董鳳

【摘要】目的 探討中藥有效成分對(duì)幽門(mén)螺桿菌多重耐藥菌株的體外抑菌效果。方法 以2015年2月至2016年2月挑選出32株幽門(mén)螺桿菌樣本，分別采用阿莫西林、左氧氟沙星等5種常用的抗生素對(duì)其進(jìn)行測(cè)試，分別鑒別存在多重耐藥性菌株。然后選擇從各類(lèi)中藥中提取的4種有效成分（黃連素、大黃素、五味子以及黃芩苷），利用中藥成分檢測(cè)具有多重耐藥性的幽門(mén)螺桿菌的最低抑菌濃度。結(jié)果 共篩選出5株具有多重耐藥性的幽門(mén)螺桿菌，4種中藥成分當(dāng)中以黃連素的最低抑菌濃度最低，為12.5 mg/ml，其余3種有效成分對(duì)不同菌株的最低抑菌濃度也不同。結(jié)論 黃連素、大黃素等4種中藥成分對(duì)具有多重耐藥性的幽門(mén)螺桿菌具有明顯的體外抑菌作用，其中以黃連素的抑菌效果最好。

【關(guān)鍵詞】幽門(mén)螺桿菌；多重耐藥性；中藥；體外；抑菌

【中圖分類(lèi)號(hào)】R285.5 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】ISSN.2095-6681.2017.15..01

幽門(mén)螺桿菌是革蘭氏陰性菌的一種，人類(lèi)最早發(fā)現(xiàn)這類(lèi)病菌是在一位患有慢性胃炎患者的消化系統(tǒng)中，目前國(guó)際醫(yī)學(xué)界已經(jīng)公認(rèn)該病菌是導(dǎo)致慢性胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍等消化系統(tǒng)疾病的最主要誘因，主要感染位置是胃部黏膜。臨床治療時(shí)多采用抗生素，但隨著這類(lèi)藥物使用頻率的增加，導(dǎo)致幽門(mén)螺桿菌發(fā)生了不同程度的耐藥性，使得抗生素治療效果大幅度下降。本文即是研究中藥成分對(duì)多重耐藥性幽門(mén)螺桿菌的體外抑菌作用，如下為具體研究方法和內(nèi)容。

1 資料及方法

1.1 一般資料

選擇2015年2月至2016年2月我院患者49例，共分離幽門(mén)螺桿菌菌株32株。其中男20例，女12例，年齡中最大者69歲，最小者21歲，平均年齡為（32.87±3.51）歲。

1.2 方法

1.2.1 菌株分離方法

根據(jù)患者消化道慢性炎癥病灶的具體位置選擇胃鏡或腸鏡進(jìn)行活檢樣本提取，將樣本研磨后接種于兔血瓊脂培養(yǎng)基上，在恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)孵化，溫度設(shè)定為37℃，同時(shí)培養(yǎng)箱內(nèi)氣體濃度中氧氣為50 ml/L、二氧化碳為100 ml/L，相對(duì)濕度應(yīng)高于90%，連續(xù)培養(yǎng)5 d左右進(jìn)行觀察[1]。通過(guò)生化反應(yīng)和革蘭氏染色確定細(xì)胞形態(tài)，并挑選出幽門(mén)螺桿菌菌株。

1.2.2 多重耐藥性菌株篩選方法

采用瓊脂二倍稀釋方法進(jìn)行檢測(cè)，將經(jīng)過(guò)培養(yǎng)后得到的幽門(mén)螺桿菌進(jìn)行標(biāo)號(hào)，并使用環(huán)形接種棒刮取部分菌株，在刮取前應(yīng)使用顯微鏡對(duì)菌株是否處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期進(jìn)行確定，包括測(cè)量的樣本正處于生長(zhǎng)旺盛階段。將樣本接種在無(wú)菌生理鹽水當(dāng)中，并以比濁管作為參照調(diào)整到0.5麥?zhǔn)宵c(diǎn)，樣本濃度則調(diào)整到108 mL。使用移液器提取劑量約2 μl的懸濁菌液，分別將其接種在含有左氧氟沙星、阿莫西林、克拉霉素、四環(huán)素以及甲硝唑的瓊脂培養(yǎng)基表面，在與培養(yǎng)幽門(mén)螺桿菌條件完全相同的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行孵化，連續(xù)培養(yǎng)3 d后對(duì)結(jié)果進(jìn)行觀察。如菌株能夠在含有3種及以上抗生素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，則認(rèn)為其具有多重耐藥性，其中培養(yǎng)基抗生素含量：左氧氟沙星超過(guò)8 μg/ml、阿莫西林超過(guò)4 μg/ml、克拉霉素超過(guò)1 μg/ml、四環(huán)素超過(guò)

