閆秀萍++侯青順+王慧++郭璐

[摘要] 目的 探討乙型肝炎肝硬化患者血清自身抗體的存在情況及其臨床意義。方法 選取2016年3月～2017年6月青島市第六人民醫(yī)院門診及住院的乙型肝炎肝硬化患者60例，采用免疫印跡法檢測患者血清自身抗體，并根據(jù)自身抗體檢測結(jié)果分為自身抗體陽性組（n=13）和自身抗體陰性組（n=47），采用全自動生化分析儀檢測兩組肝功能指標(biāo)（ALT、AST、TBil、AKP、GGT）及免疫球蛋白，并進行肝臟瞬時彈性硬度檢測（Fibroscan）。 結(jié)果 乙型肝炎肝硬化患者自身抗體總檢出率為21.7%。與自身抗體陰性組比較，自身抗體陽性組年齡增大（P < 0.05），GLB、IgG、Fibroscan值顯著升高（P < 0.05），ALB降低（P < 0.05）。 結(jié)論 乙型肝炎肝硬化患者存在自身免疫反應(yīng)，導(dǎo)致自身抗體的產(chǎn)生，其與患者的年齡、肝臟損傷及肝纖維化程度有關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 乙型肝炎肝硬化；自身抗體；抗核抗體；自身免疫反應(yīng)

[中圖分類號] R512.6 [文獻標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-7210（2017）10（b）-0121-04

Clinical significance of serum autoantibodies detection in patients with hepatitis B cirrhosis

YAN Xiuping HOU Qingshun WANG Hui GUO Lu

Liver Disease Ten Area， the Sixth People′s Hospital of Qingdao City， Shandong Province， Qingdao 266033， China

[Abstract] Objective To explore the presence of serum autoantibodies in patients with hepatitis B cirrhosis and its clinical significance. Methods 60 patients with hepatitis B cirrhosis in the Sixth People′s Hospital of Qingdao City from March 2016 to June 2017 were selected and divided into autoantibodies positive group （n=13） and autoantibodies negative group （n=47） according to the test results of serum autoantibodies which were detected with immunoblot. The liver function indexes of ALT， AST， TBil， AKP， GGT and immunoglobulin between two groups were detected by using full automatic biochemical analyzer. Liver instantaneous elastic hardness （Fibroscan） was tested. Results Total positive rate of autoantibodies in patients with hepatitis B cirrhosis was 21.7%. Compared with autoantibody negative group， the age of autoantibody positive group was increased （P < 0.05）， the levels of GLB， IgG and Fibroscan were significantly increased in autoantibody positive group （P < 0.05）， ALB of autoantibody positive group was decreased （P < 0.05）. Conclusion Autoimmune reactions exist in patients with hepatitis B cirrhosis， and cause production of autoantibodies， which are related to the age， the degree of liver damage and liver fibrosis of paients.

[Key words] Hepatic B cirrhosis； Autoantibodies； Anti-nuclear antibodies； Autoimmunity

自身抗體是多種針對自身組織細胞成分（核酸、蛋白、受體或者功能細胞組件）的抗體，是自身免疫性疾病的重要標(biāo)志，其中抗核抗體、抗線粒體抗體M2、抗肝腎微粒體抗體、抗肝可溶性抗原/肝胰抗原抗體等是與自身免疫性肝病相關(guān)的自身抗體（以下統(tǒng)稱自身抗體）。但是越來越多的研究發(fā)現(xiàn)，不僅在自身免疫性肝病，在乙型病毒性肝炎、丙型病毒性肝炎、脂肪肝以及藥物性肝炎患者血清中也可檢測出自身抗體，只是病毒性肝炎患者自身抗體滴度較自身免疫性肝病低[1]。因此目前的觀念認為自身抗體陽性并不一定是自身免疫性肝病，也可能與肝臟損害及慢性化密切相關(guān)。本研究旨在探討血清自身抗體的檢測在乙型肝炎肝硬化患者中的特點及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2016年3月～2017年6月青島市第六人民醫(yī)院門診及住院的乙型肝炎肝硬化患者60例，男38例，女22例，年齡25～76歲，根據(jù)自身抗體檢測結(jié)果分為自身抗體陽性組（n=13）和自身抗體陰性組（n=47）。診斷符合2015年中華醫(yī)學(xué)會制訂的《慢性乙型肝炎防治指南》診斷標(biāo)準(zhǔn)，排除合并甲、丙、丁、戊型肝炎病毒感染以及酒精性肝損傷、自身免疫性肝病、藥物性肝損傷、遺傳代謝性肝病等。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審查批準(zhǔn)通過。endprint

1.2 實驗方法

1.2.1 血生化學(xué)檢測 采用OLYMPUS AU2700全自動生化分析儀進行檢測，主要檢測指標(biāo)包括丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、總膽紅素（TBil）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT）、堿性磷酸酶（AKP）、免疫球蛋白。

