Sci Rep, 2016.

[19] 段澤星,謝立群.VEGF在腫瘤生長(zhǎng)和血管生成中的作用[J].世界華人消化雜志,2010,18(27):2894-2900.

[20] PRADEEP CR, SUNILA ES, KUTTAN G. Expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) and VEGF receptors in tumor angiogenesis and malignancies[J]. Integr Cancer Ther, 2005,4(4): 315-321

[21] 楊佳佳.外源性VEGF對(duì)腦缺血模型大鼠認(rèn)知能力的保護(hù)作用及機(jī)制探究[D].天津：南開大學(xué),2014.

[22] 湯浩. 強(qiáng)化表達(dá)VEGF的老年人骨髓基質(zhì)細(xì)胞治療腦缺血的實(shí)驗(yàn)研究[D].廣州：南方醫(yī)科大學(xué),2013.

[23] 陳懿,王國(guó)佐,葛金文,等. 川芎嗪對(duì)局灶性腦缺血大鼠血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)的影響[J]. 中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合急救雜志,2008,15(6):329- 331.

[24] TAKAHASHI T, TAKASE Y, YOSHINO T, et al. Angiogenesis in the developing spinal cord: blood vessel exclusion from neural progenitor region is mediated by VEGF and its antagonists[J]. PLoS One, 2015, 10(1):e0116119

[25] IMOUKHUEDE PI, DOKUN AO, ANNEX BH, et al. Endothelial cell-by-cell profiling reveals the temporal dynamics of VEGFR1 and VEGFR2 membrane localization after murine hindlimb ischemia[J]. Am J Physiol Heart Circ Physiol, 2013, 304(8): H1085- 1093.

StudyonMechanismofActivatingBloodandCreatingNewBloodVesselbyMuskNeedleTherapyinTujiaMedicineonIschemicStrokeRatModel

TU Xing1, ZHANG Yan1, WEN De-jian1,2, HU Ze-hua1,2, GAO Hong-li1,2, XIANG Yang1, YUAN De-pei1,2, WANG Li-sheng3

(1.HubeiUniversityforNationalities,Hubei,Enshi445000,China;TujiaMedicineResearchInstitute,HubeiUniversityforNationalities,Hubei,Enshi445000,China;3.GuangzhouUniversityofChineseMedicine,Guangzhou510405,China)

Objective: To explore the mechanism of activating blood and creating new blood vessel by musk needle therapy inTujiamedicine on ischemic stroke rat model. Methods: Ischemic stroke rat model was established by reforming Longa method. The ischemic stroke rats with the Zea-longa score 1 to 3 were divided into model group and treatment group, the latter was treated by musk needle therapy for 3 courses of treatment while the former without any further processing, the normal rats were used as the control group. Tetrazolium method was used to observe the volume of cerebral infarction, laser speckle imaging was used to observe the blood flow rate of the whole cerebral cortex and western-blot was used to detect the expression level of vascular endothelial growth factor (short for VEGF) and VEGF receptor 1. Result: Comparing with the control group, the volume of cerebral infarction, the expression level of VEGF and VEGF receptor 1 increased significantly while the blood flow rate of the whole cerebral cortex decreased significantly both in model group and treatment group. After given musk needle therapy, the volume of cerebral infarction decreased significantly while the blood flow rate of the whole cerebral cortex, the expression level of VEGF and VEGF receptor 1 increased significantly, and these results have a positive relationship with the courses of treatment. Conclusions: Musk needle therapy inTujiamedicine could significantly improve the volume of cerebral infarction caused by ischemic stroke, its mechanism of activating blood and creating new blood vessel may have something to do with its functions on increasing the blood flow rate of the whole cerebral cortex, the expression level of VEGF and VEGF receptor 1.

Musk needle therapy inTujiamedicine; Ischemic stroke; Activating blood and creating new blood vessel; Laser speckle imaging; Vascular endothelial growth factor; VEGF receptor 1

R246.8

B

1006-3250(2017)10-1445-04

湖北省教育廳科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目(中青年人才項(xiàng)目)(Q20161904)-土家族麝針療法治療缺血性腦中風(fēng)大鼠的作用機(jī)制研究

涂 星(1987-)，男，湖北黃岡人，講師，醫(yī)學(xué)博士，碩士研究生導(dǎo)師，從事民族醫(yī)藥的開發(fā)利用與保護(hù)研究。

2017-03-15