程玉柱++夏運(yùn)喜++秦玉華++馬晶晶++劉翠玲++符俊峰

摘要 采用反相高效液相色譜法測定甜葉菊中甜菊苷和瑞鮑迪苷A含量，研究測定方法的精密度、線性關(guān)系、重復(fù)性、穩(wěn)定性、準(zhǔn)確度。研究結(jié)果顯示，甜菊苷和瑞鮑迪苷A在0.25～2.50 mg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈較好的線性相關(guān)關(guān)系；甜菊苷和瑞鮑迪苷A的加樣回收率分別為97.3%和98.6%，RSD分別為2.4%和2.6%。本測定方法快速靈敏、準(zhǔn)確可靠，可用于甜葉菊中甜菊苷和瑞鮑迪苷A的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞 甜葉菊；甜菊苷；瑞鮑迪苷A；高效液相色譜法

中圖分類號 R284.1；O657.7+2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 1007-5739（2017）19-0250-01

甜葉菊（Stevia rebaudiana）又名甜菊、甜草，是菊科多年生草本野生植物。甜葉菊含有甜葉菊糖苷，其成分有4種：A苷、A3苷、C苷、D-R苷，其中A苷和A3苷為主要成分。甜葉菊糖苷具有低熱量、高甜度、無毒、無副作用等特點，是一種天然甜味劑。此外，甜葉菊糖苷還具有一定的藥理作用，對糖尿病、冠心病、高血壓、小兒齲齒、肥胖癥等病癥有很好療效[1-2]。本研究采用高效液相色譜法測定甜葉菊中甜菊苷和瑞鮑迪苷A含量，為更好地控制甜葉菊質(zhì)量提供了參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 試驗儀器。試驗儀器有SPD-20A高效液相色譜儀（日本島津）、電子天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）、電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）。試驗材料為甜葉菊，產(chǎn)自安徽省阜陽市。試驗試劑有甜菊苷和瑞鮑迪苷A對照品（含量99%）、磷酸（上海蘇懿化學(xué)試劑有限公司）、乙腈（Tedia Company，Inc）。

1.1.2 色譜條件。色譜柱為C18柱（2.7 μm，150 mm×4.6 mm），流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液（30∶70），流速為1.0 mL/min，柱溫為40 ℃，檢測波長為210 nm，進(jìn)樣量為10 μL[3-4]。

1.1.3 對照品溶液的制備。準(zhǔn)確稱取甜菊苷對照品10.58 mg和瑞鮑迪苷A對照品10.84 mg，將其分別置于10 mL容量瓶中，加水使樣品完全溶解并定容至刻度，搖勻。制備甜菊苷對照品溶液和瑞鮑迪苷A對照品溶液的濃度分別為1.047、1.073 mg/mL。

1.1.4 供試品溶液的制備。甜葉菊樣品粉碎后，稱取1.013 6 g于100 mL圓底燒瓶中，加水50 mL，微沸中回流2 h，放置室溫后離心，取上清液用水定容、搖勻，經(jīng)0.45 μL的濾膜過濾后可得甜葉菊溶液。

1.2 研究方法

1.2.1 精密度試驗。分別吸取甜菊苷和瑞鮑迪苷A對照品溶液各10 μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，測定對照品峰面積[5]。

1.2.2 線性關(guān)系考察。準(zhǔn)確稱取甜菊苷對照品126.8 mg置于25 mL容量瓶中，加水使其完全溶解并定容至刻度，搖勻，所得甜菊苷對照品溶液的濃度為5.021 3 mg/mL，作為儲備液。分別準(zhǔn)確量取儲備液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL于10 mL容量瓶中，加水并定容至刻度，搖勻，所得濃度分別為0.251 1、0.502 2、1.004 4、1.506 6、2.008 8、2.511 0 mg/mL。使用同樣的方法準(zhǔn)確稱取瑞鮑迪苷A對照品126.5 mg，制得濃度分別為0.250 5、0.501 0、1.002 0、1.503 0、2.004 0、2.505 0 g/mL。再分別吸取上述溶液10 μL進(jìn)樣，測定峰面積，逐一記錄數(shù)據(jù)。

