杜霞，王愛華，尋延濱（1.哈爾濱理工大學(xué)化學(xué)與環(huán)境工程學(xué)院制藥工程系，哈爾濱150040；.黑龍江省食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)所，哈爾濱150088）

氣相色譜法同時(shí)測(cè)定拉西地平原料藥中4種有機(jī)溶劑的殘留量

杜霞1＊，王愛華2，尋延濱2（1.哈爾濱理工大學(xué)化學(xué)與環(huán)境工程學(xué)院制藥工程系，哈爾濱150040；2.黑龍江省食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)所，哈爾濱150088）

目的：建立同時(shí)測(cè)定拉西地平原料藥中乙醇、二氯甲烷、異丙醇、乙酸乙酯4種有機(jī)溶劑殘留量的方法。方法：采用氣相色譜法。色譜柱為DB-624毛細(xì)管柱，程序升溫，檢測(cè)器為氫火焰離子化檢測(cè)器，檢測(cè)器溫度為250℃，載氣為氮?dú)?，流速?.0 mL/min，分流比為10∶1，進(jìn)樣量為1.0 μL。結(jié)果：乙醇、二氯甲烷、異丙醇、乙酸乙酯檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍分別為0.259 5～2.076 mg/mL（r＝0.999 6）、0.055 3～0.316 mg/mL（r＝0.999 2）、0.342 3～1.956 mg/mL（r＝0.999 5）、0.370 6～2.118 mg/mL（r＝0.999 4）；定量限分別為2.96、2.24、4.4、4.44 μg/mL，檢測(cè)限分別為0.887、0.672、1.3、1.32 μg/mL；精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)的RSD＜4.0%；加樣回收率分別為95.00%～101.17%（RSD＝2.19%，n＝9）、96.22%～104.53%（RSD＝3.27%，n＝9）、96.20%～104.90%（RSD＝2.41%，n＝9）、95.60%～104.48%（RSD＝2.85%，n＝9）。結(jié)論：該方法簡單、靈敏、可靠，適用于拉西地平原料藥中4種有機(jī)溶劑殘留量的同時(shí)測(cè)定。

拉西地平；氣相色譜法；殘留溶劑；乙醇；二氯甲烷；異丙醇；乙酸乙酯

拉西地平為第三代二氫吡啶類鈣離子拮抗藥，作用于平滑肌的鈣通道，有降壓、改善受損心肌的舒張功能以及抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用[1-3]。拉西地平原料藥在制備過程中使用了乙醇、二氯甲烷、異丙醇、乙酸乙酯等有機(jī)溶劑，而依據(jù)人用藥品注冊(cè)技術(shù)規(guī)范國際協(xié)調(diào)會(huì)議提出的有機(jī)溶劑殘留量指導(dǎo)原則，這些溶劑均被列為藥品必須限制的第二、三類有機(jī)溶劑[4]，因此為保證藥品質(zhì)量和用藥安全，對(duì)該原料藥進(jìn)行有機(jī)溶劑殘留量檢測(cè)就顯得尤為重要。鑒于此，筆者參考文獻(xiàn)[5-8]采用氣相色譜法建立了同時(shí)測(cè)定拉西地平原料藥中乙醇、二氯甲烷、異丙醇、乙酸乙酯4種有機(jī)溶劑殘留量的方法，以期為完善該原料藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

1 材料

1.1 儀器

Technologies 7693型氣相色譜儀，包括氫火焰離子化檢測(cè)器、頂空進(jìn)樣器、OPENLab工作站（美國Agilent公司）；YH-200DH型超聲波振蕩儀（上海睿祺電子設(shè)備有限公司）；MS105DU型電子天平（瑞士Mettler-Toledo公司）。

