李玉龍，王彬，孫明，王小林，于旭光，李軼平，付杰，王文波，董婧

(遼寧省海洋水產(chǎn)科學(xué)研究院，遼寧省海洋生物資源與生態(tài)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，遼寧 大連 116023)

基于COI條形碼的根口水母科Rhizostomatidae水母分子系統(tǒng)進(jìn)化研究

李玉龍，王彬，孫明，王小林，于旭光，李軼平，付杰，王文波，董婧

(遼寧省海洋水產(chǎn)科學(xué)研究院，遼寧省海洋生物資源與生態(tài)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，遼寧 大連 116023)

為探討DNA條形碼基因COI序列在根口水母科Rhizostomatidae水母物種鑒定中的有效性，分析了根口水母科3屬6種水母及口冠水母科1屬1種共計(jì)265條線粒體COI基因同源序列，利用MEGA 3.0計(jì)算根口水母科種內(nèi)與種間的遺傳距離，并基于鄰接法(Neibour-Joining,NJ)、最大似然法(Maximum Likelihood,ML)和貝葉斯法(Bayesian,BI)構(gòu)建了其分子系統(tǒng)進(jìn)化樹。結(jié)果表明：4個(gè)屬7種水母種類COI基因同源序列長(zhǎng)度為482 bp，種間遺傳距離為0.065～0.235，平均遺傳距離為0.198，種內(nèi)遺傳距離為0～0.032，平均為0.006，其中種間平均遺傳距離(0.198)顯著大于種內(nèi)平均遺傳距離(0.006)，種間遺傳距離是種內(nèi)遺傳距離的33倍；根口水母科水母種間遺傳距離均大于Hebert推薦區(qū)分物種的最小種間遺傳距離(0.02)；采用NJ法、ML法和BI法構(gòu)建的分子系統(tǒng)樹拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)基本一致，同一物種不同個(gè)體間均能聚成獨(dú)立的單系群，表明COI基因可作為根口水母科水母種類準(zhǔn)確鑒定的有效條形碼基因；系統(tǒng)進(jìn)化樹顯示，海蜇屬為單系群，系統(tǒng)進(jìn)化分析結(jié)果與形態(tài)分類學(xué)的觀點(diǎn)并不十分一致。研究表明，COI基因序列在根口水母科不同階元間變異較大，適合于根口水母科水母種類鑒定及群體水平的分子標(biāo)記。

DNA條形碼；COI基因；根口水母科；系統(tǒng)分析

水母是一類海洋膠質(zhì)類浮游生物，具有水螅體、水母體世代交替出現(xiàn)的生活史，不同時(shí)期形態(tài)變異較大且樣品易碎、不易保存，再加上水母生物地理學(xué)研究的缺乏導(dǎo)致一些水母種類尚未被描述，因此，有關(guān)水母類的形態(tài)分類鑒定尚比較混亂和困難，存在諸多爭(zhēng)議[1-5]。根口水母科Rhizostoidae水母在分類學(xué)上隸屬于刺胞動(dòng)物亞門Cnidaria、缽水母綱 Scyphomedusae、根口水母目Rhizostomeae。目前，已記錄的根口水母科水母包括真水母屬Eupilema1種、越前水母屬1種、海蜇屬4種、根口水母屬3種，共4屬9種，全為大型水母，其中既有經(jīng)濟(jì)價(jià)值較高的海蜇屬種類如海蜇Rhopilemaesculentum、黃斑海蜇R.hispidum，也有近年來(lái)在西北太平洋沿海暴發(fā)的越前水母Nemopilemanomurai以及在大西洋和地中海海域暴發(fā)的根口水母屬種類如根口水母Rhizostomaluteum、褐色根口水母Rhizostomapulmo、巨型桶水母Rhizostomaoctopus[4-6]，這些災(zāi)害水母的暴發(fā)致使暴發(fā)區(qū)內(nèi)漁業(yè)資源銳減并造成嚴(yán)重的生態(tài)災(zāi)難[6-11]。有關(guān)根口水母科水母形態(tài)分類及其系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系尚存在較多爭(zhēng)議，如很多學(xué)者懷疑真水母屬的存在，認(rèn)為其很可能是海蜇屬受損壞、不完整的標(biāo)本；越前水母此前曾被認(rèn)為是口冠水母Stomolophusmeleagris的同種異名[3,5]；海蜇屬面蜇Rhopilemaasamusi曾被認(rèn)為是海蜇R.esculentum的同種異名，但日本學(xué)者已證實(shí)其為獨(dú)立的有效種[12]，海蜇屬實(shí)際包括5種。

