劉少娟,劉會(huì)平,*,趙范,孫娜新,李委紅
(1.天津科技大學(xué)食品工程與生物技術(shù)學(xué)院,天津300457;2.保齡寶生物股份有限公司,山東德州251200)
響應(yīng)面法優(yōu)化超聲波輔助提取燕麥麩皮多糖工藝的研究
劉少娟1,劉會(huì)平1,*,趙范2,孫娜新1,李委紅1
(1.天津科技大學(xué)食品工程與生物技術(shù)學(xué)院,天津300457;2.保齡寶生物股份有限公司,山東德州251200)
采用響應(yīng)面法對(duì)燕麥麩皮多糖超聲波輔助提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化研究。在4個(gè)單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上,選取超聲溫度、pH值、超聲時(shí)間和超聲波功率作為考察因素,以燕麥麩皮多糖提取得率作為評(píng)價(jià)指標(biāo),利用響應(yīng)面法考察4個(gè)不同因素及其交互作用對(duì)燕麥麩皮多糖提取得率的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明,燕麥麩皮多糖的最佳提取工藝條件為:超聲溫度為66℃,pH值為9.2,超聲時(shí)間為21 min和超聲波功率為401 W。在此工藝參數(shù)的條件下提取了3批燕麥麩皮,多糖的平均提取得率為(7.48±2.6)%(n=3)。
燕麥麩皮多糖;超聲波輔助提取;響應(yīng)面法
燕麥(Avena sativaL.)作為禾木科燕麥屬一年生草本植物,是一種重要的糧食作物,被公認(rèn)為人類的“健康食品”。燕麥的副產(chǎn)品是燕麥麩皮,經(jīng)常在現(xiàn)實(shí)生活中當(dāng)作動(dòng)物飼料或者直接被丟棄,使得資源不能被充分利用。β-葡聚糖是燕麥麩皮多糖的主要組成成分,具有多種生理調(diào)節(jié)作用。β-葡聚糖具有降膽固醇[1-2]、降血糖[3]、降血脂[4-5]、抗腫瘤[6-7]和免疫調(diào)節(jié)作用[8]等多種活性。超聲波輔助提取作為一種進(jìn)步的提取方式,可以產(chǎn)生機(jī)械破碎、空化作用和熱學(xué)機(jī)制的機(jī)理[9]。一方面,超聲波輔助提取法利用超聲波的空化效應(yīng)形成強(qiáng)大沖擊波或高速射流,對(duì)提取的植物細(xì)胞組織產(chǎn)生物理剪切力作用,破碎了植物細(xì)胞壁,使細(xì)胞內(nèi)部可溶性成分流出來(lái),因此提高了成分的提取效率;另一方面,超聲波輻射出的多重效應(yīng)包括熱效應(yīng)、凝結(jié)作用、生物效應(yīng)和化學(xué)作用等,能夠加快有效成分的擴(kuò)散速度,增加溶劑和活性成分的接觸,提高活性成分的提取率[10]。超聲提取是利用高頻率的聲波破碎植物細(xì)胞壁使可溶性物質(zhì)流出細(xì)胞外,從而更好地溶解在溶劑中。與傳統(tǒng)提取工藝相比較,超聲波輔助提取工藝擁有較高的提取率、便利的操作等多個(gè)優(yōu)勢(shì),已經(jīng)普遍應(yīng)用到多種植物提取的多糖工藝中[11-12]。本文以燕麥麩皮為試驗(yàn)材料,以燕麥麩皮多糖提取得率作為評(píng)價(jià)指標(biāo),選取超聲溫度、pH值、超聲時(shí)間和超聲波功率這四個(gè)單因素試驗(yàn),綜合利用響應(yīng)面法對(duì)燕麥麩皮多糖進(jìn)行超聲波輔助優(yōu)化提取的工藝參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化,旨在找出提取燕麥麩皮多糖的最佳提取工藝參數(shù),從而為燕麥麩皮β-葡聚糖資源的綜合使用及產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)提供現(xiàn)實(shí)參考意義。
燕麥麩皮:石家莊凌峰農(nóng)副產(chǎn)品開(kāi)發(fā)有限公司;無(wú)水葡萄糖(CAS:50-99-7):上海阿拉丁生化科技股份有限公司;苯酚(分析純):天津市永大化學(xué)試劑有限公司;濃硫酸(分析純):天津市化學(xué)試劑一廠。