1.2 藥品與試劑

拉西地平原料藥（廠家1，批號(hào)：YS1401001、YS1401002、YS1401003；廠家2，批號(hào)：000119426、000119642、000065117；廠家3，批號(hào)：1402001、1402002、1402003；廠家4，批號(hào)：1403001、1403002、1403003）；乙醇對(duì)照品（批號(hào)：20160920，純度：≥99.7%）、二氯甲烷對(duì)照品（批號(hào)：20140509，純度：≥99.5%）、異丙醇對(duì)照品（批號(hào)：20130326，純度：≥99.7%）、乙酸乙酯對(duì)照品（批號(hào)：20140507，純度：≥99.5%）均購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；N，N-二甲基甲酰胺（DMF）為色譜純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：DB-624毛細(xì)管柱；升溫程序：起始溫度為40℃，保持8 min，以20℃/min升溫至90℃，保持3 min，再以10℃/min升溫至200℃，保持10 min；檢測(cè)器：氫火焰離子化檢測(cè)器；檢測(cè)器溫度：250℃；載氣：氮?dú)?；流速?.0 mL/min；分流比：10∶1；進(jìn)樣量：1.0 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合對(duì)照品溶液分別精密稱取乙醇對(duì)照品207.6 mg、二氯甲烷對(duì)照品31.6 mg、異丙醇對(duì)照品195.6 mg、乙酸乙酯對(duì)照品211.8 mg，置于同一100 mL量瓶中，加DMF溶解并定容，搖勻，作為混合對(duì)照品貯備液。精密量取上述混合對(duì)照品貯備液5 mL，置于20 mL量瓶中，加DMF溶解并制成每1 mL中約含乙醇0.5 mg、二氯甲烷0.075 mg、異丙醇0.5 mg、乙酸乙酯0.5 mg的混合對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液取樣品約0.5 g，精密稱定，置于5 mL量瓶中，加DMF溶解并定容，搖勻，即得。2.2.3空白溶液取DMF適量作為空白溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

精密量取“2.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液、供試品溶液和空白溶液各適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜，詳見圖1。由圖1可知，在該色譜條件下，各成分均能達(dá)到基線分離，分離度＞2；理論板數(shù)以乙醇峰計(jì)為19 493，乙醇、二氯甲烷、異丙醇、乙酸乙酯的保留時(shí)間分別為5.25、6.73、6.50和9.85 min。結(jié)果表明，其他成分對(duì)測(cè)定不干擾。

2.4 線性關(guān)系考察

取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品貯備液2.5、5、10、15、20 mL，置于20 mL量瓶中，加DMF定容，作為系列混合對(duì)照品溶液。取上述系列混合對(duì)照品溶液適量，以待測(cè)有機(jī)溶劑質(zhì)量濃度（x，mg/mL）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，回歸方程與線性范圍見表1。

2.5 定量限（LOQ）與檢測(cè)限（LOD）考察

取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，倍比稀釋，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。當(dāng)信噪比為10∶1時(shí)，得LOQ；當(dāng)信噪比為3∶1時(shí)，得LOD。結(jié)果，乙醇、二氯甲烷、異丙醇、乙酸乙酯的LOQ分別為2.96、2.24、4.4、4.44 μg/mL；LOD分別為0.887、0.672、1.3、1.32 μg/mL。

2.6 精密度試驗(yàn)

精密量取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。結(jié)果，乙醇、二氯甲烷、異丙醇、乙酸乙酯峰面積的RSD分別為3.2%、3.9%、1.8%、3.7%（n＝6），表明儀器精密度良好。

圖1 氣相色譜圖Fig 1 GC chromatograms

表1 回歸方程與線性范圍Tab 1 Regression equations and linear ranges

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液（批號(hào)：YS1401001）適量，分別于室溫下放置0、1、2、4、6、8 h時(shí)按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果，異丙醇、二氯甲烷和乙酸乙酯均未檢出，只檢出乙醇，其峰面積的RSD＝3.2%（n＝6），表明供試品溶液在室溫下放置8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取樣品（批號(hào)：YS1401001）適量，共6份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定并計(jì)算有機(jī)溶劑殘留量。結(jié)果，異丙醇、二氯甲烷和乙酸乙酯均未檢出，只檢出乙醇，其殘留量的平均值為0.036%，峰面積的RSD＝3.8%（n＝6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取樣品（批號(hào)：YS1401003）0.5 g，共9份，分別置于10 mL量瓶中，各精密加入低、中、高質(zhì)量的待測(cè)有機(jī)溶劑對(duì)照品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表2。

