李小俠 ,張 華△ ,奚逢瑜 ,駱志義 ,張利俠

1.陜西省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科(西安 710068),2.陜西省納米生物醫(yī)學(xué)檢測(cè)工程研究中心(西安 710077)

·臨床檢驗(yàn)·

磁定量免疫層析法降鈣素原試劑盒性能評(píng)估研究

李小俠1,張 華1△,奚逢瑜1,駱志義2,張利俠1

1.陜西省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科(西安 710068),2.陜西省納米生物醫(yī)學(xué)檢測(cè)工程研究中心(西安 710077)

目的： 評(píng)價(jià)磁定量免疫層析法降鈣素原(PCT)檢測(cè)試劑盒的臨床性能。方法： 以梅里埃VIDAS PCT試劑盒為參比試劑，對(duì)PCT檢測(cè)試劑盒進(jìn)行精密度、線性范圍、方法學(xué)一致性的比對(duì)研究。結(jié)果：PCT檢測(cè)試劑盒批內(nèi)低值和高值的變異系數(shù)(CV)分別為6.67%(0.49ng/ml)和4.39%(4.89ng/ml)，總精密度為7.26%(0.48ng/ml)和4.74%(4.91ng/ml)，滿足精密度檢測(cè)要求。試劑盒線性范圍具有良好的線性梯度關(guān)系(r2=0.9989)。方法學(xué)比對(duì)試驗(yàn)結(jié)果顯示，PCT試劑盒檢測(cè)結(jié)果與VIDAS檢測(cè)結(jié)果具有良好的相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)r2=0.9668，臨床參考值0.5ng/ml和2ng/ml的檢測(cè)結(jié)果與VIDAS的符合率為94.5%和93.6%，表明兩者具有很好的一致性。結(jié)論：PCT檢測(cè)試劑盒與VIDAS試劑盒在臨床應(yīng)用上具有等效性，可用于臨床診斷及療效監(jiān)控。

降鈣素原(Procalcitonin,PCT)是一種由116個(gè)氨基酸組成，分子量為127000的糖蛋白，主要由甲狀腺濾泡細(xì)胞分泌。正常生理?xiàng)l件下，人體內(nèi)PCT的水平很低，一般小于0.1ng/ml[1]。當(dāng)發(fā)生細(xì)菌、真菌感染或全身炎癥反應(yīng)時(shí)，PCT在血液中的水平升高。因此，PCT被認(rèn)為是一個(gè)理想炎癥診斷標(biāo)志物[2]。目前，定量檢測(cè)PCT的方法主要有電化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)熒光分析法[3]，但是都需要昂貴的試劑和設(shè)備，不適合的急診檢測(cè)和現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。本研究對(duì)西安金磁PCT磁定量免疫層析試劑盒進(jìn)行性能評(píng)估，以了解該試劑盒是否能滿足臨床檢測(cè)的需求。

材料與方法

1 儀器與試劑 VIDAS酶聯(lián)免疫熒光分析儀，VIDAS降鈣素原定量測(cè)定試劑盒(批號(hào)XX)，梅里埃；磁定量免疫分析儀(型號(hào)GM-MICTv2)，降鈣素原檢測(cè)試劑盒(金磁微粒免疫層析法)(批號(hào)：161880和171821)，由西安金磁納米生物技術(shù)有限公司提供。

2 精密度檢測(cè) 選擇低值和高值兩個(gè)水平的質(zhì)控血清，低值樣本濃度在臨界值(0.5ng/ml)附近，高值質(zhì)控樣本濃度為病理值，對(duì)兩個(gè)批次的金磁生物PCT試劑盒進(jìn)行測(cè)試。對(duì)每個(gè)濃度樣本每天用兩個(gè)批次的金磁生物PCT試劑盒進(jìn)行測(cè)試，每批分別檢測(cè)低值和高值質(zhì)控血清，每個(gè)水平重復(fù)2次，連續(xù)檢測(cè)20d，收集數(shù)據(jù)，分別計(jì)算批內(nèi)精密度和總精密度，以變異系數(shù)(CV，%)表示[4]。

