劉姝+房耀維+王淑軍+焦豫良+陳國強+潘建梅+金志勇

摘要：為開發(fā)1種基于共培養(yǎng)的抗菌性海洋放線菌平板高效篩選方法，并對菌株提高放線菌產(chǎn)抗菌物質(zhì)能力的機制進行探索，以單獨培養(yǎng)的?？哺缴啪€菌為對照，研究與菌株共培養(yǎng)對?？哺缴Ｑ蠓啪€菌抗菌性菌株篩選效率的影響，以及不同生長期蠟樣芽孢桿菌菌株Bacillus cereus AS1.1846的發(fā)酵液、發(fā)酵液添加量和添加時間對放線菌菌株AAA015抗菌活性的影響，初步探索提高放線菌抗菌活性的機制。結果表明，通過平板共培養(yǎng)可以顯著提高抗菌性海洋放線菌篩選效率。B. cereus AS1.1846從穩(wěn)定期開始分泌到胞外提高放線菌抗菌活性、對熱穩(wěn)定的次生代謝產(chǎn)物，少量的該物質(zhì)即可顯著提高菌株AAA015的抗菌活性。獲得了1種基于共培養(yǎng)的高效抗菌活性海洋放線菌平板篩選方法。

關鍵詞：平板；共培養(yǎng)；海洋放線菌；抗菌活性；篩選

中圖分類號： S182文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2017）17-0254-05

收稿日期：2016-04-19

基金項目：國家自然科學基金（編號：31201687）；江蘇省自然科學基金面上項目（編號：BK20141249、BK20151282）；江蘇省海洋資源開發(fā)研究院開放課題（編號：JSIMR201422、JSIMR201506）；淮海工學院科研創(chuàng)新基金（編號：Z2014016）；江蘇省高校“青藍工程”。

作者簡介：劉姝（1975—），女，江西南昌人，博士，副教授，主要從事海洋微生物資源開發(fā)與利用研究。E-mail：jdliushu@163.com。

通信作者：房耀維，博士，副教授，主要從事海洋微生物次級代謝產(chǎn)物研究。E-mail：foroei@163.com?？股卦谌祟惻c植物病原微生物的斗爭中起到了舉足輕重的作用[1]。但是，由于抗生素的廣泛使用乃至濫用，導致多重耐藥菌（multidrug-resistant pathogens，簡稱MDR）出現(xiàn)并有蔓延態(tài)勢，篩選新穎的抗菌活性物質(zhì)用于生物農(nóng)藥的開發(fā)成為對抗多重耐藥菌的主要方法之一[2-3]。不幸的是，盡管抗菌活性物質(zhì)篩選技術、合成生物學以及化學修飾技術快速發(fā)展，但新型抗菌活性物質(zhì)的發(fā)現(xiàn)速率卻依然難以滿足藥劑市場的需求，導致公眾健康仍然面臨巨大威脅[4]。幅員遼闊、環(huán)境復雜多樣的海洋蘊含種類、數(shù)量極其巨大的新穎抗菌活性物質(zhì)[5]。研究表明，目前篩選獲得的抗菌物質(zhì)只是寶藏的冰山一角，更多的新穎抗菌活性物質(zhì)有待研究者去開發(fā)[6]。因此，需要進一步開發(fā)快速的抗菌活性物質(zhì)篩選技術。

傳統(tǒng)的抗菌活性微生物篩選建立在單獨培養(yǎng)的基礎上。而自然情況下，微生物是雜居混生的，爭奪營養(yǎng)和生存空間被認為是微生物產(chǎn)抗菌物質(zhì)的主要誘因之一[7-8]，通過微生物共培養(yǎng)發(fā)酵可顯著提高多種微生物產(chǎn)抗菌物質(zhì)水平可以進一步對此進行佐證[9]。可見，單獨培養(yǎng)降低了微生物產(chǎn)抗菌物質(zhì)的可能性，不利于抗菌活性物質(zhì)的篩選。模擬自然環(huán)境，基于共培養(yǎng)方式篩選產(chǎn)抗菌活性物質(zhì)的微生物菌株，理論上具有更好的篩選潛在產(chǎn)抗菌物質(zhì)微生物的能力。放線菌是微生物中產(chǎn)抗菌活性物質(zhì)的佼佼者[10]。本研究以?？哺缴Ｑ蠓啪€菌為研究對象，擬開發(fā)1種基于平板共培養(yǎng)的篩選具有抗菌活性海洋放線菌的高效方法，對提高菌株抗菌活性的物質(zhì)來源進行探索。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1樣品采集連云港連島海域（34°76′N，119°48′E）活黃海葵，樣品置于無菌玻璃瓶內(nèi)，立即放于冰盒保存，并盡快送回實驗室進行處理。