隨著分子生物技術(shù)的快速發(fā)展，DNA條形碼在水母種類鑒定及系統(tǒng)發(fā)生關(guān)系研究中的應(yīng)用越來(lái)越廣泛，一些學(xué)者已利用線粒體基因(如16S rRNA、COI)和核基因(如18S、28S rDNA及ITS序列)對(duì)根口水母科相關(guān)種類進(jìn)行了分子鑒定及系統(tǒng)相關(guān)研究，成功解決了一些有爭(zhēng)議的分類問(wèn)題[12-17]。然而由于水母分布廣泛且樣品難以采集，上述研究大多集中在某一個(gè)種或少數(shù)幾個(gè)種的分子鑒定及群體遺傳研究中，對(duì)水母類系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系方面的研究仍比較缺乏，僅Dawson等[15]利用DNA條形碼COI、ITS1對(duì)缽水母綱不同種間的分類進(jìn)行了研究；Bayha等[16]利用18S和28S rDNA序列分析了缽水母類48個(gè)種的系統(tǒng)關(guān)系；李玉龍等[17]基于缽水母綱18個(gè)種類分析了ITS-5.8S rDNA序列在缽水母綱系統(tǒng)分析中的應(yīng)用。但這些研究都是對(duì)整個(gè)缽水母綱水母進(jìn)行的分析，尚無(wú)專門針對(duì)根口水母科水母系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系進(jìn)行分析的報(bào)道。此外，上述研究雖然分析的水母種類較多，但所分析的水母種每一種所包含的樣品數(shù)量較少且采集地較為單一，這可能會(huì)導(dǎo)致由于“隱蔽種”的存在致使種類鑒定出現(xiàn)偏差。線粒體COI基因易于擴(kuò)增且具有豐富的信息變異位點(diǎn)，是進(jìn)行水母種類鑒定及分子系統(tǒng)分析最常用的分子標(biāo)記，可以揭示長(zhǎng)時(shí)間跨度從種、屬乃至科不同分類階元(taxon)的系統(tǒng)發(fā)生信息，彌補(bǔ)傳統(tǒng)形態(tài)分類鑒定的局限。因此，本研究中對(duì)采自遼寧沿海的越前水母、海蜇進(jìn)行了COI基因測(cè)定及序列分析，結(jié)合GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中已有的來(lái)自不同海域的根口水母科6種水母以口冠水母S.meleagris為外群對(duì)根口水母科水母的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系進(jìn)行分析，并探討DNA條形碼在根口水母科物種分子鑒定中的適用性，以期為根口水母科水母物種的有效鑒定、分類及系統(tǒng)發(fā)生等提供基礎(chǔ)資料。

1 材料與方法

1.1樣品采集及基因片段擴(kuò)增

本研究中所采集的根口水母科樣品包括海蜇和越前水母2種，每種樣品各20個(gè)，都采自遼東灣北部附近海域。樣品采集后取傘部及肩板組織于95%酒精中保存?zhèn)溆谩２捎肅TAB法提取基因組DNA，PCR擴(kuò)增在Eppendorf AG型PCR儀上進(jìn)行，引物序列為：FFDL 5′TTTCAACTAACCAYAAAGAYATWGG 3′ 和FRDL2 5′TANACTTCWGGRTGNCCRAAGAATCA 3′[18]。反應(yīng)體積(共25 μL)包括：10×PCR反應(yīng)緩沖液2.5 μL，DNA模板1 μL，Taq酶(2 U/μL )0.5 μL，dNTPs(10 mmol/L)0.5 μL，每種引物(10 mmol/L )各1 μL，MgCl2(10 mmol/L )1.5 μL，用滅菌超純水補(bǔ)足剩余體系。反應(yīng)程序：95 ℃下預(yù)變性3 min；95 ℃下變性30 s，50～55 ℃下退火30 s，72 ℃下延伸45 s，共運(yùn)行35個(gè)循環(huán)；最后在72 ℃下再延伸5 min。擴(kuò)增產(chǎn)物純化后由生工生物工程(上海)股份有限公司進(jìn)行雙向測(cè)序。

