吳 悅， 吳 炯， 王蓓麗， 郭 瑋， 潘柏申

復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院檢驗科，上海 200032

·短篇論著·

乳膠凝集法檢測唾液酸化糖鏈抗原KL-6的性能觀察及其對間質(zhì)性肺病的診斷價值

吳 悅， 吳 炯， 王蓓麗*， 郭 瑋， 潘柏申

復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院檢驗科，上海 200032

目的探討乳膠凝集法檢測唾液酸化糖鏈抗原KL-6的性能，并評估KL-6對間質(zhì)性肺病的診斷價值。方法檢測44例表面健康人血清KL-6水平，驗證試劑盒廠商提供的參考區(qū)間。比較間質(zhì)性肺病(interstitial lung disease, ILD)組、其他肺病組和表面健康人組血清KL-6水平，通過繪制ROC曲線評價KL-6對ILD的診斷性能。結(jié)果44例表面健康人血清KL-6水平有43例在廠商提供的參考范圍內(nèi)(>90%)，通過驗證。ILD組、其他肺病組和表面健康人組KL-6中位濃度分別為824(187.9～8 214)、246(101～2 129)、168(98～416) U/mL，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)。以500 U/mL為臨界值，KL-6診斷ILD靈敏度和特異度分別為75%、89.8% 。KL-6診斷ILD的ROC曲線下面積(AUC)為0.852(95%CI 0.793 ～ 0.911，P<0.000 1)。結(jié)論乳膠凝集法檢測血清KL-6的性能符合要求；KL-6對ILD具有較好的診斷效能,是潛在的診斷指標(biāo)。

KL-6;乳膠凝集法;間質(zhì)性肺??；診斷價值

間質(zhì)性肺病(interstitial lung disease, ILD)是一組疾病的統(tǒng)稱，以多種形式的肺間質(zhì)炎癥和纖維化為特征，包括特發(fā)性間質(zhì)性肺炎、膠原血管病引起的間質(zhì)性肺炎、過敏性肺炎、放射性肺炎、急性呼吸窘迫綜合征等。ILD多為散發(fā)，見于各年齡組，以40～70歲較多見，各國ILD發(fā)病率為(20～40)/10萬人[1-3]。

臨床上診斷ILD常用高分辨率計算機(jī)斷層掃描、支氣管鏡檢查和(或)肺活檢來確診ILD，用肺功能檢測來監(jiān)控疾病活動性和ILD患者預(yù)后。然而，這些檢查需要特定的醫(yī)療設(shè)備，且會給患者帶來較強(qiáng)的不適感。而目前國內(nèi)ILD實驗室檢查中尚缺乏具有高靈敏度(>80%)和高特異度(>90%)的指標(biāo)[4]。

KL-6是一種唾液酸化糖鏈抗原，屬于Ⅰ類跨膜高相對分子質(zhì)量黏蛋白(MUC)，主要由增殖、受激發(fā)或受損的Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞分泌，對判斷Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞的功能有特異性。乳膠凝集法檢測KL-6易操作、成本低、重復(fù)性高、侵入性低。目前國內(nèi)鮮有用乳膠凝集法檢測血清KL-6的性能及其對ILD診斷價值的相關(guān)研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2016年3月至2016年7月在復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院經(jīng)病理、影像和臨床確診為ILD的患者80例，作為ILD組。其中，男性38例，女性42例；年齡36～89歲，平均(64.83±16.45)歲。

選擇同期在復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院住院的肺癌(23例)、肺結(jié)節(jié)(31例)、非間質(zhì)性肺炎(14例)、肺隱球菌病(4例)、肺結(jié)核(4例)、肺栓塞(2例)、支氣管炎(5例)患者共83例作為其他肺病組。其中，男性47例，女性36例；年齡26～85歲，平均年齡(57.14±17.24)歲。排除ILD可能，且年齡、性別的分布情況與ILD組相匹配。

選擇2016年3月在復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院體檢中心排除肺部疾病進(jìn)行體檢的健康人44例，作為表面健康人組。其中，男性24例、女性20例；年齡35～82歲，平均(55.14±26.24)歲。排除ILD病史，年齡、性別與疾病組相匹配。

1.2 方 法

1.2.1 檢測方法 血清KL-6檢測采用唾液酸化糖鏈抗原檢測試劑盒(乳膠凝集法，批號：C002)以及Hitachi型全自動7600生化分析儀。步驟如下：使用惰性分離膠真空管，采集各組患者靜脈血5 mL，室溫下自然凝集10 min，4～8℃、7 610×g離心10 min。新鮮標(biāo)本于2 h內(nèi)檢測。批間實驗使用的混合標(biāo)本于-80℃保存，檢測前于15～30℃解凍，并于24 h內(nèi)檢測。