3 線性范圍分析 根據(jù)CLSEP6A文件的要求，收集高值血清樣本和低值血清樣本，高值選擇線性范圍上限血清樣本，要求無(wú)溶血、脂血和黃疸等干擾物質(zhì)；低值選擇為線性范圍下限的血清樣本，同樣要求無(wú)溶血、脂血和黃疸等干擾物質(zhì)。然后將高值樣本和低值樣本以10∶0、9∶1、8∶2、7∶3……3∶7、2∶8、1∶9、0∶10的比例分別混合制備形成11個(gè)濃度水平的PCT檢測(cè)樣本。對(duì)金磁生物PCT試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，每份樣本重復(fù)檢測(cè)3次，計(jì)算平均值并進(jìn)行回歸方程的擬合[5]。

4 方法學(xué)比對(duì)試驗(yàn) 收集2016年10月109例臨床血清樣本，樣本均來(lái)源于陜西省人民醫(yī)院門診和住院患者中疑似細(xì)菌感染的患者，無(wú)溶血、脂血和黃疸等樣本。樣本同時(shí)使用金磁生物PCT試劑盒和VIDAS PCT檢測(cè)試劑進(jìn)行檢測(cè)，收集數(shù)據(jù)，進(jìn)行相關(guān)性分析。選擇臨床意義參考值0.5ng/ml和2ng/ml為閾值，對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行符合性分析。

結(jié) 果

1 精密度檢測(cè)結(jié)果 金磁生物PCT試劑盒161880批次檢測(cè)的低值和高值質(zhì)控血清精密度檢測(cè)結(jié)果均值(CV)分別為0.49ng/ml和4.89ng/ml，變異系數(shù)(CV)分別為6.67%和4.39%。 171821批次低值和高值質(zhì)控血清檢測(cè)結(jié)果均值為0.48ng/ml和4.92ng/ml，變異系數(shù)分別為7.85%和5.17%。低值和高值質(zhì)控血清總精密度均值為分別為0.48ng/ml和4.91ng/ml，變異系數(shù)為7.26%和4.74%。

2 線性范圍結(jié)果 以濃度為橫坐標(biāo)，以檢測(cè)信號(hào)值的平均值為縱坐標(biāo)，繪制濃度與檢測(cè)信號(hào)的散點(diǎn)圖并進(jìn)行線性擬合，得到擬合方程為Y=87.3612X-0.3687，相關(guān)系數(shù)r2=0.9989，符合臨床上的線性范圍。

3 對(duì)比結(jié)果分析和符合率研究 以梅里埃VIDAS PCT試劑盒檢測(cè)結(jié)果為X軸，金磁生物PCT試劑盒檢測(cè)結(jié)果為Y軸，做相關(guān)性散點(diǎn)圖分析如圖1。線性回歸方程為Y=0.9593X+0.0291，相關(guān)系數(shù)r2=0.9668，兩者相關(guān)性良好。

圖1 梅里埃 VIDSA和金磁生物PCT試劑相關(guān)性分析圖

109例臨床樣本以0.5ng/ml為臨界值進(jìn)行定性統(tǒng)計(jì)，結(jié)果顯示金磁生物PCT試劑盒與VIDAS試劑盒的總體符合率為94.5%，見(jiàn)表1；以2.0ng/ml位臨界值進(jìn)行定性統(tǒng)計(jì)，結(jié)果顯示金磁生物PCT試劑盒與VIDAS試劑盒的總體符合率為93.6%，見(jiàn)表2。

表1 以0.5ng/ml為臨界值對(duì)金磁生物PCT試劑盒檢測(cè)結(jié)果的定性分析結(jié)果(例)

表2 以2.0ng/ml為臨界值對(duì)金磁生物PCT試劑盒檢測(cè)結(jié)果的定性分析結(jié)果(例)

討 論

近年來(lái)，PCT作為一個(gè)敏感性較高的炎癥指標(biāo)，已經(jīng)成為與細(xì)菌性感染引起的炎癥反應(yīng)特異性的檢測(cè)指標(biāo)，尤其是用于鑒別細(xì)菌性感染所致的全身炎癥反應(yīng)綜合征(Systemic inflammatory response syndrome，SIRS)以及膿毒癥。最新的《降鈣素原(PCT)急診臨床應(yīng)用的專家共識(shí)》指出降鈣素原可被推薦用于細(xì)菌感染性膿毒癥的診斷、分層、治療監(jiān)測(cè)和預(yù)后評(píng)估[5]。