1.2序列下載

從GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中下載根口水母科3屬6種及口冠水母科1屬1種共7種水母種類175條線粒體COI基因序列，與本研究中的海蜇、越前水母的同源序列共同進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。所分析水母種類的線粒體COI序列片段及其相關(guān)信息見(jiàn)表1。

1.3數(shù)據(jù)分析

對(duì)7種水母共215條序列進(jìn)行系統(tǒng)分析，利用MEGA 3.0軟件[19]基于K2P雙參數(shù)模型計(jì)算單倍型間、種間、屬間和種內(nèi)個(gè)數(shù)間的遺傳距離，并構(gòu)建NJ(Neighbour-Joining)系統(tǒng)樹，采用Bootstrap1000檢驗(yàn)分子系統(tǒng)樹各分支的置信度。利用Modeltest 3.7[20]選擇最佳替代模型，基于Hierarchical Likelihod Ratio Tests (hLRTs)標(biāo)準(zhǔn)，最適替代模型(best-fit evolutionary models)為TVM+I+G。選擇最佳替代模型后分別通過(guò)MrBayes 3.1.2[21]和PAUP* 4.0b10[22]軟件構(gòu)建貝葉斯(Bayesian，BI)一致樹和ML(Maximum Likelihood)系統(tǒng)發(fā)育樹。貝葉斯樹參數(shù)設(shè)置如下：起始樹設(shè)為隨機(jī)樹(random),馬爾科夫鏈的蒙特卡洛方法(Markov Chain Monte Carlo Process，MCMC)設(shè)置為4條鏈，3條熱鏈和1條冷鏈，同時(shí)運(yùn)行1000萬(wàn)代，每1000代取樣一次，其節(jié)點(diǎn)支持率為后驗(yàn)概率(posterior probabilities，PP)，貝葉斯推斷同時(shí)進(jìn)行3次以確保MCMC的收斂；ML樹采用啟發(fā)式搜索(heuristic searches)和樹二等分再連接(tree-bisection-reconnection，TBR)的分支交換法進(jìn)行構(gòu)樹，并采用自展值分析(Bootstrap=20)進(jìn)行檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1序列特征和條形碼間隙

PCR擴(kuò)增得到長(zhǎng)度約650 bp的海蜇、越前水母COI基因同源序列，經(jīng)比對(duì)去掉兩端引物，本研究中分析得到：20條海蜇COI基因同源序列長(zhǎng)度為624 bp，共檢測(cè)到21個(gè)多態(tài)位點(diǎn)，定義了17種單倍型，單倍型間遺傳距離為0.002～0.015，平均遺傳距離為0.007；20條越前水母COI基因同源序列長(zhǎng)度為620 bp，共檢測(cè)到12個(gè)多態(tài)位點(diǎn)，定義了10種單倍型，單倍型間遺傳距離為0.002～0.011，平均遺傳距離為0.006。聯(lián)合來(lái)自GenBank中的其他175條COI基因序列比對(duì)后，獲得長(zhǎng)度為482 bp 的共有序列進(jìn)行分析。T、C、A、G 4種堿基的平均含量分別為36.5%、18.2%、25.3%、20.0%，A+T(61.8%)含量明顯高于G+C(38.2%)含量，與其他水母類COI基因A+T含量高的組成特征相似[13]。除去外類群，在長(zhǎng)度為482 bp的COI基因序列中，保守位點(diǎn)307 個(gè)(63.7%)，變異位點(diǎn)175個(gè)(36.3%)，簡(jiǎn)約性信息位點(diǎn)162個(gè)(33.6%)。