離心機(jī)(TDL-5-A):上海安亭科學(xué)儀器廠;超聲細(xì)胞破碎機(jī)(JY92-Ⅱ):寧波新芝生物科技股份有限公司;搖擺式高速中藥粉碎機(jī)(LK-1000A):浙江省溫嶺市創(chuàng)立藥材器械廠;電子分析天平(MS204S):梅特勤—托利多儀器(上海)有限公司;電熱恒溫水浴鍋(HWS26型):上海一恒科學(xué)儀器有限公司;紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(10S UV-Vis):美國(guó)Thermo賽默飛世爾科技(中國(guó))有限公司。
燕麥麩皮→干燥→粉碎→過(guò)50目篩→乙醇回流滅酶→抽濾→烘干→熱水浸提→超聲波輔助提取→離心獲得上清液→去蛋白→去淀粉→濃縮→醇沉→離心→凍干→燕麥麩皮多糖粗品
無(wú)水葡萄糖放置在105℃烘箱中直至烘干,準(zhǔn)確稱取10.0 mg無(wú)水葡萄糖,用蒸餾水在100 mL容量瓶中定容,分別吸取 0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL 葡萄糖溶液,再用蒸餾水全部補(bǔ)至1.0 mL。依次向各個(gè)試管中加入5%苯酚溶液1 mL及濃硫酸溶液5 mL,在室溫下條件下靜止放置30 min于490 nm可見(jiàn)光波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。用1 mL蒸餾水作為空白對(duì)照試驗(yàn),操作和以上所述一樣,測(cè)定其對(duì)應(yīng)的吸光度值。橫坐標(biāo)表示葡萄糖含量,縱坐標(biāo)表示對(duì)應(yīng)的吸光度值,繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線,所得回歸方程為y=1.657 8x+0.031 8(R2=0.996)。
[13]采用硫酸-苯酚法測(cè)定燕麥麩皮中多糖提取液的多糖含量。以下為操作步驟:準(zhǔn)確量取燕麥麩皮皮多糖提取液1 mL于10 mL試管中,再加入5%苯酚溶液1 mL和濃硫酸溶液5 mL,混合直至均勻,在室溫下條件下冷卻放置30 min于490 nm可見(jiàn)光波長(zhǎng)處測(cè)定待測(cè)溶液的吸光度[14]。燕麥麩皮多糖提取得率公式如下:
燕麥麩批多糖提取率/%=(CV×稀釋倍數(shù))/M×100
式中:C為檢測(cè)到的吸光度相對(duì)應(yīng)的濃度,(mg/mL);V為提取溶液的體積,mL;M為燕麥麩皮質(zhì)量,mg。
在單因素試驗(yàn)中,選擇超聲溫度、pH值、超聲時(shí)間和超聲波功率為自變量,考察提取工藝中的各個(gè)因素對(duì)燕麥麩皮多糖提取得率所產(chǎn)生的影響。其中,超聲溫度選取 40、50、60、70、80 ℃ 5 個(gè)水平,pH 值選取6.0、7.0、8.0、9.0、10.0 5 個(gè)水平,超聲時(shí)間選取 5、10、15、20、25 min 5 個(gè)水平,超聲波功率選取 300、400、500、600、700 W 5 個(gè)水平。
綜合考慮各個(gè)單因素試驗(yàn)的結(jié)果,試驗(yàn)選取超聲波溫度(A,℃)、pH 值(B)、超聲時(shí)間(C,min)和超聲波功率(D,W)作為自變量,以燕麥麩皮多糖提取得率(Y,%)為響應(yīng)值,對(duì)燕麥麩皮多糖超聲波輔助提取工藝采用Box-Benhnken響應(yīng)面分析法進(jìn)行優(yōu)化研究。試驗(yàn)設(shè)計(jì)因素水平表見(jiàn)表1。
表1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)水平表Table 1 Variables in the Box-Benhnken design
在pH值為8.0,超聲時(shí)間為20 min,超聲波功率為300 W的條件下,超聲溫度依次按照40、50、60、70、80℃5個(gè)水平對(duì)燕麥麩皮多糖進(jìn)行提取,利用上述公式計(jì)算燕麥麩皮多糖的提取得率,結(jié)果如圖1所示。