1.1.2試驗菌株蠟樣芽孢桿菌（Bacillus cereus AS1.1846）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus AS1.2465）、大腸桿菌（Escherichia coli AS1.487）、啤酒酵母（Saccharomyces cerevisiae AS2.114）、巴斯德畢赤酵母（Pichia pastoris GS115）、擴展青霉（Penicillium expansum AS3.3703）、熒光假單胞菌（Pseudomouas fluorescens AS1.1802）、黑曲霉（Aspergillus niger AS3.350），來源于中國普通微生物菌種保藏中心。

1.1.3培養(yǎng)基?？哺缴啪€菌分離培養(yǎng)基：天然海沙提取物（NRS提取物）90 mL，海葵提取物10 mL，海水900 mL，pH值自然。NRS提取物的制備：用500 mL海水清洗900 mL取自潮間帶的海沙，4 ℃ 保存。?？崛∥锏闹苽洌夯铧S海葵10 g，加海水90 mL，高速勻漿后，8層紗布過濾，現(xiàn)配現(xiàn)用。培養(yǎng)基滅菌降溫后添加放線菌酮、萘啶酮酸至終濃度分別為100、25 mg/L。指示菌和共培養(yǎng)菌培養(yǎng)基的配制：細菌和真菌分別采用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)[11]和PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)[11]，固體培養(yǎng)基添加2%瓊脂。種子培養(yǎng)基為2216E培養(yǎng)基，發(fā)酵產(chǎn)抗菌物質(zhì)培養(yǎng)基采用Zhang等報道的發(fā)酵培養(yǎng)基[12]。所有培養(yǎng)基均在1×105 Pa條件下滅菌20 min。

1.2平板共培養(yǎng)篩選抗菌性?？哺缴啪€菌

如圖1所示，從1 mL移液槍槍頭擴口端剪下12 mm，制成塑料圓柱體，1×105 Pa滅菌20 min，備用。預共培養(yǎng)的菌株發(fā)酵活化后用三區(qū)劃線法分離單菌落。在無菌條件下，將10 g濕海葵放入滅菌的鋁合金盤子內(nèi)，放置于超凈臺中24 h使樣品干燥，再用研磨棒輕輕地將樣品壓成粉末。用直徑為

14 mm的泡沫塑料棒輕壓粉末作為印章，在固體培養(yǎng)基上依次影印8～9次，培養(yǎng)3～10 d至出現(xiàn)單菌落。根據(jù)放線菌菌落顏色、形狀、大小以及簡單染色后顯微鏡觀察菌株基內(nèi)菌絲、氣生菌絲、孢子絲和孢子形態(tài)分辨不同放線菌，標記編號，并保存菌種。

分別吸取100 μL培養(yǎng)至對數(shù)生長期的E. coli AS1.487涂布平板，用于抗菌活性測定。將塑料圓柱體窄口端置于單菌落上，輕壓至圓柱體接觸皿底，取出后，將塑料圓柱體寬口端置于?？哺缴啪€菌單菌落上，用鑷子輕壓窄口端瓊脂，使圓柱中上下瓊脂層接觸，30 ℃共培養(yǎng)3 d后，將共培養(yǎng)圓柱體移至含菌平板上，用于抗菌活性篩選。以塑料圓柱體窄口端為無菌瓊脂，寬口端為放線菌的單培養(yǎng)菌株為對照（CK）。培養(yǎng)2 d后，置于S. aureus AS1.2465、P. fluorescens AS1.1802、S. cerevisiae AS2.114以及P. expansum AS3.3703含菌平板上，30 ℃培養(yǎng)3 d后測定抑菌圈直徑。endprint

1.3不同共培養(yǎng)菌株對3株放線菌產(chǎn)抗菌物質(zhì)的影響

將S. aureus AS1.2465、B. cereus AS1.1846、E. coli AS1.487、P. fluorescens AS1.1802、P. pastoris GS115、S. cerevisiae AS2.114、P. expansum AS3.3703以及A. niger AS3.350分別與3株具有抗菌活性的放線菌菌株（編號分別為AAA015、AAA016和AAA162）共培養(yǎng)，以單培養(yǎng)的菌株為對照，置于不同供試菌平板上，30 ℃培養(yǎng)3 d后測定抑菌圈直徑。