基于線粒體COI序列片段計(jì)算了根口水母科各階元的遺傳距離(表2～表4)?？诠谒缚瓶诠谒笇倥c根口水母科3屬間的遺傳距離平均值為0.211，口冠水母屬與根口水母屬Rhizostoma間的遺傳距離最大值為0.219，口冠水母屬與越前屬Nemopilema間的最小值為0.203；根口水母科不同屬間遺傳差異從0.214到0.233，平均值為0.221，該范圍與口冠水母科與根口水母科不同屬間的分布范圍重疊(表2)。根口水母科6個(gè)種兩兩間的遺傳距離見(jiàn)表3，最小值出現(xiàn)在巨型桶水母種和褐色根口水母種之間(0.065)，最大值出現(xiàn)在巨型桶水母種和越前水母種之間(0.235)，種間遺傳距離平均值為0.198。根口水母科水母COI種內(nèi)遺傳差異為0～0.032，平均值為0.006，種內(nèi)遺傳差異最大的是褐色根口水母，來(lái)自以色列海法灣和地中海西部的不同個(gè)體遺傳差異可達(dá)0.032，而來(lái)自地中海的不同褐色根口水母?jìng)€(gè)體間的遺傳差異僅為0～0.013，揭示了褐色根口水母可能存在種群遺傳結(jié)構(gòu)(表4)。根口水母科水母種內(nèi)、種間遺傳距離存在差異，即存在條形碼間隙(barcode gap)，種間遺傳距離是種內(nèi)遺傳距離的33倍，有利于種的鑒定。

表2 根口水母科COI序列的屬間遺傳距離Tab.2 Genetic distance between genera of inter-family of Rhizostoidae based on the COI sequences

表3 根口水母科COI序列的種間遺傳距離Tab.3 Genetic distance between species of inter-family of Rhizostoidae based on the COI sequences

表4 根口水母科水母COI序列的種內(nèi)個(gè)體間遺傳距離Tab.4 Genetic distance of intra-species in Rhizostoidae based on the COI sequences

2.2系統(tǒng)分析

為得到可靠的結(jié)果，本研究中采用鄰接法(Neighbor-Joining，NJ)、最大似然法(Maximum Likelihood,ML)和貝葉斯法(Bayesian,BI)，以口冠水母為外群構(gòu)建了7種水母的分子進(jìn)化樹(圖1)。樹上各節(jié)點(diǎn)上的數(shù)值分別為統(tǒng)計(jì)分析后對(duì)該分支NJ/BI/ML的支持率。結(jié)果顯示，3種方法構(gòu)建的根口水母科水母分子系統(tǒng)樹的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)圖基本一致，同種不同個(gè)體均各自聚支形成單系群且節(jié)點(diǎn)支持率均較高。根口水母屬3個(gè)近緣種聚為一個(gè)單系群并得到較高的分支節(jié)點(diǎn)支持率，海蜇屬不同物種之間未形成單系群，而是在進(jìn)化樹上形成了2個(gè)小分支，然后再與越前屬聚支，且分支節(jié)點(diǎn)支持率都較低，這與Prieto 等[6]利用相同基因片段以及Funahashi 等[23]利用線粒體全基因序列對(duì)根口水母科水母構(gòu)建的NJ或ML系統(tǒng)樹的結(jié)果類似。此外，分子進(jìn)化樹揭示了地理分布相近的根口水母科種類優(yōu)先聚支，譬如分布于地中海及大西洋的根口水母屬種類優(yōu)先與分布于地中海的海蜇屬種類聚在一起，然后再與分布于西北太平洋的海蜇以及越前水母屬聚支，分布于西北太平洋的越前水母屬與同域分布的海蜇屬種類表現(xiàn)出的親緣關(guān)系更近。

圖1 基于COI片段以口冠水母為外群構(gòu)建的根口水母科水母NJ/BI/ML系統(tǒng)樹Fig.1 Phylogenetic tree of the family Rhizostoidae inferred from NJ/BI/ML methods using COI gene sequences