1.2.3 重復(fù)性試驗。取同一甜葉菊樣品6份，按上述方法制備6份供試品溶液，測定峰面積。

1.2.4 穩(wěn)定性試驗。準(zhǔn)確吸取同一供試品溶液10 μL，分別在0：00、4：00、8：00、12：00、18：00、24：00進(jìn)樣，測定甜葉菊中甜菊苷和瑞鮑迪苷A峰面積。

1.2.5 準(zhǔn)確度試驗。準(zhǔn)確稱取同一甜葉菊樣品6份，每份約0.25 g，加入適量的甜菊苷和瑞鮑迪苷A對照品，加水50 mL，微沸中回流2 h，放置室溫后離心，取上清液用水定容、搖勻，經(jīng)0.45 μL的濾膜過濾后可得甜葉菊溶液。分別進(jìn)樣分析，計算回收率[6]。

2 結(jié)果與分析

由精密度試驗可知甜菊苷和瑞鮑迪苷A對照品峰面積RSD分別為1.1%和1.2%，表明儀器精密度良好。

線性關(guān)系考察試驗中，以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸分析，甜菊苷和瑞鮑迪苷A的進(jìn)樣濃度與峰面積的相關(guān)系數(shù)r分別為0.999 6和0.999 8。表明甜菊苷和瑞鮑迪苷A濃度含量在0.25～2.50 mg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈較好的線性關(guān)系。

由重復(fù)性試驗可知，甜菊苷和瑞鮑迪苷A的峰面積RSD均<2.1%，表明該方法重復(fù)性較好。

由穩(wěn)定性試驗可知，甜葉菊中甜菊苷和瑞鮑迪苷A峰面積RSD分別為1.4%和1.3%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

準(zhǔn)確度試驗結(jié)果如表1所示。甜菊苷的平均回收率為97.3%，RSD為2.4%（n=6）；瑞鮑迪苷A的平均回收率為98.6%，RSD為2.6%（n=6），說明該方法可行。

3 結(jié)論

本試驗所測甜菊苷和瑞鮑迪苷A的最大吸收波長在 210 nm處。試驗發(fā)現(xiàn)用乙腈-水作為流動相時，甜菊苷和瑞鮑迪苷A不能分離。用0.1%磷酸溶液代替純水，乙腈與 0.1%磷酸溶液體積比為30∶70，能使甜菊苷和瑞鮑迪苷A較好分離。本研究采用反向高效液相色譜法測定甜葉菊中甜菊苷和瑞鮑迪苷A的含量，試驗的精密度、線性關(guān)系、重復(fù)性、穩(wěn)定性、準(zhǔn)確度均表現(xiàn)良好，為更加好地控制甜葉菊質(zhì)量提供了參考依據(jù)。

4 參考文獻(xiàn)

[1] 丁寧，郝再彬，陳秀華，等.甜葉菊及其糖苷的研究與發(fā)展[J].上海農(nóng)業(yè)科技，2005（4）：8-10.

[2] 袁藝.甜葉菊及其糖苷的研究與發(fā)展探索[J].食品界，2016（4）：76-77.

[3] 朱吟吟，周凌.高效液相色譜法測定甜葉菊中的3個甜菊醇糖苷的含量[J].藥物分析雜志，2014（1）：184-189.

[4] 吳巖，楊長志，劉永，等.高效液相色譜法測定甜葉菊粗糖苷中甜菊苷的含量[J].食品工業(yè)科技，2007（7）：214-215.

[5] 彭應(yīng)枝，周芳，董界，等.反相高效液相法測定甜葉菊中萊鮑迪苷A和甜菊糖苷的含量[J].中南藥學(xué)，2013（9）：700-702.

[6] 閆莉，何巧麗，周曉英.高效液相色譜法測定新疆地區(qū)甜葉菊中甜菊苷和萊鮑迪苷A的含量[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2016，39（11）：1444-1446.