戴光文，吳穎航，陳雪英，江精華，韋邦偉，謝麗華

（1.梧州市動物疫病預(yù)防控制中心，廣西梧州 543002；2. 梧州市水產(chǎn)畜牧試驗場，廣西梧州 543002）

2015—2016年廣西梧州市主要病毒性豬病的檢測與分析

戴光文1，吳穎航1，陳雪英2，江精華1，韋邦偉1，謝麗華1

（1.梧州市動物疫病預(yù)防控制中心，廣西梧州 543002；2. 梧州市水產(chǎn)畜牧試驗場，廣西梧州 543002）

采用RT-PCR及PCR技術(shù)，對廣西梧州市7個縣（市、區(qū)）屠宰場2015—2016年送檢的1 304份豬組織樣品（肺臟、淋巴結(jié)、脾臟）進(jìn)行高致病性藍(lán)耳病病毒（HPRRSV）、豬瘟病毒（CSFV）核酸檢測，對7個規(guī)模場送檢的70份病死豬組織病料樣品（肺臟、淋巴結(jié)、脾臟）進(jìn)行HPRRSV、CSFV、偽狂犬病病毒（PRV）、圓環(huán)病毒（PCV）核酸檢測。采用ELISA技術(shù)，對梧州市7個縣（市、區(qū)）送檢的8 572份血清檢測豬瘟免疫抗體，對2 066份血清檢測豬藍(lán)耳病免疫抗體。結(jié)果顯示：HPRRSV、CSFV核酸檢測均為陰性；規(guī)模場病死豬組織病料的PRV核酸陽性率為14.3%，PCV為57.1%；豬瘟免疫抗體合格率為90.41%，藍(lán)耳病免疫抗體合格率為73.48%。監(jiān)測結(jié)果表明：梧州市流行的生豬高熱病主要涉及豬偽狂犬病和豬圓環(huán)病毒病2種病毒?。回i藍(lán)耳病和豬瘟的強制免疫，有效控制了該地主要豬病毒性疫病的發(fā)生與流行。

主要病毒性豬??；高致病性藍(lán)耳病；豬瘟；偽狂犬??；圓環(huán)病毒病

豬瘟病毒（CSFV）、高致病性豬藍(lán)耳病病毒（HPRRSV）、豬圓環(huán)病毒（PCV）、豬偽狂犬病病毒（PRV）是目前危害豬場最為嚴(yán)重的4種傳染病病原，其均能導(dǎo)致豬群免疫力下降或免疫應(yīng)答反應(yīng)差，常引起豬高熱病，造成豬群生長緩慢或停滯、病殘和死亡豬只數(shù)量增多，飼料效率、生長速度和豬群整體均勻度降低，給豬場造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。為掌握廣西梧州市CSFV、HPRRSV、PCV和PRV感染情況及免疫保護(hù)效果，采用PCR、RT-PCR與ELISA方法開展監(jiān)測，從而給這些疫病的科學(xué)防控提供決策依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品

1.1.1 組織樣品。對2015—2016年梧州市7個縣（市、區(qū)）屠宰場送檢的1 304份豬組織（肺臟、淋巴結(jié)、脾臟）樣品進(jìn)行CSFV、HPRRSV檢測；對7個商品代飼養(yǎng)場送檢的70份患高熱病死亡豬的組織病料（肺臟、淋巴結(jié)、脾臟）樣品進(jìn)行CSFV、HPRRSV、PRV、PCV檢測。每份樣品包括頜下淋巴結(jié)2個、脾臟50 g和肺臟50 g。

1.1.2 血清樣品。對2015—2016年梧州市7個縣（市、區(qū)）的規(guī)模場和散養(yǎng)戶送檢的8 572份血清樣品檢測豬瘟抗體，對2 066份樣品檢測豬藍(lán)耳病抗體。每份血清樣品不少于2 mL，并且清亮、無融血。對血清樣品冷凍保存，冷藏送檢。