1.4不同處理形式的B. cereus AS1.1846菌體、發(fā)酵液的制備及抗菌活性測定

將斜面保藏的B. cereus AS1.1846接種至裝有50 mL液體營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的250 mL三角瓶中，30 ℃、160 r/min培養(yǎng)36 h。吸取10 mL發(fā)酵液，8 000 r/min離心5 min，上清液過0.22 μm的濾膜，記作無細胞上清液（cell-free supernatants，簡稱CFS）。量取1/2 CFS，沸水煮10 min，記作hs-CFS，稱取濕質(zhì)量0.1 g的菌體，用10 mL無菌生理鹽水清洗3次后，重懸于10 mL無菌生理鹽水中，冰水浴，超聲波破碎菌體（400 W，超聲3 s，停7 s，共超聲10 min），鏡檢無完整細胞，記作SC，量取1/2 SC，1×105 Pa滅菌30 min，記作hs-SC。將塑料圓柱體寬口端置于無菌瓊脂平板上，輕壓至圓柱體接觸皿底，取出后，在無菌條件下，分別向塑料圓柱體內(nèi)加入 50 μL CFS、hs-CFS、SC、hs-SC，置于S. aureus AS1.2465、E. coli AS1.487、S. cerevisiae AS2.114以及P. expansum AS3.3703含菌平板上，30 ℃培養(yǎng)3 d后測定抑菌圈直徑。

1.5不同處理形式的B. cereus AS1.1846菌體及發(fā)酵液對放線菌菌株AAA015、AAA016、AAA162產(chǎn)抗菌物質(zhì)的影響

在?？哺缴啪€菌分離培養(yǎng)基平板上采用三區(qū)劃線法分離單菌落，塑料圓柱體寬口端置于單菌落上，輕壓至圓柱體接觸皿底，取出后，在無菌條件下，分別向塑料圓柱體內(nèi)加入20 μL CFS、hs-CFS、SC和hs-SC，以未加入任何物質(zhì)的菌株為對照，置于S. aureus AS1.2465、E. coli AS1.487、S. cerevisiae AS2.114、P. expansum AS3.3703含菌平板上，30 ℃培養(yǎng)3 d后測定抑菌圈直徑。采用牛津杯法，利用菌株S. aureus AS1.2465、E. coli AS1.487、S. cerevisiae AS2.114以及P. expansum AS3.3703測定CFS、hs-CFS、SC和hs-SC抗菌活性。

1.6添加CFS提高菌株AAA015抗菌活性的條件

1.6.1不同生長期菌株B. cereus AS1.1846 CFS對菌株AAA015抗菌活性的影響利用吸光度法測定菌株B. cereus AS1.1846在波長為600 nm處的生長曲線，分別取對數(shù)生長期、穩(wěn)定期前期、穩(wěn)定期后期和衰亡期的發(fā)酵液，利用“1.4”節(jié)的方法制備CFS。用接種環(huán)將斜面保存菌種AAA015接種至裝有30 mL 2216E培養(yǎng)基的250 mL三角瓶中，30 ℃、160 r/min 培養(yǎng)36 h后作為種子培養(yǎng)基，按1%的接種量接種至裝有50 mL Zhang等報道的發(fā)酵培養(yǎng)基[12]的250 mL三角瓶中，同時添加不同生長時期的CFS 2 mL，30 ℃、160 r/min培養(yǎng)3 d，8 000 r/min離心5 min，發(fā)酵液過 0.22 μm 濾膜后，采用牛津杯法，以S. aureus AS1.2465、E. coli AS1.487、S. cerevisiae AS2.114以及P. expansum AS3.3703為供試菌測定抗菌活性。以未添加CFS的單獨培養(yǎng)菌株為對照。

1.6.2CFS添加量對菌株AAA015抗菌活性的影響其他條件按照“1.6.1”節(jié)方法不變，在接種Zhang等報道的發(fā)酵培養(yǎng)基[12]時分別向不同三角瓶內(nèi)添加穩(wěn)定期后期的CFS 05、1、2、3、4 mL，30 ℃、160 r/min 培養(yǎng)3 d，8 000 r/min離心 5 min，發(fā)酵液過 0.22 μm 濾膜后，采用牛津杯法測定抗菌活性。以未添加CFS的單獨培養(yǎng)菌株為對照。