試驗(yàn)結(jié)果表明,燕麥麩皮多糖的提取得率隨著超聲溫度的增大呈現(xiàn)先增加后降低的趨勢(shì),在超聲溫度為70℃時(shí),燕麥麩皮多糖提取得率出現(xiàn)峰值;當(dāng)小于最適溫度時(shí),隨著超聲溫度的上升,多糖提取得率增大,因?yàn)殡S著溫度的不斷升高,加快了多糖分子的運(yùn)動(dòng)速率,促進(jìn)燕麥麩皮多糖分子的溶解析出;當(dāng)溫度超過(guò)一定溫度界線時(shí),燕麥麩皮多糖的提取得率將有所降低,這是因?yàn)闇囟瘸^(guò)最適溫度時(shí),燕麥麩皮中一些多糖分子的分解,導(dǎo)致燕麥麩皮多糖提取得率有所下降。
圖1 超聲溫度對(duì)燕麥麩皮多糖提取率的影響Fig.1 Effects of ultrasonic temperature on extraction rate of Oat bran polysaccharides
在超聲溫度為70℃,超聲波功率為300 W,超聲時(shí)間為20 min的條件下,pH值依次按照6.0、7.0、8.0、9.0、10.0 5個(gè)水平對(duì)燕麥麩皮多糖進(jìn)行提取,利用上述公式計(jì)算燕麥麩皮多糖的提取得率,結(jié)果如圖2所示。
圖2 提取液pH值對(duì)燕麥麩皮多糖提取率的影響Fig.2 Effect of pH on extraction rate of Oat bran polysaccharides
試驗(yàn)結(jié)果結(jié)果表明,燕麥麩皮多糖提取率隨著提取液pH值的增加呈先上升后平緩的趨勢(shì),在pH值為10.0時(shí),燕麥麩皮多糖得率出現(xiàn)峰值。因?yàn)橹行缘难帑滬熎ざ嗵牵軌蛉咳芙獾綁A性溶液中,然而當(dāng)溶液的pH值不斷增加時(shí),燕麥麩皮中的多糖的交聯(lián)度將會(huì)變小,出現(xiàn)解離聚合的現(xiàn)象,并且當(dāng)提取液的pH值較高時(shí),提取所得的燕麥麩皮多糖顏色較深,繼而增大后續(xù)試驗(yàn)操作的難度,試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)當(dāng)pH值為9.0和pH值為10.0時(shí),燕麥麩皮多糖提取得率相差并不大,綜合各因素考慮選擇pH值為9.0比較合適。
在超聲溫度為70℃,pH值為9.0,超聲波功率為300 W 的條件下,超聲時(shí)間分別按照 5、10、15、20、25min 5個(gè)水平對(duì)燕麥麩皮多糖進(jìn)行提取,利用上述公式計(jì)算燕麥麩皮多糖的提取得率,結(jié)果如圖3所示。
圖3 超聲時(shí)間對(duì)燕麥麩皮多糖提取率的影響Fig.3 Effect of Ultrasonic time on extraction rate of Oat bran polysaccharides
試驗(yàn)結(jié)果表明,燕麥麩皮多糖提取率隨超聲時(shí)間的增加呈先上升后下降的趨勢(shì),當(dāng)超聲時(shí)間為15 min時(shí),燕麥麩皮多糖提取得率出現(xiàn)峰值。由于在一定時(shí)間范圍內(nèi),可溶性多糖溶解不充分,需要增加時(shí)間來(lái)提高燕麥麩皮多糖的溶解性,從而提高多糖在溶液中的提取得率;當(dāng)時(shí)間超過(guò)一定界線時(shí),隨著超聲時(shí)間的延長(zhǎng),在超聲波強(qiáng)大的剪切力作用下,燕麥麩皮皮出現(xiàn)破碎和分解的現(xiàn)象,燕麥麩皮多糖的提取得率下降,綜合考慮選擇超聲時(shí)間為15 min。
在超聲溫度為70℃,pH值為9.0和超聲時(shí)間為15 min的條件下,超聲波功率依次按照300、400、500、600、700 W 5個(gè)水平對(duì)燕麥麩皮多糖進(jìn)行提取,利用上述公式計(jì)算燕麥麩皮多糖的提取得率,結(jié)果如圖4所示。
試驗(yàn)結(jié)果表明,燕麥麩皮多糖的提取得率隨著超聲波功率的增大,先出現(xiàn)增加現(xiàn)象隨后出現(xiàn)降低的趨勢(shì)。當(dāng)超聲波功率為400 W時(shí),燕麥麩皮多糖的提取得率出現(xiàn)峰值。由于隨著超聲波功率的增加,剪切作斷加大,空化作用不斷增強(qiáng),加速水分子的運(yùn)動(dòng)和溶解速度,細(xì)胞充分的破裂,加快了燕麥麩皮多糖的溶出速率;當(dāng)超聲波功率超過(guò)一定功率界線時(shí),因?yàn)榻橘|(zhì)的劇烈震蕩,過(guò)大的功率對(duì)燕麥麩皮多糖產(chǎn)生破壞作用,多糖分子鏈斷裂,燕麥麩皮多糖逐漸被降解,從而導(dǎo)致燕麥麩皮多糖的提取得率逐漸變小。
