吳嘉

[摘要]目的 探討Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白在乳腺癌中表達(dá)的臨床病理特點(diǎn)。方法 選擇2013年2月～2017年2月我院收治的行乳腺腫瘤手術(shù)治療患者的人體石蠟包埋組織標(biāo)本148例，其中乳腺良性病變26例（A組），無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移乳腺癌58例（B組），淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移乳腺癌64例（C組）。所有標(biāo)本均實(shí)施免疫組化檢查，分析Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白表達(dá)。結(jié)果 Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白表達(dá)于乳腺癌癌細(xì)胞胞漿內(nèi)和乳腺良性病變上皮細(xì)胞內(nèi)。B組中Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白表達(dá)較弱，染色范圍較小，染色深度均較低；A組、C組中Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白表達(dá)較弱，染色深度強(qiáng)。A、B、C三組Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為88.5%（23/26）、46.6%（27/58）、65.6%（42/64），A組高于B組、C組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。在乳腺癌患者中，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、確診年齡與Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白表達(dá)有關(guān)（P<0.05），但臨床分期、組織學(xué)類型與Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白表達(dá)無(wú)關(guān)（P>0.05）。結(jié)論 Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、確診年齡有著密切的關(guān)系，但與臨床分期、組織學(xué)類型無(wú)關(guān)，需引起高度關(guān)注。

[關(guān)鍵詞]Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白；乳腺癌；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；臨床病理

[中圖分類號(hào)] R365 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2017）10（a）-0004-03

[Abstract]Objective To explore the clinicopathological features of Fas-related death domain proteins expression in breast cancer.Methods From February 2013 to February 2017，148 cases of paraffin-embedded tissue specimens from patients undergone tumor surgeries were selected.There were benign breast lesions in 26 cases （group A），breast cancer without lymph node metastasis in 58 cases （group B），and breast cancer with lymph node metastasis in 64 cases （group C）.All specimens were performed with immunohistochemical examinations in order to analyze the proteins expression of Fas-related death domain.Results It was detected that Fas-related death domain proteins were expressed in the intracytoplasm of breast cancer cells and epithelial cells of benign breast lesions.In group B，the expression of Fas-related death domain proteins was weak and dyeing range and depth were small compared with those in groups of A and C，which were in slight expression and deep dyeing.The positivity expression rates of Fas-related death domain proteins in groups of A，B，and C were 88.5% （23/26），46.6% （27/58），and 65.6% （42/64） respectively.The positivity expression rate in group A was higher than that in groups of B and C with statistical differences （P<0.05）.For breast cancer patients，lymph node metastasis and age with a definite diagnosis were associated with Fas-related death domain protein expression （P<0.05）.However，the clinical stage and histological type were not related to the expression of Fas-related death domain protein （P>0.05）.Conclusion The expression of Fas-related death domain proteins is closely related to the lymph node metastasis and age with a definite diagnosis of breast cancer，but it has nothing to do with the clinical stage and histological type，to which should be paid high attention.

[Key words]Fas-related death domain protein；Breast cancer；Lymph node metastasis；Clinical pathologyendprint

乳腺癌患病率較高，會(huì)給患者身心健康和生命安全帶來(lái)嚴(yán)重影響[1]。當(dāng)前，臨床上多采用手術(shù)方法進(jìn)行治療，但部分患者最終預(yù)后不良[2]。而且，對(duì)于大部分初診時(shí)無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者來(lái)說(shuō)，影響其預(yù)后的關(guān)鍵是淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[3]，而導(dǎo)致乳腺癌患者出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的因素較多，包括細(xì)胞黏附異常、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化、基質(zhì)金屬蛋白酶異常表達(dá)等。近年來(lái)，有研究發(fā)現(xiàn)，在多種惡性腫瘤發(fā)生與發(fā)展過(guò)程中，F(xiàn)as相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白發(fā)揮著重要的作用，且與乳腺癌轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)[4]?；诖?，本研究深入探討了Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白在乳腺癌中表達(dá)的臨床病理特點(diǎn)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選擇2013年2月～2017年2月我院收治的行手術(shù)治療的乳腺腫瘤患者的人體石蠟包埋組織標(biāo)本148例，包括乳腺良性病變26例（A組），無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移乳腺癌58例（B組），有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移乳腺癌64例（C組）。A組患者年齡30～72歲，平均（48.6±10.2）歲；其中乳腺增生性病變14例，纖維腺瘤12例。B組患者年齡32～78歲，平均（49.8±10.5）歲；浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌48例，浸潤(rùn)性小葉癌10例。C組患者年齡38～74歲，平均（52.0±9.8）歲；浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌52例，浸潤(rùn)性小葉癌12例。

1.2方法

1.2.1儀器與試劑 Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白抗體購(gòu)自Abcam公司；Polymer Kit-0015 DAB顯色試劑盒購(gòu)自福建邁新生物技術(shù)公司；格蘭仕微波爐。