1.6.3CFS添加時間對菌株AAA015抗菌活性的影響利用吸光度法測定菌株AAA015在波長600 nm處的生長曲線。其他條件按照“1.6.1”節(jié)方法不變，分別在菌株AAA015培養(yǎng)初期、對數(shù)生長期、穩(wěn)定期加入2 mL CFS，160 r/min培養(yǎng) 3 d 后采用牛津杯法測定抗菌活性。

2結果與分析

2.1平板共培養(yǎng)篩選具有抗菌活性的海葵共附生放線菌

以單獨培養(yǎng)為對照，通過與B. cereus AS1.1846共培養(yǎng)，及利用S. aureus AS1.2465、E. coli AS1.487、S. cerevisiae AS2.114、P. expansum AS3.3703含菌平板進行共培養(yǎng)，篩選具有抗菌活性的?？哺缴啪€菌。結果如表1和圖2所示，利用平板共培養(yǎng)法和單獨培養(yǎng)法對129株?？哺缴啪€菌的抗菌活性進行篩選，共培養(yǎng)篩選法對S. aureus AS1.2465、E. coli AS1.487、S. cerevisiae AS2.114以及P. expansum AS3.3703的抗性菌株篩出率均顯著顯著高于單獨培養(yǎng)法。選取其中抗菌活性最高的放線菌菌株（編號分別為AAA015、AAA016和AAA162）用于后續(xù)研究。endprint

2.2不同共培養(yǎng)菌株對3株放線菌產(chǎn)抗菌物質(zhì)的影響

選革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、酵母菌、絲狀真菌各2

種分別與3株具有抗菌活性的放線菌菌株共培養(yǎng)，以單培養(yǎng)的菌株為對照，置于不同供試菌平板上，30 ℃培養(yǎng)3 d后測定抑菌圈（表2）?？傮w看出，3種放線菌和8株菌株共培養(yǎng)后，部分共培養(yǎng)后顯著提高了菌株的抗菌活性。有趣的是菌株AAA015與菌株B. cereus AS1.1846共培養(yǎng)后，產(chǎn)生了抗S. cerevisiae AS2.114的活性。

2.5添加CFS提高菌株AAA015抗菌活性的條件

2.5.1不同生長期菌株B. cereus AS1.1846 CFS對菌株AAA015抗菌活性的影響菌株B. cereus AS1.1846在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的生長曲線見圖3。制備培養(yǎng)16、20、34、40 h 后的CFS，分別添加到菌株AAA015發(fā)酵培養(yǎng)基中，發(fā)酵后利用牛津杯法測定發(fā)酵液抗菌活性（圖4）。不同生長期的CFS對菌株AAA015抗菌活性的影響有顯著差異。在B. cereus AS1.1846的對數(shù)生長中期及穩(wěn)定初期，雖然CFS提高了菌株的抗菌活性，但是提高不顯著，而穩(wěn)定后期及衰亡期可顯著提高菌株的抗菌活性。初步表明提高放線菌抗菌活性的物質(zhì)產(chǎn)生于B. cereus AS1.1846的穩(wěn)定期，可能屬于次生代謝產(chǎn)物。

2.5.2CFS添加量對菌株AAA015抗菌活性的影響由圖5可知，當CFS添加量超過1 mL后，其抗菌活性不再顯著提高甚至略有下降趨勢。表明提高菌株AAA015抗菌活性的物質(zhì)具有濃度效應，達到一定閾值后，不再提高。

2.5.3CFS添加時間對菌株AAA015抗菌活性的影響利用吸光度法測定的菌株AAA015生長曲線見圖6。根據(jù)生長曲線，分別在菌株AAA015培養(yǎng)0、12、24、32、40、52 h時加入1 mL CFS，160 r/min培養(yǎng)3 d后采用牛津杯法測定抗菌活性。

從發(fā)酵起始至衰亡期到來之前，添加CFS可以顯著提高AAA015菌株的抗菌活性，但穩(wěn)定期之前添加CFS的抗菌活性顯著高于穩(wěn)定后期添加的抗菌活性（圖7）。

3討論

自然界中的微生物是雜居混生的，微生物之間相互競爭生存資源和空間是刺激微生物產(chǎn)生抗菌物質(zhì)的主要因素[13]。通過共培養(yǎng)提高天然產(chǎn)物產(chǎn)量或者刺激新穎天然產(chǎn)物產(chǎn)生的研究報道日益增多。Rateb等發(fā)現(xiàn)煙曲霉（Aspergillus fumigatus）同布利土放線菌（Streptomyces bullii）共培養(yǎng)后，可以產(chǎn)生7種單培養(yǎng)檢測不到的化合物[8]。黃兵等研究了22株放線菌的單培養(yǎng)及它們與枯草芽孢桿菌的共培養(yǎng)發(fā)酵代謝