3 討論

3.1COI在根口水母科水母物種鑒定中的適用性

對(duì)許多物種而言，線粒體COI基因片段易于獲得且具有良好的系統(tǒng)發(fā)育信息，是目前用于物種鑒定及系統(tǒng)進(jìn)化研究最常用的分子標(biāo)記[6，12-13，15，18]。自Hebert 等[24-25]提出以COI基因片段作為物種鑒定的DNA 條形碼以來(lái)，其在物種鑒定中的有效性已在不同生物的研究中得到越來(lái)越多的驗(yàn)證[12-13]，其在水母物種鑒定中的有效性也已得到有效檢驗(yàn)[12-14]。但之前的研究或者是針對(duì)較高分類階元如科及以上水母種類的物種鑒定，物種種類較多且親緣關(guān)系較遠(yuǎn)；或者所分析的樣品數(shù)量較少，容易導(dǎo)致誤差的產(chǎn)生。GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中的水母樣品雖不知具體地理來(lái)源，但仍可將其用于種內(nèi)遺傳距離計(jì)算及系統(tǒng)分析。因此，本研究中分析了海蜇、越前水母各20個(gè)樣品并聯(lián)合來(lái)自GenBank中的其他175條線粒體COI基因同源序列對(duì)水母類科以下分類階元根口水母科3屬6種及口冠水母科1屬1種進(jìn)行分析，結(jié)果表明，其種間遺傳距離范圍為0.065～0.235，平均值為0.198；種內(nèi)遺傳范圍為0～0.032，平均值為0.006，種間遺傳距離是種內(nèi)的33倍，且各物種間遺傳距離均大于Hebert[24-25]推薦區(qū)分物種的最小種間遺傳距離0.02，表明COI基因序列在較小的分類階元如科以下仍可對(duì)水母進(jìn)行有效的物種DNA鑒定。

3.2根口水母科水母的系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系

基于分子標(biāo)記構(gòu)建水母的分子系統(tǒng)關(guān)系方面的研究，已有Bayha等[16]和李玉龍等[17]等分別利用18S、28S、ITS-5.8S rDNA序列分析了48種和18種水母的系統(tǒng)關(guān)系，但上述研究所用的分子標(biāo)記都為核基因標(biāo)記，且主要針對(duì)缽水母綱的分子系統(tǒng)關(guān)系。程方平等[13]利用COI基因片段對(duì)中國(guó)北方常見(jiàn)水母類的DNA條形碼進(jìn)行了分析，但其研究的對(duì)象是科以上及更高的分類階元，由于較高分類階元不同水平遺傳距離存在重疊，其分子系統(tǒng)關(guān)系由于基因突變飽和而無(wú)法得到正確解析，而且程方平等[13]的研究中包含的根口水母科的種類較少。

根口水母是缽水母綱中進(jìn)化最為高等的類群，大多分布于熱帶至亞熱帶海域，早在5 億多年前的寒武紀(jì)就已出現(xiàn)[5，26-27]。因其具有漫長(zhǎng)的進(jìn)化歷史且仍有很多種類未被發(fā)現(xiàn)[5]，有關(guān)根口水母科水母的系統(tǒng)分類一直存在爭(zhēng)議。 1961年Kramp等[1]在前人分類的基礎(chǔ)上根據(jù)口腕有無(wú)附屬物、肩板大小和垂管長(zhǎng)短等將其分為真水母屬、根口水母屬和海蜇屬3屬，但Kramp等[1]懷疑真水母屬的存在，認(rèn)為其是海蜇屬受損壞、不完整的標(biāo)本，且將越前水母認(rèn)為是口冠水母的同種異名，造成了分類上的混亂。2004年，Omori等[3]將兩個(gè)物種重新對(duì)比后認(rèn)為，越前水母與口冠水母系不同屬、種，應(yīng)將其回歸為原來(lái)的越前水母屬，隨后分子生物學(xué)的證據(jù)[28-29]也表明，越前水母與口冠水母為不同的種，形成目前較普遍認(rèn)可的根口水母科4屬9種的觀點(diǎn)[4-5]。Hanzawa等[12]根據(jù)COI條形碼將曾被認(rèn)為是海蜇同種異名的Rhopilemaasamushi提升為有效種，至此根口水母科水母已增加至4屬10種。

