戴鵬秀 ， 馬琳珊 ， 高永平 ， 宮曉文 ， 張翊華 ， 張欣珂

(西北農(nóng)林科技大學 ， 陜西 楊凌 712100)

西安周邊流浪動物救助中心犬牙科疾病調(diào)查報告

戴鵬秀 ， 馬琳珊 ， 高永平 ， 宮曉文 ， 張翊華 ， 張欣珂

(西北農(nóng)林科技大學 ， 陜西 楊凌 712100)

犬的牙科疾病具有較高的臨床發(fā)病率，但由于未得到臨床獸醫(yī)和動物主人的足夠重視，往往引起牙齒脫落等嚴重后果，甚至引發(fā)其他系統(tǒng)性疾病。為了初步明確犬牙科疾病的流行病學特征，本研究針對西安市某流浪動物救助中心內(nèi)的130只犬進行了完整的牙科檢查，并在其中隨機選取動物進行口腔細菌分離鑒定。流行病學調(diào)查結果顯示，該中心內(nèi)犬只以牙結石發(fā)病率最高，其次為牙齦炎、牙周炎、牙齒過度磨損及齒折；口腔細菌分離鑒定得到細菌37株，包括革蘭陽性需氧菌3個菌屬的10株菌，革蘭陰性需氧菌9個菌屬的21種菌，3個菌屬的6種厭氧菌。分離到的細菌中條件性致病菌占大多數(shù)。

流浪犬 ； 牙科疾病 ； 臨床調(diào)查 ； 口腔病原菌分離

小動物牙科疾病具有發(fā)病率高，發(fā)病隱蔽等特點，因此往往得不到足夠的重視。隨著病程的發(fā)展，常引起口炎、疼痛、進食困難、口腔異味、流涎等癥狀，嚴重的還可導致胃腸道、心血管、腎臟等其他系統(tǒng)性疾病[1-2]。犬作為雜食性動物，其采食習慣、動物主人飼養(yǎng)習慣等因素會加大牙科疾病的發(fā)病率和嚴重程度[3]。在對犬的研究中發(fā)現(xiàn)，牙菌斑與牙周疾病，尤其是牙齦疾病呈正相關關系，牙菌斑和牙結石對牙周組織造成的刺激會導致嚴重的炎癥[1,4]。并且隨著犬年齡的增長，牙齒折斷或磨損加重，由細菌引起的牙科疾病發(fā)病率還會升高[5]。

對于本地區(qū)犬牙科疾病的流行病學調(diào)查仍處于空白階段，臨床醫(yī)生缺乏一手資料學習相關疾病的預防及治療方法。鑒于此，本調(diào)查針對西安市某流浪動物救助中心內(nèi)的130只犬進行了詳細的牙科檢查，統(tǒng)計并分析了各類牙科疾病的發(fā)病率及發(fā)病特征，同時對部分犬采集了牙菌斑樣本，進行后續(xù)的分離培養(yǎng)以及API生化鑒定、PCR鑒定，以期為本地區(qū)犬牙科疾病的診療提供理論依據(jù)，并對流浪動物救助機構的動物飼養(yǎng)管理提供建議和指導。

1 試驗動物

本研究樣本來自于西安市某流浪動物救助中心所救助的犬，所有犬只均來自西安市及周邊地區(qū)的流浪犬或棄養(yǎng)犬，其中71%的犬為成年犬，29%的犬為老年犬。

2 方法

2.1 牙科檢查 牙科檢查項目包括：牙齦炎指標(GI)、牙周組織指標(PDI)、牙結石指標(CI)、齒折指標(FrI)、牙齒磨損情況(TW)、齒缺等。

2.2 牙菌斑病原菌分離鑒定 在犬絕育手術麻醉期間使用滅菌的牙科刮匙對其牙菌斑進行取樣，并將樣本接種于不同的培養(yǎng)基，于37 ℃培養(yǎng)箱中進行初代培養(yǎng)，對平板上長出的菌落種類及相對數(shù)量進行觀察，記錄菌落的顏色、大小、凸起和表面性狀等特性。根據(jù)菌落生長的形態(tài)、大小、邊緣形狀、溶血特性等形態(tài)和培養(yǎng)特性上的不同，區(qū)分不同菌落，并挑取單個菌落進行純培養(yǎng)，培養(yǎng)條件同初代培養(yǎng)。取單個菌落于LB液體培養(yǎng)基，37 ℃，180 r/min搖床進行過夜培養(yǎng)。

使用接種環(huán)挑取適量的分離菌純培養(yǎng)物進行革蘭染色，油鏡觀察。根據(jù)觀察結果選取不同的API試劑對細菌進行鑒定，使用API Staph對革蘭陽性球菌進行鑒定，使用API Coryne對革蘭陽性桿菌進行鑒定，使用API 20E對革蘭陰性桿菌進行鑒定，使用API NH對嗜血菌、奈瑟菌進行鑒定，使用API 20A對厭氧菌進行鑒定。