1.2.2 生物參考區(qū)間的驗證 統(tǒng)計44例表面健康人的血清KL-6檢測結(jié)果。根據(jù)美國臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)C28-A2標(biāo)準(zhǔn)，如果檢測結(jié)果不超過10%在廠家建議的參考區(qū)間以外，則廠商提供的參考區(qū)間通過驗證。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 17.0和GraphPad Prism 5進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。3組間KL-6水平的比較采用Mann-Whitney檢驗。利用受試者工作特征曲線 (receiver operating characteristic curve，ROC)評估KL-6對ILD的診斷價值。檢驗水準(zhǔn)(α)為0.05。

2 結(jié) 果

2.1 生物參考區(qū)間驗證 44例表面健康人中，只有1例KL-6的檢測值不在試劑盒提供的生物參考區(qū)間內(nèi)(105～435 U/mL)，符合率為97.7%(圖1)，說明試劑盒提供的生物參考區(qū)間結(jié)果可采用。

圖1 表面健康人血清KL-6濃度的分布

2.2 3組KL-6濃度比較 207例入組對象中，男性109例，女性98例。ILD組、其他肺病組和表面健康人KL-6中位濃度分別為824(187.9～8 214)、246(101～2 129)、168(98～416)U/mL，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(圖1)。ILD組KL-6水平大于其他兩組(P<0.001)，其他肺病組KL-6水平大于表面健康人組(P<0.01)。

圖2 3組人群KL-6的濃度比較

2.3 診斷價值評估 KL-6診斷ILD的ROC曲線下面積為0.852。以500 U/mL為臨界值，KL-6診斷ILD的靈敏度和特異度分別為75.0%、89.8%(圖3)。

圖3 KL-6診斷ILD的ROC曲線

3 討 論

乳膠凝集法檢測KL-6試劑盒廠商推薦的KL-6濃度的參考區(qū)間是依據(jù)171例日本表面健康志愿者的檢測結(jié)果所建立的，但參考范圍會隨地區(qū)、人種及年齡等改變。本研究中，中國人群的KL-6參考區(qū)間與日本人群相近，廠商提供的參考區(qū)間得到驗證。通過比較ILD組、其他肺病組與表面健康人組得出：KL-6對ILD的診斷，對ILD與非間質(zhì)性肺病的鑒別診斷具有一定的參考價值。

ILD以彌漫性肺實質(zhì)、肺泡炎和間質(zhì)纖維化為基本病理改變，其種類多樣。目前缺乏理想的ILD血清學(xué)標(biāo)志物。KL-6主要由Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞分泌，定位于Ⅱ型上皮細(xì)胞、支氣管上皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜，部分細(xì)支氣管基底細(xì)胞、Clara細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)，支氣管腺細(xì)胞也有表達(dá)。當(dāng)出現(xiàn)ILD時，Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞大量增殖，釋放大量KL-6入血，導(dǎo)致血清KL-6升高[5]。本研究中，ILD組患者血清KL-6大于其他兩組(P<0.01)。

除KL-6外，常用的ILD血清學(xué)標(biāo)志物還有SP-A、SP-D、MCP-1。本研究中KL-6診斷ILD的AUC為0.852，優(yōu)于有關(guān)研究[6]中SP-A、SP-D、MCP-1的診斷效能。有研究表明，肺組織的纖維化損傷程度越嚴(yán)重，KL-6的水平越升[7]，且ILD患者血清及肺泡灌洗液中KL-6水平較健康人和其他呼吸系統(tǒng)疾病患者明顯升高[8]。在ILD中，KL-6不僅可作為診斷的參考指標(biāo)，而且對評估疾病活動性和預(yù)后具有重要作用[9]。

此外，細(xì)菌性肺炎患者血清KL-6水平不會升高[10]，但細(xì)菌性肺炎及肺結(jié)核患者血清SP-A和SP-D升高[11]，表明KL-6診斷ILD有一定優(yōu)越性。但是，肺纖維化感染(軍團(tuán)菌肺炎、嚴(yán)重肺結(jié)核、卡氏肺孢子蟲肺炎等)和惡性腫瘤患者血清KL-6也會升高[12-13]。

綜上所述，血清 KL-6在檢測ILD中具有高靈敏度和特異度，是ILD診斷、監(jiān)測和預(yù)后較好的指標(biāo)，具有較高的臨床應(yīng)用價值，但本研究并未對治療前后的KL-6水平變化進(jìn)行分析，無法探討疾病活動度與KL-6的相關(guān)性。此外，本研究對其他非ILD組未進(jìn)行細(xì)分且樣本量較小。因此，不同階段ILD患者中的血清KL-6水平有待進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量進(jìn)行研究。

[ 1 ] VALEYRE D, FREYNET O, DION G, et al. Epidemiology of interstitial lung diseases[J]. Presse Med, 2010,39(1):53-59.

[ 2 ] KARAKATSANI A, PAPAKOSTA D, RAPTI A, et al. Epidemiology of interstitial lung diseases in Greece[J]. Respir Med,2009,103(8):1122-1129.