產(chǎn)物的差異，發(fā)現(xiàn)放線菌FXJ2.014、FXJ1.296、AS 4.1252等3株菌與枯草芽孢桿菌共培養(yǎng)時產(chǎn)生它們在相同條件下單培養(yǎng)時沒有的物質(zhì)，其中鏈霉菌FXJ2.014單培養(yǎng)時主要產(chǎn)生醌霉素A，共培養(yǎng)時產(chǎn)物中增加了生物活性與醌霉素A有顯著差異的醌霉素結構類似物FXJ2.014-HB[14]。黃艷琴等研究發(fā)現(xiàn)，海綿細菌在抗菌活性方面具有正向和負向的協(xié)同效應[15]。郭鵬飛等通過薄層層析顯色分析、生物自顯影分析證明，共培養(yǎng)能誘導海綿相關微生物產(chǎn)生不同于單培養(yǎng)的代謝產(chǎn)物和抗菌活性物質(zhì)[16]。共培養(yǎng)利用微生物的這種競爭提高抗菌物質(zhì)產(chǎn)量或者產(chǎn)生新穎的抗菌物質(zhì)，用于抗菌性菌株篩選后，可以提高抗菌性菌株，特別是新穎抗菌性菌株或新穎抗菌物質(zhì)的篩選效率。

關于共培養(yǎng)提高菌株抗菌物質(zhì)產(chǎn)量或者刺激產(chǎn)生新穎抗菌物質(zhì)機制的報道較少。主要包括沉默基因簇的激活、群體感應（quorum sensing，簡稱QS）和基因水平轉(zhuǎn)移（horizontal gene transfer，簡稱HGT）。大部分次級代謝產(chǎn)物合成基因簇在常規(guī)試驗條件下處于沉默狀態(tài)。若這些潛在的生物合成途徑被激活，則有可能發(fā)現(xiàn)許多新活性產(chǎn)物[17-18]。Schroeckh等利用基因芯片技術結合透析試驗和電鏡成像技術證明了Aspergillus nidulans同Streptomyces rapamycinicus接觸后激活了2個次級代謝產(chǎn)物基因簇的表達，產(chǎn)生新穎代謝產(chǎn)物[19]。群體感應是細菌生長到一定密度時相互感應，調(diào)控產(chǎn)生獨特的、多樣的群體行為現(xiàn)象。細菌共培養(yǎng)時的種間群體感應調(diào)控可以誘導目標微生物的次級代謝[20]。郭秀春等發(fā)現(xiàn)，外源病原菌S. aureus代謝產(chǎn)物中存在某種信號分子，能誘導NJ6-3-1在不產(chǎn)生抗菌物質(zhì)的生長條件下代謝產(chǎn)生抗菌物質(zhì)[21]。帶化紅球菌（Rhodococcus fascians）和稠李鏈霉菌（Streptomyces padanus）共培養(yǎng)，放線菌的基因水平轉(zhuǎn)移誘導R. fascians產(chǎn)生新穎氨基糖苷類抗菌物質(zhì)[22]。本研究中，菌株B. cereus AS1.1846所分泌的提高放線菌菌株AAA015抗菌活性的物質(zhì)為次級代謝產(chǎn)物，具有濃度效應，推測和群體感應相關。接下來需要進一步對該物質(zhì)進行純化、結構鑒定及誘導效應研究，對推測予以證實。

4結論

本研究報道了1種基于平板共培養(yǎng)的抗菌性海洋放線菌篩選方法，和傳統(tǒng)的單培養(yǎng)篩選方法相比，具有簡單易行和明顯提高抗菌性菌株篩選效率等優(yōu)勢。菌株B. cereus AS1.1846在穩(wěn)定期分泌提高放線菌菌株AAA015抗菌活性的物質(zhì)，在提高菌株AAA015抗菌活性中表現(xiàn)有濃度效應。在海洋放線菌AAA015發(fā)酵起始至衰亡期到來之前，添加含有該物質(zhì)的CFS可以顯著提高抗菌活性。

參考文獻：

[1]寧蕾，鄧業(yè)成，雷玲，等. 5種植物精油對植物病原真菌的抑菌活性[J]. 農(nóng)藥，2012，51（5）：377-379，389.