目前，國(guó)內(nèi)市場(chǎng)用于PCT檢測(cè)的方法主要為化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)熒光法，該類方法具有很好的靈敏度和寬的檢測(cè)范圍，但都需要昂貴的檢測(cè)設(shè)備和試劑，對(duì)于快速檢測(cè)和床旁檢測(cè)的使用受限。金磁生物的PCT檢測(cè)試劑盒采用雙抗體夾心法、免疫層析法和磁定量檢測(cè)技術(shù)相結(jié)合，可以定量檢測(cè)人血清或血漿中的PCT含量[6]。本研究對(duì)該試劑盒的性能進(jìn)行評(píng)估，結(jié)果表明在檢測(cè)范圍內(nèi)具有良好的精密度，在試劑盒標(biāo)識(shí)的檢測(cè)范圍內(nèi)具有很好的線性梯度關(guān)系，可以滿足臨床檢測(cè)需求。特別是在檢測(cè)的過(guò)程中引入納米微顆粒磁定量技術(shù)，能更好的保證檢測(cè)過(guò)程的穩(wěn)定性，有較好的應(yīng)用前景。為驗(yàn)證該套檢測(cè)體系的檢測(cè)效能，以目前多家醫(yī)院檢驗(yàn)科常規(guī)采用的梅里埃VIDAS PCT檢測(cè)系統(tǒng)為參比系統(tǒng)，收集109例臨床血清樣本進(jìn)行兩種方法學(xué)比對(duì)和符合性分析，結(jié)果表明，金磁生物的PCT試劑盒與VIDAS的試劑盒具有良好的相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)r2=0.9668。血中PCT含量低于0.5ng/ml通?？膳懦摱狙Y；而介于0.5ng/ml至2ng/ml之間時(shí)，被認(rèn)為可能是膿毒血癥；而高于2ng/ml則認(rèn)為是膿毒血癥或是SIRS。在參考值為0.5ng/ml和2ng/ml時(shí)，金磁生物的PCT試劑盒與VIDAS的試劑盒符合率分別為94.5%和93.6%，研究顯示這兩種方法具有較好的一致性。金磁生物的PCT檢測(cè)方法使用免疫層析結(jié)合納米磁微粒技術(shù)，而VIDAS的PCT檢測(cè)方法使用熒光免疫方法，兩種方法在檢測(cè)結(jié)果的差異尚需進(jìn)一步研究。

綜上所述，金磁生物的PCT試劑盒具有操作簡(jiǎn)便，耗時(shí)短，不需要昂貴的儀器設(shè)備，便于進(jìn)行急診檢驗(yàn)和床旁檢驗(yàn)。同時(shí)，該試劑盒與VIDAS試劑盒的檢測(cè)結(jié)果具有較高的符合率，分析性能基本滿足臨床檢測(cè)要求。

[1] Philipp S,Werner A，Beat M. Procalcitonin for diagnosis of infection and guide to antibiotic decisions: past,present and future[J]. BMC Medicine,2011,9(107):1-9.

[2] Alexander K,Matthias B,Mirjam C,etal. Prognostic value of procalcitonin in respiratory tract infections across clinical settings[J].Critical Care,2015,19(74):1-11.

[3] 劉秋平,劉 穎,周 偉,等. PCT及T淋巴細(xì)胞亞群在老年衛(wèi)生保健相關(guān)性肺炎并發(fā)呼吸衰竭中的診斷價(jià)值[J]. 陜西醫(yī)學(xué)雜志,2015,44(5):550-551.

[4] National Committee for Clinical Laboratory Standard. Evaluation of precision performance of quantitative measurement methods; Approved Guidelines-second edition[S]. Wayne: PA,CLSI/NCCLS document EP05-A2,2003.

[5] 降鈣素原急診臨床應(yīng)用專家共識(shí)組. 降鈣素原(PCT)急診臨床應(yīng)用的專家共識(shí)[J]. 中華急診醫(yī)學(xué)雜志,2012,9(21): 944-948.

[6] 白翠林. hsCRP、PCT檢測(cè)在老年慢性阻塞性肺疾病急性加重期的臨床應(yīng)用[J]. 陜西醫(yī)學(xué)雜志,2015,44(7):925-926.

△通訊作者

@降鈣素原 @磁定量檢測(cè) @免疫層分析

R446

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2017.11.044

(收稿：2017-04-12)