寧毅 翟利琴 孫睿

1. 030012 太原, 山西醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)系； 2. 山西省人民醫(yī)院病理科, 3. 口腔頜面外科

短篇報告

RGS16蛋白在口腔鱗狀細(xì)胞癌中表達意義的初探

寧毅1翟利琴2孫睿3

1. 030012 太原, 山西醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)系； 2. 山西省人民醫(yī)院病理科, 3. 口腔頜面外科

采用免疫組織化學(xué)染色法檢測RGS16蛋白在84 例口腔鱗狀細(xì)胞癌(OSCC)患者癌組織中的表達情況，分析其與口腔鱗狀細(xì)胞癌臨床病理特征之間的關(guān)系。結(jié)果表明：78 例RGS16蛋白表達陽性，其表達強度與口腔鱗狀細(xì)胞癌的臨床分期有關(guān)(P<0.05)，與患者的年齡、性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及分化程度無明顯相關(guān)性(P>0.05)。

RGS16蛋白； 口腔鱗狀細(xì)胞癌； 免疫組織化學(xué)染色

口腔鱗狀細(xì)胞癌(OSCC)是頭頸部惡性腫瘤中比較常見的惡性腫瘤之一。全世界每年約有50 萬的新發(fā)病例，并且其發(fā)病率呈現(xiàn)逐年升高的趨勢。而OSCC的發(fā)病是一個多因素、復(fù)雜的過程，包括：不良牙體刺激等物理因素，酒精、吸煙等化學(xué)刺激[1]，信號傳導(dǎo)通路的激活，最終導(dǎo)致細(xì)胞增殖和存活機制的失調(diào)等。近年來，隨著腫瘤細(xì)胞分子生物學(xué)研究的不斷進展，人們在尋找更有效的評估口腔鱗癌指標(biāo)，指導(dǎo)臨床診治。

G蛋白信號通路調(diào)節(jié)蛋白(regulator of G protein signaling,RGS)是一類負(fù)性調(diào)節(jié)G蛋白信號傳導(dǎo)通路的蛋白分子，其基因家族包括30 多種同源蛋白。RGS16蛋白是RGS家族成員之一，最初發(fā)現(xiàn)是在人類T淋巴細(xì)胞內(nèi)作為白介素-2激活的基因[2]。研究發(fā)現(xiàn)，該基因異常的表達與神經(jīng)膠質(zhì)瘤、乳腺癌和膀胱癌的發(fā)病過程有關(guān)系。但RGS16蛋白表達在OSCC中研究極少，因此，本實驗將采用免疫組織化學(xué)染色的方法檢測RGS16蛋白在OSCC中的表達情況，并探討RGS16蛋白與OSCC臨床病理特征之間的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集2012～2015 年山西醫(yī)科大學(xué)附屬人民醫(yī)院84 例病理診斷為口腔鱗狀細(xì)胞癌的標(biāo)本，年齡32～83 歲。標(biāo)本于4%甲醛液中固定，石蠟包埋。對腫瘤標(biāo)本的使用研究獲得山西醫(yī)科大學(xué)附屬人民醫(yī)院倫理委員會的批準(zhǔn)和患者的知情同意。

1.2 主要試劑

鼠源單克隆抗體RGS16蛋白、Anti-RGS16 antibody(4E5)(ab119424,Abcam公司)。鼠超敏二步法免疫組化檢測試劑(二抗)(北京中杉金橋生物有限公司)。

1.3 實驗方法

1.3.1 免疫組化染色 石蠟標(biāo)本切片(厚度4 μm)， 70 ℃烤片2 h；脫蠟、梯度乙醇水化；高壓加熱法修復(fù)抗原；孵一抗 RGS16蛋白(稀釋度1∶150)，4 ℃過夜。孵二抗水浴箱37 ℃，20 min。PBS洗去后DAB顯色約1 min，蘇木素復(fù)染約30 s，無水乙醇脫水，封片。以PBS 代替一抗作為陰性對照。

1.3.2 免疫組化結(jié)果分析 由2 名病理科醫(yī)師在雙盲情況下對每張切片進行染色評價。按著色強度評分：無著色為0 分，輕度著色(淺黃色)為1 分，中度著色(棕黃色)為2 分，強染色(棕褐色)為3 分。按著色密度評分：陽性細(xì)胞百分率：≤5%為0 分，6%～25%為1 分，26%～50%為2 分，≥51%為3 分。將2 項相乘得到總評分：0～1 分為陰性(-)，2～3 分為弱陽性(+)，4～6 分為中等陽性(++)，6 分以上為強陽性(+++)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 16.0 統(tǒng)計軟件分析，運用Spearman秩相關(guān)或χ2檢驗(Fisher確切概率法)，P<0.05 認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