2.10 樣品有機(jī)溶劑殘留量測(cè)定

取12批樣品各適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算待測(cè)有機(jī)溶劑的殘留量，結(jié)果見表3（注：“-”為低于檢測(cè)限）。

表2 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）Tab 2 Results of recovery tests（n＝9）

3 討論

3.1 色譜柱的選擇

由于各企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中根據(jù)其檢測(cè)物質(zhì)的不同使用的色譜柱不盡相同，本研究結(jié)合《中國藥典》中的推薦及色譜柱類型的日常應(yīng)用范圍[9]，發(fā)現(xiàn)DB-624毛細(xì)管柱更適合對(duì)4種有機(jī)溶劑的殘留量進(jìn)行檢測(cè)，因此選擇該色譜柱進(jìn)行測(cè)定。

3.2 進(jìn)樣方式的選擇

因各企業(yè)拉西地平原料藥的生產(chǎn)工藝存在差異[10-11]，涉及的原料藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中除有機(jī)溶劑控制種類存在較大差異外，測(cè)定方法也不盡相同。測(cè)定時(shí)進(jìn)樣方式主要分為溶劑直接進(jìn)樣和頂空進(jìn)樣兩種方式。在滿足檢測(cè)靈敏度的前提下，直接進(jìn)樣較頂空進(jìn)樣節(jié)省時(shí)間，且更為便捷。鑒于此，本試驗(yàn)采用直接進(jìn)樣的方式。

表3 樣品有機(jī)溶劑殘留量測(cè)定結(jié)果（n＝3，%）Tab 3 Results of residual organic solvents determination of samples（n＝3，%）

綜上所述，本方法簡單、靈敏、可靠，適用于拉西地平原料藥中4種有機(jī)溶劑殘留量的同時(shí)測(cè)定。

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Simultaneous Determination of 4 Residual Organic Solvents in Lacidipine Raw Material by GC

DU Xia1，WANG Aihua2，XUN Yanbin2（1.Pharmaceutical Department，Chemical and Environmental Engineering School，Harbin University of Science and Technology，Harbin 150040，China；2.Heilongjiang Institute for Food and Drug Control，Harbin 150088，China）

OBJECTIVE：To establish a method for simultaneous determination of 4 residual organic solvents such as ethanol，dichloromethane，isopropanol and ethyl acetate in lacidipine raw material.METHODS：GC method was adopted.The determination was performed on DB-624 capillary column at the rate of 2.0 mL/min using nitrogen gas as carrier and FID as the detector by temperature programming.The temperature of detector was set at 250℃.Carries gas was nitrogen.The split ratio was 10∶1.The sample size was 10 μL.RESULTS：The linear ranges of ethanol，dichloromethane，isopropanol and ethyl acetate were 0.259 5-2.076 mg/mL（r＝0.999 6），0.055 3-0.316 mg/mL（r＝0.999 2），0.342 3-1.956 mg/mL（r＝0.999 5），0.370 6-2.118 mg/mL（r＝0.999 4），respectively.The limits of quantification were 2.96，2.24，4.4，4.44 μg/mL，and the detection limits were 0.887，0.672，1.3，1.32 μg/mL，respectively.RSDs of precision，stability and reproducibility tests were all lower than 4.0%.The recoveries were 95.00%-101.17%（RSD＝2.19%，n＝9），96.22%-104.53%（RSD＝3.27%，n＝9），96.20%-104.90%（RSD＝2.41%，n＝9），95.60%-104.48%（RSD＝2.85%，n＝9）.CONCLUSIONS：The method is simple，sensitive and reliable，and is suitable for simultaneous determination of 4 residual organic solvents in lacidipine raw material.

Lacidipine；GC；Residual solvents；Ethanol；Dichloromethane；Isopropanol；Ethyl acetate

R917

A

1001-0408（2017）30-4292-03

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.30.31

＊講師，博士研究生。研究方向：藥物新劑型與新技術(shù)。電話：0451-86392728。E-mail：duxia62@126.com

2017-04-01

2017-06-24）

（編輯：劉柳）