以菌液作為PCR的模板，選用16S rRNA通用引物[8](27F：5′-AGAGTTTGATCATGGCTCAG-3′，1492R：5′-TAGGGTTACCTTGTTACGACTT-3′；1F：5′-GATTAGATACCCTGGTAGTCCAC-3′，1R：5′-CCCGGGAACGTATTCACCG-3′)進行PCR擴增。使用DNA純化回收試劑盒對PCR產(chǎn)物進行DNA片段回收及測序，測序結果于NCBI上進行比對。

3 結果

3.1 牙科檢查結果 本次對救助中心的130只犬進行了牙科檢查(檢查統(tǒng)計結果見圖1)。結果發(fā)現(xiàn)81.5%的犬患有不同程度的牙結石，70.8% 的犬患有牙齦炎；而牙周炎的發(fā)病率為55.4%。同時發(fā)現(xiàn)牙齒出現(xiàn)磨損的情況較多，為57.0%，且磨損大多為1～2級，下頜切齒磨損較為嚴重。另外，在檢查中發(fā)現(xiàn)有11只犬患有口炎，8只犬患有多生齒，19只犬具有咬合不正的問題。

圖1 牙科疾病檢查統(tǒng)計

3.2 牙菌斑病原分離鑒定結果 本調(diào)查研究針對130只救助犬只的24個樣本進行分離，通過生化及分子學鑒定得到37個菌株(見圖2)，試驗結果如下：

圖2 牙菌斑病原分離鑒定結果

(1)革蘭陽性需氧菌共發(fā)現(xiàn)3個菌屬的10種革蘭陽性需氧菌，包括葡萄球菌屬(金黃色葡萄球菌、偽中間型葡萄球菌、馬胃葡萄球菌、溶血性葡萄球菌、科氏葡萄球菌、腐生葡萄球菌、琥珀葡萄球菌)、腸球菌屬(糞腸球菌)、放線菌屬(黏性放線菌、溶齒放線菌)。

(2)革蘭陰性需氧菌共發(fā)現(xiàn)9個菌屬的21種革蘭陰性需氧菌，包括埃希菌屬(大腸埃希菌)、奈瑟菌屬(腦膜炎奈瑟球菌、淋病奈瑟球菌、黏液奈瑟球菌)、不動桿菌屬(溶血不動桿菌、約氏不動桿菌、魯氏不動桿菌、瓊氏不動桿菌)、蒼白桿菌屬(中間蒼白桿菌)、假單胞菌屬(惡臭假單胞菌、熒光假單胞菌、銅綠假單胞菌)、沙門菌屬(腸道沙門菌)、嗜冷菌屬(肺嗜冷桿菌、糞嗜冷桿菌)、志賀菌屬(索氏志賀菌屬、弗氏志賀菌屬)、巴斯德菌屬(犬巴斯德菌、侵肺巴斯德菌、多殺性巴斯德菌、溶血巴斯德菌)。

(3)厭氧菌共發(fā)現(xiàn)3個菌屬的6種厭氧菌，包括擬桿菌屬(普通擬桿菌、多形擬桿菌、解脲擬桿菌、埃氏擬桿菌)、鏈球菌屬(厭氧消化鏈球菌)、短桿菌屬(乳酸短桿菌)。

4 討論

4.1 牙科疾病分析 犬在進食后，牙齒表面會附著一定量的粘性食物殘渣，在微生物與唾液的長期作用下形成牙菌斑，牙菌斑進一步鈣化形成結石樣物質覆蓋在牙齒表面而形成牙結石[9]。牙結石對牙周深層組織的蔓延引起的牙齦黏膜的炎癥稱為牙齦炎，當牙齦炎繼續(xù)發(fā)展而得不到治療時就會發(fā)展為牙周炎，并出現(xiàn)不可逆的癥狀及病變，牙周骨組織丟失、牙齦的腫脹或萎縮牙周袋形成是牙周炎最重要的病理性改變[1]。這些牙科疾病可以引發(fā)嚴重的口腔異味、齒齦出血、齲齒、齒折與齒根膿腫等癥狀，犬表現(xiàn)為輕度食欲減退，進食困難甚至發(fā)展為停止進食，隨后動物可能出現(xiàn)消瘦和營養(yǎng)不良[9]。本次對西安市某流浪動物救助中心救助的犬進行牙科檢查發(fā)現(xiàn)，大部分的犬患有牙結石，牙齦炎，牙周炎等問題，個別犬只因為這些問題已出現(xiàn)食欲減退等問題。該救助中心在本次調(diào)查研究之前一直給動物飼喂用雞骨架湯泡軟的狗糧，偏軟性的食物容易導致食物粘附在牙齒表面和牙周袋內(nèi)，引發(fā)各類口腔問題。此外，由于該中心飼養(yǎng)的犬只數(shù)量過多，以及其他多方面條件的限制，無法對所有動物進行應有的口腔護理，中心管理人員也沒有對該類疾病有充分的認識。這些因素共同導致了中心內(nèi)動物牙周疾病的高發(fā)病率。目前，此動物救助中心已經(jīng)針對這一情況通過飲食結構改變以及改善管理來減少犬牙科疾病的發(fā)生，并且后期會根據(jù)犬只的牙齒疾病情況而制定具體的治療措施。