1.2.2 免疫學(xué)檢測 采用免疫印跡法進行檢測自身免疫性肝病抗體譜，包括抗核抗體、抗線粒體抗體M2、抗肝腎微粒體抗體、抗肝可溶性抗原/肝胰抗原抗體、抗gp210抗體、抗sp100抗體、抗著絲點蛋白B抗體、抗Ro52抗體，試劑盒購自蘇州HOB生物醫(yī)藥有限公司。具體操作步驟如下：①將抗原膜條置于孵育槽中，將帶有文字標(biāo)記的一面朝上，每槽加入1.5 mL樣品緩沖液將膜條室溫下?lián)u擺搖床輕微晃動5 min后將其吸掉；②每槽加入1.5 mL稀釋血清樣品，室溫下在搖擺搖床上輕微晃動孵育30 min；③吸去孵育槽中液體，然后每槽加入1.5 mL清洗緩沖液，室溫下在搖擺搖床上輕微晃動5 min，吸去孵育槽中液體，再重復(fù)洗滌2次；④吸去孵育槽中液體，然后每槽加入1.5 mL稀釋的酶結(jié)合物，室溫下在搖擺搖床上輕微晃動孵育30 min；⑤重復(fù)步驟③；⑥吸去孵育槽中液體，然后每槽加入1.5 mL底物液，室溫下在搖擺搖床上輕微晃動孵育10 min；⑦吸去孵育槽中液體，然后每槽加入1.5 mL蒸餾水或純凈水，室溫下在搖擺搖床上輕微晃動1 min，吸去孵育槽中液體，再重復(fù)洗滌2次；⑧膜條干燥后，將抗原膜條粘貼于結(jié)果記錄單上。結(jié)果判定：根據(jù)抗原帶著色程度，無著色或較臨界值線著色淺為陰性；與臨界值線著色強度基本相當(dāng)為臨界陽性；著色強度較臨界線深為陽性。

1.2.3 肝臟瞬時彈性硬度檢測 采用Fibroscan無創(chuàng)肝纖維化診斷設(shè)備儀器瞬時彈性掃描儀（法國Echosens公司）進行檢測，由經(jīng)過專業(yè)培訓(xùn)的專職醫(yī)師按照儀器標(biāo)準(zhǔn)操作方法，分別于右腋前線和腋中線之間第7、8肋間進行10次有效測量，取中位數(shù)作為Fibroscan值（單位kPa），代表肝組織的彈性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析和處理，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 乙型肝炎肝硬化患者自身抗體檢測

60例乙型肝炎肝硬化患者中13例檢測出至少一項自身抗體陽性，檢出率為21.7%，抗核抗體陽性8例，其中胞漿顆粒型4例，核顆粒型2例，著絲點型2例；抗線粒體抗體陽性1例；抗著絲點蛋白B抗體陽性3例；抗Ro52抗體陽性6例；抗肝腎微粒體抗體陽性1例。其中4例患者兩種抗體陽性，1例患者有3種抗體陽性。

2.2 乙型肝炎肝硬化患者自身抗體與性別、年齡及病程關(guān)系

自身抗體陽性組與自身抗體陰性組性別及病程比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）；但自身抗體陽性組年齡大于自身抗體陰性組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）。見表1。

2.3 乙型肝炎肝硬化患者自身抗體與生化指標(biāo)關(guān)系

與自身抗體陰性組比較，自身抗體陽性組ALB降低，GLB升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）；兩組ALT、AST、TBil、AKP、GGT水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。見表2。

2.4 乙型肝炎肝硬化患者自身抗體與免疫球蛋白及肝纖維化指數(shù)關(guān)系

與自身抗體陰性組比較，自身抗體陽性組IgG、Fibroscan值升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）；兩組IgM、IgA水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。見表3。

3 討論

自身免疫是人體正常的生理現(xiàn)象，但反應(yīng)過度就可能引發(fā)自身免疫性疾病。研究發(fā)現(xiàn)，某些藥物可通過刺激T細胞的異?；罨搬尫偶毎蜃佣鴮?dǎo)致自身免疫性肝病[2]；在非酒精性脂肪性肝炎患者中自身抗體的陽性率明顯高于正常人群，研究發(fā)現(xiàn)抗核抗體的滴度與非酒精性脂肪性肝炎患者的胰島素抵抗存在相關(guān)性[3]。