1.2 檢測試劑

1.2.1 病原檢測試劑盒。豬瘟病毒RT-PCR檢測試劑盒、高致病性藍(lán)耳病病毒RT-PCR檢測試劑盒、偽狂犬病病毒PCR檢測試劑盒、豬圓環(huán)病毒PCR檢測試劑盒，均購自廣州維伯鑫生物科技有限公司。

1.2.2 抗體檢測試劑盒。豬瘟抗體檢測試劑盒，購自韓國金諾公司；豬藍(lán)耳病抗體檢測試劑盒，購自法國LSI公司。

1.3 檢測方法

對CSFV，采用《豬瘟防治技術(shù)規(guī)范》（農(nóng)醫(yī)發(fā)〔2007〕12號）中的反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RTPCR）；對HPRRSV，采用《豬繁殖與呼吸綜合征診斷方法》（GB/T 18090—2008）中的反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)試驗（RT-PCR）；對PCV，按照《豬圓環(huán)病毒聚合酶鏈反應(yīng)試驗方法》（GB/T 21674—2008）中的規(guī)定進(jìn)行；對PRV，按照《偽狂犬病診斷技術(shù)聚合酶鏈反應(yīng)方法》（GB/T18641—2002）中的規(guī)定進(jìn)行。對豬瘟抗體，采用《豬瘟防治技術(shù)規(guī)范》（農(nóng)醫(yī)發(fā)〔2007〕12號）中的豬瘟病毒抗體阻斷ELISA檢測方法；對豬繁殖和呼吸綜合征（藍(lán)耳?。┛贵w，采用《豬繁殖與呼吸綜合征診斷方法》（GB/T 18090—2008）中的間接酶聯(lián)免疫吸附試驗（間接ELISA）。

2 結(jié)果與分析

2.1 核酸RT-PCR擴增結(jié)果

2.1.1 HPRRSV核酸RT-PCR擴增結(jié)果。應(yīng)用RT-PCR 方法。陽性質(zhì)控品出現(xiàn)124 bp條帶，陰性質(zhì)控品不出現(xiàn)條帶或出現(xiàn)條帶片段較小的引物二聚體條帶，實驗結(jié)果成立。若被檢樣品出現(xiàn)124 bp條帶，判斷為陽性，否則為陰性。RT-PCR 擴增產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果見圖1。

圖1 HPRRSV RT-PCR檢測結(jié)果

2.1.2 HPRRSV臨床樣品檢測結(jié)果與分析。對屠宰場及規(guī)模豬場采集的42批次1 374份組織樣品進(jìn)行HPRRSV核酸檢測，發(fā)現(xiàn)均為陰性（表1、表2）；對種豬場、商品代飼養(yǎng)場及農(nóng)村散養(yǎng)戶采集的111批次2 066份血清樣品進(jìn)行豬藍(lán)耳病免疫抗體檢測，發(fā)現(xiàn)個體免疫合格1 518份，個體免疫合格率為73.48%，群體合格72個，群體合格率為64.86%。檢測結(jié)果說明，實施強制免疫，提高免疫質(zhì)量，對于控制豬藍(lán)耳病的發(fā)生及流行起到了一定的效果。

表1 屠宰場組織樣品HPRRSV檢測結(jié)果

表2 規(guī)模豬場病死豬組織樣品HPRRSV檢測結(jié)果

2.1.3 豬藍(lán)耳病免疫抗體檢測結(jié)果與分析。2015—2016年，共在102個商品代飼養(yǎng)場、1個種豬場和8個散養(yǎng)戶，抽檢111批2 066份血清樣品進(jìn)行豬藍(lán)耳病免疫抗體檢測，檢出陽性樣品1 518份，抗體合格率為73.48%，群體合格率為72%（表3）。檢測結(jié)果表明，梧州市的豬群藍(lán)耳病免疫效果較好，抗體合格率達(dá)到了農(nóng)業(yè)部規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)（70%以上）。