動物牙齒磨損的程度與多種因素有關，諸如動物的食性、行為、年齡及環(huán)境等都是其重要誘發(fā)因素，其嚴重程度與年齡呈正相關。引起犬發(fā)生齒折的原因主要有兩個：外力作用或鈣攝人不足。在本次調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，有超過50%的犬牙齒出現(xiàn)不同程度的磨損，這可能與犬只的年齡結構有關；齒折的發(fā)生率相對較低，這可能是因為流浪動物救助中心對于所救助的犬實行分舍飼養(yǎng)，輪流活動，這很大程度上避免或減少了犬只之間的打斗，從而降低了齒折及其他外傷的發(fā)生概率。而救助中心對于犬的飼喂，做到了營養(yǎng)充足甚至過量，因此由鈣攝入不足而引起齒折的發(fā)生率非常小，所以這些犬的齒折問題大都是由于啃咬舍門造成或者是在進入救助中心之前就已發(fā)生齒折。

4.2 牙菌斑病原菌與牙科疾病 犬的口腔內(nèi)聚積著大量各種各樣的微生物，這些微生物的組成結構非常復雜，其中包含大量不同種類及不同毒性的細菌，這為牙菌斑(粘附于牙體表面、牙齒間隙等硬的口腔結構表面軟而未礦化的細菌生物膜)的形成提供了重要條件[10]。牙菌斑的形成大致可分為獲得性薄膜的形成、細菌的粘附和集聚以及牙菌斑的成熟這3個階段，其是牙周病的重要致病因素[11]。本次調(diào)查對取自被救助的流浪犬的24個牙菌斑樣本進行了病原菌分離鑒定，并對37個菌株進行了生化及分子學鑒定。其中包括革蘭陽性需氧菌的3個菌屬10種菌、革蘭陰性菌的9個菌屬21種菌以及3個菌屬的6種厭氧菌，這些菌屬及菌株與之前人、犬、貓的口腔病原菌的研究較為接近。

大多數(shù)常見的口腔感染包括牙周病、牙髓炎及牙根尖周炎與口腔中積聚的牙菌斑及牙結石密切相關，這些病理過程往往是由于細菌引起[10]。動物試驗表明，鏈球菌屬和放線菌屬均可誘導牙周的骨吸收，并且放線菌常作為球菌粘附的支架，參與并加速牙菌斑形成，厭氧消化鏈球菌是口腔中的條件致病菌，可從牙周炎、牙髓炎等牙科疾病的臨床標本中分離出來[12]。假單胞菌在環(huán)境中大量存在，也屬于條件性致病菌，但在口腔環(huán)境正常的犬中，其檢出率較低[13]。在本次的調(diào)查中均鑒定出了上述致病菌，這些致病菌的存在會進一步導致犬牙科疾病的發(fā)展，應給予及時的治療。犬口腔中的不動桿菌在一定條件下可引起呼吸道感染、腦膜炎、心內(nèi)膜炎、傷口及皮膚感染、泌尿生殖道感染等[14]，在本次調(diào)查研究中同樣被檢出。同時某些致病性葡萄球菌(如：金黃色葡萄球菌、偽中間葡萄球菌、腐生葡萄球菌)，致病性巴斯德菌(如：溶血巴斯德菌、侵肺巴斯德菌)也被檢出[14]。上述細菌可能是引起犬其他疾病的重要因素，包括呼吸系統(tǒng)疾病、心血管系統(tǒng)疾病、泌尿系統(tǒng)疾病等[15]。同時，這些細菌也可通過被犬咬傷，與犬親密接觸等途徑引發(fā)嚴重的感染而威脅到人的健康和安全。綜上所述，救助中心所救助的犬口腔中的微生態(tài)平衡大多已遭到一定程度的破壞，因此在治療犬牙科疾病時，不能僅僅通過飲食結構改變以及改善管理來減少犬牙科疾病的發(fā)生，應該結合特定的治療方法，恢復正常菌群的比例和作用，從而達到預期效果。

5 結論

本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)此流浪動物救助中心所救助的犬口腔中的微生態(tài)平衡已遭到一定程度的破壞，絕大多數(shù)犬患有牙結石、牙齦炎及牙周病等牙科疾病，牙齒磨損情況較多，但齒折的發(fā)生相對較少。因此此流浪動物救助中心應根據(jù)犬只的牙科疾病情況改善飼養(yǎng)方式，并進一步制定具體的預防及治療措施，也希望此調(diào)查結果能夠為家養(yǎng)犬牙科疾病的診斷和治療提供參考。

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S858.292

B

0529-6005(2017)09-0082-03

2017-04-25

戴鵬秀(1991-)，男，博士生，研究方向為動物臨床疾病與組織工程，E-mail:dpx910405@163.com

張欣珂，E-mail:zhxk1983@sina.com