染色結(jié)果顯示：RGS16蛋白陽性表達于78 例OSCC中, 主要定位于細(xì)胞質(zhì)(圖 1)。統(tǒng)計結(jié)果顯示：RGS16蛋白的表達與OSCC的臨床分期有關(guān)，與患者的年齡、性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及分化程度無明顯相關(guān)性(表 1)。

表 1 RGS16蛋白的表達與臨床病理特征的關(guān)系

注： ① RGS16蛋白在晚期OSCC的表達高于早期的口腔鱗狀細(xì)胞癌,P<0.05

圖 1 RGS16在OSCC中的表達(×400)

3 討 論

RGS蛋白是一種鳥苷酸酶激活蛋白，迄今已發(fā)現(xiàn)30 余種6 個亞家族，能負(fù)性調(diào)控G蛋白信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，如：細(xì)胞分化、細(xì)胞增殖和胚胎發(fā)育等。在RGS 蛋白6 個亞家族中，RGS16蛋白是B/R4 亞家族成員，分子大小為202 個多肽鏈氨基酸殘基數(shù)，在RSG 蛋白質(zhì)家族中是分子較小和簡單的一個成員。1998 年Snow等[3]在發(fā)現(xiàn)RGS16蛋白在人視網(wǎng)膜高表達后, 陸續(xù)有報道表明它在人腦、心臟、大腸、胎盤、睪丸等組織中表達。通過研究，RGS16蛋白的作用也是多方面的,如參與了炎癥過敏反應(yīng)和淋巴細(xì)胞的激活[4], 抑制了胰腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和入侵[5], p38通路活化和巨核細(xì)胞中趨化因子受體4的負(fù)向調(diào)節(jié)[6]等。對RGS16蛋白結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn)，基因突變將會影響最終的基因產(chǎn)物，其含量的變化與疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，如：RGS16蛋白轉(zhuǎn)錄上調(diào)可以抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶的磷酸化作用[7]，對有絲分裂的信號產(chǎn)生負(fù)性調(diào)節(jié)反應(yīng)；RGS16蛋白的下調(diào)或丟失將會造成部分啟動子的甲基化、染色體的斷裂[8]、乳腺癌細(xì)胞的增殖擴散和蛋白激酶的磷酸化[9]。本次研究主要運用免疫組化染色分析RGS16蛋白在OSCC中的表達，結(jié)果表明: RGS16蛋白的表達與OSCC的臨床分期有相關(guān)性。在臨床分期越晚，RGS16蛋白表達越強。

綜上所述，RGS16蛋白作為G 蛋白信號調(diào)節(jié)家族成員，可能參與了OSCC的發(fā)生發(fā)展過程，并對OSCC患者預(yù)后產(chǎn)生一定的影響，但從石蠟切片可以看出RGS16蛋白在癌旁正常口腔黏膜上皮組織中同樣表達，只是表達強弱有差異，所以RGS16蛋白不能作為一種特異性診斷指標(biāo)，而RGS16蛋白在OSCC進程中發(fā)揮的具體作用還不明確，有待進一步的研究來闡明。

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SignificanceofRGS16proteinexpressioninoralsquamouscellcarcinoma

NINGYi1,ZHAILiqin2,SUNRui3.

1. 030012Taiyuan,Collegeofstomatology,ShanxiMedicalUniversity,China; 2.DepartmenofPathology, 3.DepartmentofOralandMaxillofacialSurgery,ShanxiProvincialPeople'sHospital,Taiyuan

RGS16 protein expression in 84 cases of oral squamous cell carcinoma(OSCC) was examined by immunohistochemical staining method. RGS16 protein expression was positive in 78 out of the 84 cases. The expression was associated with the clinical stage of OSCC(P<0.05), but not with patient's age, gender, degree of differentiation and lymph node metastasis(P>0.05).

RGS16protein；Oralsquamouscellcarcinoma；Immunohistochemicalstaining

山西省自然科學(xué)基金(編號： 2011011037)

(收稿： 2017-01-18 修回： 2017-03-08)