目前對自身免疫疾病與病毒感染相關(guān)性進行的大量研究認為，病毒感染是自身免疫性疾病的啟動因子，可誘發(fā)機體自身免疫[4]。既往研究發(fā)現(xiàn)，丙型肝炎病毒感染常常伴隨自身免疫現(xiàn)象，其可能是肝細胞損傷的誘因之一，并引起肝臟疾病的慢性化進展，主要表現(xiàn)為血中可檢測出各種自身抗體[5]，全球丙型肝炎病毒感染相關(guān)的慢性肝炎患者自身抗體的發(fā)生率約為25%[6]，與自身抗體陰性的慢性丙型肝炎病毒感染的患者相比，自身抗體陽性患者疾病的活動性及嚴(yán)重程度更高，組織和生化學(xué)指標(biāo)更嚴(yán)重[7-8]。近年，乙型肝炎病毒感染與自身免疫疾病之間的關(guān)系也受到廣泛關(guān)注，研究認為乙型肝炎病毒感染肝臟細胞并不直接引起肝細胞病變，而是通過一系列免疫應(yīng)答引起免疫損傷從而造成肝組織的炎癥壞死[9]，即當(dāng)肝細胞功能受損時，乙型肝炎病毒感染可能會激發(fā)體內(nèi)自身抗體的產(chǎn)生，而相應(yīng)的免疫應(yīng)答和免疫病理反應(yīng)可導(dǎo)致肝細胞進一步損傷[10]。另外，乙型肝炎患者進行干擾素治療可產(chǎn)生自身抗體，且停用干擾素后自身抗體可消失[11]。因此目前認為乙型肝炎病毒感染后引發(fā)的自身免疫反應(yīng)與肝細胞損傷密切相關(guān)[12]，自身抗體的陽性率與肝損傷程度有關(guān)，隨疾病的嚴(yán)重程度和疾病進展增高，但其滴度與肝損傷程度無關(guān)[10]，其產(chǎn)生自身免疫的機制可能為：①乙型肝炎病毒感染誘導(dǎo)自身抗原修飾，從而激發(fā)自身免疫；②乙型肝炎病毒感染導(dǎo)致控制自身免疫的機制紊亂；③乙型肝炎病毒抗原與機體自身抗原之間的分子模擬[13]。也就是說，不僅是自身免疫性肝病，在病毒性肝炎如乙型肝炎、丙型肝炎等患者也存在自身免疫性反應(yīng)，可檢測出一種或多種自身抗體，自身抗體的產(chǎn)生與年齡、性別以及肝臟纖維化程度有關(guān)[14-15]，并且慢性肝炎病毒感染可導(dǎo)致自身免疫性肝炎的發(fā)生，研究發(fā)現(xiàn)慢性乙型肝炎病毒感染可能引發(fā)Ⅰ型自身免疫性肝病，而慢性丙型肝炎病毒感染可引起Ⅱ型自身免疫性肝炎的發(fā)生[16]。而病毒性肝炎患者機體長期的自身免疫紊亂可導(dǎo)致肝細胞硬變和癌變[17]。我國是乙型肝炎大國，乙型肝炎引起的肝硬化很常見，因此，研究自身抗體在乙型肝炎肝硬化患者中的意義顯得尤為重要。endprint

肝臟是蛋白合成、分解的重要場所，當(dāng)肝炎病毒引起肝臟細胞、人體血清中的免疫球蛋白常常發(fā)生變化，張占卿等[18]通過研究發(fā)現(xiàn)，血清免疫球蛋白尤其是IgG對肝硬化可能有診斷價值，且免疫球蛋白的升高與肝臟儲備功能下降有關(guān)[19]。

本研究發(fā)現(xiàn)，在乙型肝炎肝硬化患者中可檢測出多種自身抗體，其中抗核抗體最常見，說明乙型肝炎肝硬化患者機體內(nèi)存在自身免疫現(xiàn)象。自身抗體陽性組乙型肝炎肝硬化患者與自身抗體陰性組相比，前者年齡明顯大于后者，而兩組間性別及病程無明顯差異，表明乙型肝炎肝硬化患者自身抗體的出現(xiàn)與性別無關(guān)，也與乙型肝炎病毒感染的時間長短有關(guān)[13]，但本研究兩組間病程比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，考慮原因可能是部分患者癥狀輕，發(fā)現(xiàn)時間晚，以至于在病程的描述上不夠確切，導(dǎo)致誤差有關(guān)。兩組間ALT、AST、TBil及AKP、GGT無明顯差異，與以往研究[13]認為自身抗體檢出率與肝臟的損傷程度相關(guān)不符，考慮原因可能與本研究病例數(shù)較少有關(guān)，需要增大樣本量進一步研究。另一方面，自身抗體陽性的乙型肝炎肝硬化患者與自身抗體陰性患者相比，GLB明顯升高，ALB降低（P < 0.05），且前者IgG以及Fibroscan值明顯高于后者，提示自身抗體的出現(xiàn)與肝臟的儲備功能和肝臟纖維化程度有關(guān)，原因可能為乙型肝炎病毒感染后誘導(dǎo)肝細胞膜發(fā)生免疫反應(yīng)，加重肝臟損害，同時促進肝纖維化的進展[20]。

總之，乙型肝炎肝硬化患者機體存在自身免疫反應(yīng)，以自身抗體陽性為主要表現(xiàn)，其與患者的年齡及肝臟損傷程度有關(guān)，并參與肝纖維化的進展。因此，在臨床上，可通過自身抗體的檢測對乙型肝炎肝硬化患者進行臨床病情及預(yù)后評估，指導(dǎo)治療。

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（收稿日期：2017-07-15 本文編輯：李亞聰）endprint