圖4 超聲波功率對(duì)燕麥麩皮多糖提取率的影響Fig.4 Effect of Ultrasonic power on extraction rate of Oat bran polysaccharides
在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上,選取超聲溫度(A,℃),pH值(B),超聲時(shí)間(C,min)和超聲波功率(D,W)為自變量,選擇燕麥麩皮多糖提取得率(Y,%)為因變量[15],超聲波輔助提取燕麥麩皮多糖的得率運(yùn)用四因素三水平的Box-Benhnken響應(yīng)面法進(jìn)行優(yōu)化研究,共包含29個(gè)試驗(yàn)點(diǎn),響應(yīng)面法試驗(yàn)設(shè)計(jì)及對(duì)應(yīng)響應(yīng)值結(jié)果見(jiàn)表2。
表2 Box-Benhnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)表與響應(yīng)值Table 2 Box-Benhnken experiment design independent(A,B,C,D)and dependent variables
續(xù)表2 Box-Benhnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)表與響應(yīng)值Continue table 2 Box-Benhnken experiment design independent(A,B,C,D)and dependent variables
使用“Design-expert 8.0.5b”程序?qū)?9個(gè)試驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和分析,研究因變量對(duì)4個(gè)自變量的方程回歸擬合情況及方差分析,結(jié)果見(jiàn)表3。
表3 方差分析與顯著性檢驗(yàn)Table 3 Analysis of variance and significance test
對(duì)表3中試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用多元回歸擬合的方法,從而獲得因變量對(duì)各個(gè)自變量的二次多項(xiàng)回歸方程為Y=7.28-0.72A+0.43B+0.42C+0.29D-0.17AB-0.48AC+0.055AD+0.080BC-0.20BD-0.71CD-1.07A2-0.92B2-1.03C2-0.68D2。從表3中可以看出,總回歸模型F值為41.79,Pr>F<0.000 1,說(shuō)明總回歸模型極顯著;失擬項(xiàng) F值為 0.70,Pr>F 為 0.703 6>0.05,說(shuō)明失擬項(xiàng)相對(duì)于誤差來(lái)說(shuō)不顯著。Pr>F>0.000 1,方程的模型顯著,說(shuō)明模型擬合有意義;Pr>F為0.703 6>0.05,失擬差不顯著,說(shuō)明該模型擬合程度良好,從而說(shuō)明此模型對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果能夠進(jìn)行預(yù)測(cè)和分析。由表3可知,所有一次項(xiàng)A、B、C、D均為極顯著水平(p<0.01);交互項(xiàng) AC、CD 是極顯著水平(p<0.01),其余交叉項(xiàng)水平不顯著(p>0.05);二次項(xiàng) A2,B2,C2,D2水平均極顯著(p<0.01)。相關(guān)系數(shù)R2=97.66%,校正相關(guān)系數(shù)Adj.R=95.33%,說(shuō)明該實(shí)驗(yàn)的模型擬合好。
圖5和圖6分別為交互項(xiàng)AC和CD對(duì)燕麥麩皮多糖提取得率影響顯著的兩個(gè)交互作用影響曲面。