[2]林玲，喬勇升，顧本康，等. 植物內(nèi)生細菌及其生物防治植物病害的研究進展[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學報，2008，24（6）：969-974.endprint

[3]王光華，Raaijmakers J M. 生防細菌產(chǎn)生的拮抗物質(zhì)及其在生物防治中的作用[J]. 應用生態(tài)學報，2004，15（6）：1100-1104.

[4]Read A F，Day T，Huijben S. The evolution of drug resistance and the curious orthodoxy of aggressive chemotherapy[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，2011，108（2）：10871-10877.

[5]Blunt J W，Copp B R，Keyzers R A，et al. Marine natural products[J]. Natural Product Reports，2015，32（2）：116-211.

[6]Hu Y，Chen J，Hu G，et al. Statistical research on the bioactivity of new marine natural products discovered during the 28 years from 1985 to 2012[J]. Marine Drugs，2015，13（1）：202-221.

[7]Marmann A，Aly A H，Lin W，et al. Co-cultivation—a powerful emerging tool for enhancing the chemical diversity of microorganisms[J]. Marine Drugs，2014，12（2）：1043-1065.

[8]Rateb M E，Hallyburton I，Houssen W E，et al. Induction of diverse secondary metabolites in Aspergillus fumigatus by microbial co-culture[J]. RSC Advances，2013，3（34）：14444-14450.

[9]Zhu F，Chen G，Wu J，et al. Structure revision and cytotoxic activity of marinamide and its methyl ester，novel alkaloids produced by co-cultures of two marine-derived mangrove endophytic fungi[J]. Natural Product Reports，2013，27（21）：1960-1964.

[10]Davies J. How to discover new antibiotics：harvesting the parvome[J]. Current Opinion in Chemical Biology，2011，15（1）：5-10.

[11]沈萍，范秀容，李廣武. 微生物學實驗[M]. 3版. 北京：高等教育出版社，1999：214-215.

[12]Zheng Z，Zeng W，Huang Y，et al. Detection of antitumor and antimicrobial activities in marine organism associated actinomycetes isolated from the Taiwan Strait，China[J]. FEMS Microbiology Letters，2000，188（1）：87-91.

[13]Kos B，Beganovic J，Jurasic L，et al. Coculture-inducible bacteriocin biosynthesis of different probiotic strains by dairy starter culture Lactococcus lactis[J]. Mljekarstvo，2011，61（4）：273-282.

[14]黃兵，劉寧，黃英，等. 放線菌與枯草芽孢桿菌的共培養(yǎng)及其對活性次生代謝產(chǎn)物的影響[J]. 生物工程學報，2009，25（6）：932-940.

[15]黃艷琴，李志勇，蔣群，等. 細薄星芒海綿中活性菌篩選及混合菌協(xié)同效應[J]. 微生物學通報，2005，32（4）：5-10.

[16]郭鵬飛，靳艷，張海濤，等. 共培養(yǎng)海綿微生物誘導抗菌活性物質(zhì)的研究[J]. 微生物學通報，2006，33（1）：33-37.

[17]Ziemert N，Podell S，Penn K，et al. The natural product domain seeker NaPDoS：a phylogeny based bioinformatic tool to classify secondary metabolite gene diversity[J]. PLoS One，2012，7（3）：e34064.

[18]楊康敏，高向東，顧覺奮. 激活沉默基因簇發(fā)掘微生物次級代謝產(chǎn)物的研究進展[J]. 中國醫(yī)藥生物技術，2015，10（1）：77-80.

[19]Schroeckh V，Scherlach K，Nützmann H W，et al. Intimate bacterial-fungal interaction triggers biosynthesis of archetypal polyketides in Aspergillus nidulans[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，2009，106（34）：14558-14563.

[20]Goo E，An J H，Kang Y，et al. Control of bacterial metabolism by quorum sensing[J]. Trends in Microbiology，2015，23（9）：567-576.

[21]郭秀春，鄭立，崔志松，等. 海綿共棲細菌NJ6-3-1基于群體感應調(diào)控的抗菌活性[J]. 微生物學報，2008，48（4）：545-550.

[22]Kurosawa K，Ghiviriga I，Sambandan T G，et al. Rhodostreptomycins，antibiotics biosynthesized following horizontal gene transfer from Streptomyces padanus to Rhodococcus fascians[J]. Journal of the American Oil Chemists Society，2008，130（4）：1126-1127.趙楊茜，楊柳，楊鵬. 喀斯特山區(qū)耕地集約利用態(tài)勢及模式——以貴州省荔波縣為例[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學，2017，45（17）：259-263.endprint