4 μg/ml、甲硝唑超過(guò)8 μg/ml[2]。

1.2.3 中藥成分的體外抑菌作用檢測(cè)

同樣采用二倍稀釋法對(duì)4種中藥成分對(duì)多重耐藥性幽門(mén)螺桿菌菌株的體外最低抑菌值進(jìn)行檢測(cè)，分別是黃連素、大黃素、五味子以及黃芩苷。選擇經(jīng)滅菌處理的試管12支，并在試管內(nèi)加入劑量為2 ml的腦心浸液培養(yǎng)基，標(biāo)號(hào)后在1號(hào)管中加入一種中藥有效成分約2 ml，搖勻后使1號(hào)管內(nèi)藥物濃度為200 mg/ml，使用倍比稀釋方法，為2號(hào)到10號(hào)管內(nèi)注入同樣的藥物有效成分。隨后選擇劑量為0.1 ml的多重耐藥性幽門(mén)螺桿菌菌液，第11號(hào)管內(nèi)單純加入菌液，第12號(hào)管內(nèi)為空白對(duì)照。將菌液與藥液搖勻后同時(shí)放入恒溫培養(yǎng)環(huán)境當(dāng)中，采用震蕩培養(yǎng)的方式連續(xù)孵化3 d，每種中藥有效成分的測(cè)試均進(jìn)行3次取平均值。觀察抑菌作用時(shí)，提取培養(yǎng)液0.5 ml進(jìn)行革蘭氏染色確認(rèn)是否為幽門(mén)螺桿菌，并將菌株轉(zhuǎn)移至瓊脂培養(yǎng)基上，再連續(xù)培養(yǎng)3 d后觀察菌落生長(zhǎng)情況，并記錄最低抑菌濃度數(shù)據(jù)[3]。

2 結(jié) 果

共篩選出5株具有多重耐藥性的幽門(mén)螺桿菌，4種中藥成分當(dāng)中以黃連素的最低抑菌濃度最低，為12.5 mg/ml，其余3種有效成分對(duì)不同菌株的最低抑菌濃度也不同。

3 討 論

中藥當(dāng)中也有很多藥物對(duì)幽門(mén)螺桿菌具有較強(qiáng)的抑制作用，而這類(lèi)藥物大多屬于清熱解毒性，其中主要包括黃連、黃芩、大黃、板藍(lán)根、五味子、烏梅等，其古今對(duì)幽門(mén)螺桿菌具有較強(qiáng)的抑制作用[4]。根據(jù)本次研究中可以看出，4種中藥成分對(duì)篩選出的5種多重耐藥菌株均具有較強(qiáng)的體外抑制作用，其中以黃連素的最低抑菌濃度最低。黃連素又被稱(chēng)為鹽酸小檗堿，是目前臨床較為常用的中成藥物，黃連當(dāng)中含有大量的黃連素，其可以有效地抑制幽門(mén)螺桿菌細(xì)胞內(nèi)對(duì)葡萄糖的氧化反應(yīng)，從而使病菌無(wú)法得到充足的營(yíng)養(yǎng)而凋亡，而其它3種中藥成分主要是以抑制病菌核算類(lèi)物質(zhì)的合成，從而使其無(wú)法合成必要蛋白質(zhì)，起到殺滅病菌的目的。

參考文獻(xiàn)

[1] 黃衍強(qiáng)，黃干榮，李曉華，等.中藥提取物對(duì)耐藥幽門(mén)螺桿菌生物膜形成的影響[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2013，32（11）：1407-1409.

[2] 黃干榮，李曉華，黃衍強(qiáng)，等.大黃素等提取物對(duì)耐藥性大腸桿菌生物膜形成的影響[J].中成藥，2013，35（12）：2602-2605.

[3] 余曉丹.黃芩苷與野黃芩苷抑制幽門(mén)螺桿菌脲酶作用及其機(jī)理研究[D].廣州中醫(yī)藥大學(xué)，2015.

本文編輯：吳宏艷endprint