圖5 超聲溫度和超聲時(shí)間對(duì)燕麥麩皮提取率的交互作用Fig.5 The interaction of ultrasonic temperature and ultrasonic time on the yield of oat bran polysaccharides
由圖5可知,當(dāng)超聲溫度在(57℃~67℃)范圍內(nèi),超聲時(shí)間在(16 min~22 min)范圍內(nèi),二者之間具有顯著增效的作用,燕麥麩皮皮多糖提取得率隨著超聲溫度的延長(zhǎng)和超聲時(shí)間的增加而變大;當(dāng)超聲溫度在(67℃~73℃)范圍內(nèi),超聲時(shí)間在(22 min~24 min)范圍內(nèi),燕麥麩皮多糖提取得率隨著二者的增加而逐漸減小。由圖6可知,當(dāng)超聲時(shí)間在(16 min~22 min)范圍內(nèi),超聲波功率在(300 W~400 W)范圍內(nèi),二者存在顯著增效的作用,燕麥麩皮多糖提取得率隨著超聲時(shí)間的延長(zhǎng)和超聲功率的增加而變大;當(dāng)超聲時(shí)間在(22 min~24 min)范圍內(nèi),超聲波功率在(400 W~500 W)范圍內(nèi),燕麥麩皮多糖提取得率隨著二者的增加而逐漸減小。
圖6 超聲時(shí)間和超聲波功率對(duì)燕麥麩皮提取率的交互作用Fig.6 The interaction of ultrasonic time and ultrasonic power on the yield of oat bran polysaccharides
利用實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)軟件“Design-Expert 8.0.5b”找出了最優(yōu)的超聲波輔助提取工藝參數(shù)為:超聲溫度為66.09℃,pH值為9.21,超聲時(shí)間為21.41 min,超聲波功率為401 W,從而獲得燕麥麩皮皮多糖提取得率的最大值。因?yàn)樵擃A(yù)測(cè)條件下實(shí)際試驗(yàn)中難以操作控制,所以在實(shí)際的測(cè)試中進(jìn)行一定地調(diào)整,實(shí)際測(cè)試條件為:超聲溫度為66℃,pH值為9.2,超聲時(shí)間為21 min和超聲波功率401 W。重復(fù)上述超聲波輔助提取多糖的工藝,使用優(yōu)化后的工藝條件平行提取3次燕麥麩皮多糖。結(jié)果表明,3批燕麥麩皮多糖平均提取率為(7.48±2.6)%(n=3),試驗(yàn)觀測(cè)值與模型預(yù)測(cè)值偏差僅為1.01%,從而可以得出,試驗(yàn)觀察值和回歸方程得到的模型預(yù)測(cè)值相接近,說(shuō)明模型預(yù)測(cè)性良好。
通過(guò)研究單因素試驗(yàn)考察燕麥麩皮多糖提取條件,利用Box-Benhnken響應(yīng)曲面分析法分析評(píng)價(jià)燕麥麩皮多糖提取得率,得到燕麥麩皮多糖超聲波輔助提的最佳工藝參數(shù)為:超聲溫度為66℃,pH值為9.2,超聲時(shí)間為21 min和超聲波功率為401 W。使用優(yōu)化后的工藝參數(shù)提取燕麥麩皮多糖,結(jié)果表明,3批燕麥麩皮多糖的平均提取得率為(7.48±2.6)%(n=3)。
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Optimization of Ultrasonic-assisted Extraction Process of Oat Bran Polysaccharide Based on Response Surface Methodology
LIU Shao-juan1,LIU Hui-ping1,*,ZHAO Fan2,SUN Na-xin1,LI Wei-hong1
(1.College of Food Engineering and Biotechnology,Tianjin University of Science&Technology,Tianjin 300457,China;2.Baolingbao Biolgy Co.,Ltd.,Dezhou 251200,Shandong,China)