1.2.2免疫組化檢查 常規(guī)石蠟切片，以3%過(guò)氧化氫進(jìn)行20 min孵育，PBS沖洗，做微波抗原修復(fù)，隨后PBS洗3次；滴加封閉血清，做20 min孵育處理，隨后滴加Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白抗體，工作濃度為1∶100，4℃條件下，孵育過(guò)夜，PBS洗3次；DAB溶液顯色，以清水沖洗，蘇木精復(fù)染脫水封片，置于光鏡下觀察。陰性對(duì)照組采用PBS液替代Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白抗體。由兩名經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)師共同閱片。計(jì)算總體免疫染色得分，計(jì)算方法為陽(yáng)性細(xì)胞陽(yáng)性百分比計(jì)分和陽(yáng)性細(xì)胞染色深度計(jì)分的乘積，陰性為0分，陽(yáng)性為1～4分。其中，陽(yáng)性細(xì)胞陽(yáng)性百分比評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：陽(yáng)性率為0～<5%記0分；5%～25%記1分；>25%～50%記2分，>50%～75%記3分，>75%記4分。陽(yáng)性細(xì)胞染色深度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：無(wú)染色或邊緣變色記0分；陽(yáng)性細(xì)胞呈淺黃色記1分；黃色記2分，棕褐色記3分。總體免疫染色得分≤4分為低表達(dá)，6、8、9、12分均為高表達(dá)[5]。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白表達(dá)

乳腺癌癌細(xì)胞胞漿內(nèi)和乳腺良性病變上皮細(xì)胞內(nèi)均存在Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白表達(dá)。B組中Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白表達(dá)較弱，染色范圍較小，染色深度較淺；A組、C組中Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白表達(dá)較弱，染色深度強(qiáng)，A組、B組、C組Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為88.5%（23/26）、46.6%（27/58）、65.6%（42/64）。A組高于B組、C組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=13.09、4.81，P=0.000、0.028）。

2.2乳腺癌中Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白與病理指標(biāo)的關(guān)系

在122例乳腺癌患者中，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、確診年齡與Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白表達(dá)有關(guān)（P<0.05），但臨床分期、組織學(xué)類型與Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白表達(dá)無(wú)關(guān)（P>0.05）（表1）。

3討論

乳腺癌是常見(jiàn)的女性惡性腫瘤。當(dāng)前，隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，越來(lái)越多的乳腺癌被及時(shí)發(fā)現(xiàn)，而且，早期診斷和早期治療降低了病死率[6]。但是，乳腺癌轉(zhuǎn)移仍是導(dǎo)致患者死亡的一個(gè)重要因素[7-9]。所以，臨床上采取積極措施，探索與乳腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)的生物標(biāo)志物，從而采取積極措施控制病情進(jìn)展，改善患者預(yù)后，就顯得至關(guān)重要。

Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白最早是在1995年由Chinnaiyan等篩選出來(lái)的，是能與Fas分子胞內(nèi)段死亡域相互作用的新蛋白[10-12]。Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白包括C端的死亡結(jié)構(gòu)域和N端的死亡效應(yīng)域[13-15]。有研究發(fā)現(xiàn)，在Fas、DR3等凋亡信號(hào)途徑中，F(xiàn)as相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白是必需蛋白，特別是在Fas凋亡信號(hào)途徑中，F(xiàn)as相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白以其C端死亡結(jié)構(gòu)域直接結(jié)合Fas死亡結(jié)構(gòu)域，互相作用，顯露出死亡效應(yīng)域，隨后作用于無(wú)活性的Caspase-6酶原，使之活化，引發(fā)Caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)，致使細(xì)胞凋亡[16]。而細(xì)胞凋亡失控在胃癌、非小細(xì)胞肺癌、肝癌等腫瘤的發(fā)生與發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用[17]。但是，臨床上尚未明確Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白與腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移發(fā)生關(guān)系的具體作用機(jī)制和臨床病理意義[18]。

本研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)as相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白表達(dá)于乳腺癌癌細(xì)胞胞漿內(nèi)和乳腺良性病變上皮細(xì)胞內(nèi)。且A組Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白陽(yáng)性表達(dá)率高于B組、C組（P<0.05）。由此可知，乳腺癌患者Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白陽(yáng)性表達(dá)與其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。本研究還深入分析了乳腺癌中Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白與病理指標(biāo)相關(guān)性。結(jié)果顯示，在乳腺癌患者中，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、確診年齡與Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白表達(dá)有關(guān)（P<0.05），但臨床分期、組織學(xué)類型與Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白表達(dá)無(wú)關(guān)（P>0.05）。進(jìn)一步證實(shí)了乳腺癌患者Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白陽(yáng)性表達(dá)與其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。本研究局限之處在于未明確Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白影響乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制，今后仍需進(jìn)行深入分析。

綜上所述，F(xiàn)as相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有著密切的關(guān)系，需引起高度關(guān)注。endprint

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（收稿日期：2017-07-21 本文編輯：任 念）endprint