線粒體COI基因不僅是進(jìn)行物種鑒定的DNA條形碼，而且是分子系統(tǒng)進(jìn)化研究有效的分子標(biāo)記。因此，本研究中基于COI條形碼序列以口冠水母為外群分析了根口水母科3個(gè)屬間的系統(tǒng)關(guān)系，結(jié)果表明，用3種方法構(gòu)建的系統(tǒng)樹拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)基本一致，但與形態(tài)分類的結(jié)果并不一致。基于COI序列的系統(tǒng)樹中，同種不同個(gè)體各自聚支形成單系群，各物種所代表的節(jié)點(diǎn)支持率均較高。在屬內(nèi)種間分類關(guān)系中，根口水母屬的水母種類聚在一起形成單系群并得到較高的節(jié)點(diǎn)支持率(>0.9)，而海蜇屬水母在進(jìn)化樹上形成2個(gè)分散的獨(dú)立分支(Ⅰ:地中海，Ⅱ:西北太平洋)，且兩個(gè)分支分別與同域分布的根口水母屬及越前水母屬水母親緣關(guān)系更近，但各分支的節(jié)點(diǎn)支持率都較低。該結(jié)果與近幾年利用相同基因片段以及利用線粒體全基因序列對(duì)根口水母科水母進(jìn)行系統(tǒng)分析的研究報(bào)道一致[6,12]。基于線粒體COI基因片段計(jì)算根口水母科各階元的遺傳距離也表現(xiàn)出相同的趨勢(shì)，同域分布水母種類間遺傳距離差異更小，如分布于地中海的根口水母屬水母Rhizostomaluteum與地中海水母Rhopilemanomadica間的遺傳距離(0.197)甚至小于其與同屬海蜇間的遺傳距離(0.209,表3)。

此外，本研究中還發(fā)現(xiàn)，與其他海洋動(dòng)物相比基于線粒體COI基因片段計(jì)算的根口水母科水母種間的遺傳差異較大(0.065～0.235)，這可能與其漫長(zhǎng)的進(jìn)化歷史有關(guān)，在進(jìn)化過(guò)程中由于地理隔離逐漸演變成不同的水母種類且產(chǎn)生較大的分化。本研究結(jié)果表明，COI基因序列即使在較小的分類階元如種、屬水平上可能也并不適合解析水母種類的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系，想要更加全面準(zhǔn)確地了解根口水母科水母物種分類及系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系，尚需采集更多的樣品，利用多個(gè)分子標(biāo)記序列進(jìn)行分析并結(jié)合形態(tài)學(xué)與解剖學(xué)的數(shù)據(jù)才能得以有效解決。

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PhylogeneticrelationshipofRhizostomatidaebasedonCOIbarcodingmarker

LI Yu-long, WANG Bin, SUN Ming, WANG Xiao-lin, YU Xu-guang, LI Yi-ping, FU Jie, WANG Wen-bo, DONG Jing

(Key Laboratory of Marine Biological Resources and Ecology in Liaoning Province, Liaoning Ocean and Fisheries Science Research Institute, Dalian 116023, China)

The 482 bp COI was sequenced in 265 individuals sampled from 7 species in 4 genera in Rhizostomatidae, the genetic distances in inter-and intra-species were calculated by MEGA 3.0, and the molecular phylogenetic trees were constructed using Neighbor- Joining, Bayesian inference and Maximum Likelihood methods to investigate the feasibility of COI sequences as DNA barcodes to identify species in Rhizostomatidae. The results showed that the inter-species genetic distance was changed from 0.065 to 0.235, with average of 0.198, while the intra-species genetic distance was varied from 0 to 0.032, with average of 0.006, 32 times higher than that in intra-species. Moreover, each inter-species genetic distance value is higher than the minimum species identification value 0.02 proposed by Hebert. The phylogenic analysis showed that the topology of the Neighbor-Joining tree, Maximum Likelihood tree and the Bayesian tree was consistent each other and individuals of each species formed an independent monophyletic group, indicating that COI was of an effective barcode gene for accurate identification of species among Rhizostomatidae. Meanwhile, the phylogenetic trees showed thatRhopilemajellyfishes are non-monophyletic and different from morphological taxonomy. In conclusion, COI is highly divergent among different jellyfishes in Rhizostomatidae and is an appropriate marker for species identification and population studies at the species level in Rhizostomatidae.

DNA barcode; COI gene; Rhizostomatidae; phylogeny

10.16535/j.cnki.dlhyxb.2017.05.004

2095-1388(2017)05-0520-06

S917

A

2017-03-09

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31770458,31400406);國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目(2017YFC1404400)

李玉龍(1981—)，男，副研究員。E-mail：liyudragon@126.com

董婧(1966—)，女，研究員。E-mail：1024470248@qq.com