The response surface methodology was used to optimize the ultrasonic-assisted extraction of polysaccharides from oat bran.On the basis of four single factor tests,ultrasonic temperature,pH,ultrasonic time and ultrasonic power were selected as the influencing factors,and the extraction rate of oat bran was evaluated as the evaluation index.Response surface method was used to investigate the effects of four different factors and interactions on oat bran polysaccharide extraction yield.The results indicated that the optimal extraction from oat bran conditions are ultrasonic temperature 66 ℃,pH9.2,ultrasonic time 21 min and ultrasonic power of 404 W,respectively.Under these conditions,3 batchs polysaccharide from oat bran were extracted.The average extraction rate of oat bran polysaccharide was(7.48±2.6)%(n=3).
oat bran polysaccharides;ultrasonic-assisted extraction;response surface methodology
10.3969/j.issn.1005-6521.2017.22.015
劉少娟(1992—),女(漢),在讀碩士研究生,研究方向:動(dòng)物資源開(kāi)發(fā)與功能食品。
*通信作者:劉會(huì)平(1965—),男(漢),教授,博士,研究方向:動(dòng)物資源開(kāi)發(fā)與功能食品。
2017-04-07
歡迎訂閱2018年《食品研究與開(kāi)發(fā)》
《食品研究與開(kāi)發(fā)》是由天津市食品研究所有限公司和天津市食品工業(yè)生產(chǎn)力促進(jìn)中心主辦,國(guó)內(nèi)外公開(kāi)發(fā)行的食品專業(yè)科技期刊,1980年創(chuàng)刊,半月刊,采用國(guó)際流行開(kāi)本大16開(kāi)。其專業(yè)突出,內(nèi)容豐富,印刷精美,是一本既有基礎(chǔ)理論研究,又包括實(shí)用技術(shù)的刊物。本刊已被“萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)”、“中文科技期刊數(shù)據(jù)庫(kù)”、《烏利希期刊指南》、美國(guó)《化學(xué)文摘》、英國(guó)國(guó)際農(nóng)業(yè)與生物科學(xué)研究中心(CABI)、英國(guó)《食品科技文摘》(FSTA)等知名媒體收錄,并被列入“中文核心期刊”、“中國(guó)科技核心期刊”、RCCSE中國(guó)核心學(xué)術(shù)期刊(A)。主要欄目有:基礎(chǔ)研究、分離提取、研發(fā)與工藝、標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)、生物工程、營(yíng)養(yǎng)保健、貯藏保鮮、質(zhì)量安全、專題論述、食品機(jī)械等。
本刊國(guó)內(nèi)統(tǒng)一刊號(hào)CN 12-1231/TS;國(guó)際刊號(hào)ISSN 1005-6521;郵發(fā)代號(hào):6-197。全國(guó)各地郵局及本編輯部均可訂閱。從本編輯部訂閱全年刊物享八折優(yōu)惠。2018年定價(jià):30元/冊(cè),全年720元。
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