[ 3 ] MUSELLIM B, OKUMUS G, UZASLAN E, et al. Epidemiology and distribution of interstitial lung diseases in Turkey[J]. Clin Respir J,2014,8(1): 55-62.

[ 4 ] HU Y, WANG L S, JIN Y P,et al. Serum Krebs von den Lungen-6 level as a diagnostic biomarker for interstitial lung disease in Chinese patients[J]. Clin Respir J, 2017,11(3):337-345.

[ 5 ] SUWABE A. Lung injury and serum markers[J].Rinsho Byori,2002,50(11):1061-1066.

[ 6 ] OHNISHI H, YOKOYAMA A, KONDO K, et al.Comparative study of KL-6, surfactant protein-A, surfactant protein-D, and monocyte chemoattractant protein-1 as serum markers for interstitial lung diseases[J]. Am J Respir Crit Care Med,2002,165(3):378-381.

[ 7 ] 王妍亭，顏 浩，韓 娟，等. KL-6在部分腫瘤及間質(zhì)性肺病中的應(yīng)用進(jìn)展[J]. 臨床肺科雜志,2017,22(2):339-343.

[ 8 ] YANABA K, HASEGAWA M, TAKEHARA K, et al. Comparative study of serum surfactant protein-D and KL-6 concentrations in patients with systemic sclerosis as markers for monitoring the activity of pulmonary fibrosis[J]. J Rheumatol, 2004,31(6):1112-1120.

[ 9 ] KONDO T,HATTORI N,ISHIKAWA N,et al. KL-6 concentration in pulmonary epithelial lining fluid is a useful prognostic indicator in patients with acute respiratory distress syndrome[J]. Respir Res,2011, 12: 32.

[10] JANSSEN R, SATO H, GRUTTERS J C, et al. Study of Clara cell 16, KL-6, and surfactant protein-D in serum as disease markers in pulmonary sarcoidosis[J]. Chest, 2003, 124(6):2119-2125.

[11] HAMAI K, IWAMOTO H, ISHIKAWA N, et al. Comparative study of circulating MMP-7, CCL18, KL-6, SP-A, and SP-D as disease markers of idiopathic pulmonary fibrosis[J]. Dis Markers, 2016, 2016:4759040.

[12] GUO W L, ZHOU Z Q, CHEN L,et al. Serum KL-6 in pulmonary alveolar proteinosis: China compared historically with Germany and Japan[J]. J Thorac Dis, 2017, 9(2):287-295.

[13] HAMADA H, KOHNO N, YOKOYAMA A, et al. KL-6 as a serologic indicator of pneumocystis carinii pneumonia in immunocompromised hosts[J]. Intern Med, 1998,37(3):307-310.

Efficiency of latex agglutination method in detecting Krebs von den Lungen-6 and its diagnostic value in patients with interstitial lung disease

WU Yue, WU Jiong, WANG Bei-li*, GUO Wei, PAN Bai-shen

Department of Clinical Laboratory, Zhongshan Hospital, Fudan University, Shanghai 200032, China

Objective： To explore the detect in efficiency of Krebs von den Lungen-6 (KL-6) by latex agglutination method and evaluate its diagnostic value in patients with interstitial lung disease.MethodsThe serum KL-6 levels of 44 healthy subjects were detected, and the reference interval provided by the kit manufacturer was verified. Serum KL-6 levels were compared between the ILD group, the other lung diseases group and the healthy subjects group. The diagnostic value of KL-6 for interstitial lung disease (ILD) was evaluated by drawing the ROC curve.ResultsThe serum KL-6 level of 43 in 44 healthy people (>90%) was within the reference range provided by the manufacturer. The median concentrations of KL-6 in the ILD group, the other lung diseases group and the healthy subjects group were 824 (187.9-8 214), 246 (101-2 129), and 168 (98-416) U/mL, respectively, and the differences were statistically significant (P<0.001). The sensitivity and specificity of KL-6 in diagnosis of ILD was 75% and 89.8%, respectively, with 500 U/mL as the cutoff value. The area under the ROC curve (AUC) of KL-6 for ILD diagnosis was 0.852 (95% CI 0.793-0.911,P<0.0001).ConclusionsThe latex agglutination method for detecting serum KL-6 has good performance and KL-6 is a potential diagnostic index of ILD.

Krebs von den Lungen-6; latex agglutination method; interstitial lung disease； diagnostic value

2017-03-27接受日期2017-07-06

上海市衛(wèi)生和計劃生育委員會重要薄弱學(xué)科建設(shè)項目(2015ZB0201). Supported by Key Developing Disciplines of Shanghai Municipal Commission of Heath and Family Planning (2015ZB0201).

吳 悅, 技師. E-mail: wu.yue@zs-hospital.sh.cn

*通信作者(Corresponding author). Tel: 021-64041990-2376, E-mail:wang.beili1@zs-hospital.sh.cn

10.12025/j.issn.1008-6358.2017.20170253

R -331

A

[本文編輯] 姬靜芳