表3 豬藍(lán)耳病免疫抗體檢測結(jié)果

2.2 CSFV檢測與分析

2.2.1 CSFV核酸RT-PCR擴增結(jié)果。應(yīng)用RTPCR 方法。陽性質(zhì)控品出現(xiàn)142 bp條帶，陰性質(zhì)控品不出現(xiàn)條帶或出現(xiàn)條帶片段較小的引物二聚體條帶，實驗結(jié)果成立。若被檢樣品出現(xiàn)142 bp條帶，判斷為陽性，否則為陰性。RT-PCR 擴增產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果見圖2。

圖2 CSFV RT-PCR檢測結(jié)果

2.2.2 CSFV臨床樣品檢測結(jié)果與分析。2015—2016年，從屠宰場采集35批次1 304份組織樣品，從7個商品代飼養(yǎng)場采集70份病死豬組織樣品，進(jìn)行CSFV核酸檢測，未發(fā)現(xiàn)陽性樣品（表4、表5）。

2.2.3 豬瘟免疫抗體檢測結(jié)果與分析。2015—2016年，從屠宰場及規(guī)模豬場采集42批次1 374份組織樣品進(jìn)行CSFV核酸檢測，發(fā)現(xiàn)均為陰性；對種豬場、商品代飼養(yǎng)場、市場、屠宰場及農(nóng)村散養(yǎng)戶采集500批次8 572份豬血清樣品進(jìn)行豬瘟免疫抗體檢測，發(fā)現(xiàn)個體免疫合格7 750份，個體免疫合格率為90.41%，群體合格472個，群體合格率為94.40%（表6）。該結(jié)果表明，梧州市的豬瘟免疫效果較好，說明強制免疫可防止CSFV的感染，有助于控制豬瘟的發(fā)生及流行。

表4 屠宰場組織樣品CSFV檢測結(jié)果

表5 商品代飼養(yǎng)場病死豬組織樣品CSFV檢測結(jié)果

表6 豬瘟免疫抗體檢測結(jié)果

2.3 PRV檢測與分析

2.3.1 PRV核酸PCR擴增結(jié)果。應(yīng)用PCR 方法。陽性質(zhì)控品出現(xiàn)148 bp條帶，陰性質(zhì)控品不出現(xiàn)條帶或出現(xiàn)條帶片段較小的引物二聚體條帶，則實驗結(jié)果成立。若被檢樣品出現(xiàn)148 bp條帶，判斷為陽性，否則為陰性。PCR 擴增產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果見圖3。

2.3.2 PRV臨床樣品檢測結(jié)果與分析。2015—2016年，共對7個商品代飼養(yǎng)場的70份病死豬組織病料樣品進(jìn)行PRV病毒核酸檢測，2015年從1個商品代飼養(yǎng)場的10份樣品中檢出PRV核酸陽性，檢出率為14.3%（表7）。該結(jié)果說明梧州市仍有豬偽狂犬病疫情發(fā)生，需引起關(guān)注。

圖3 PRV PCR檢測結(jié)果

表7 商品代飼養(yǎng)場樣品PRV檢測結(jié)果

2.4 PCV檢測與分析

2.4.1 PCV核酸PCR擴增結(jié)果。應(yīng)用PCR 方法。陽性質(zhì)控品出現(xiàn)124 bp條帶，陰性質(zhì)控品不出現(xiàn)條帶或出現(xiàn)條帶片段較小的引物二聚體條帶，實驗結(jié)果成立。若被檢樣品出現(xiàn)124 bp條帶，判斷為陽性，否則為陰性。PCR 擴增產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果見圖4。

圖4 PCV PCR檢測結(jié)果

2.4.2 PCV臨床樣品檢測結(jié)果與分析。2015—2016年，共對7個商品代飼養(yǎng)場70份病死亡豬組織病料樣品進(jìn)行PCV核酸檢測，從2015年3個商品代飼養(yǎng)場及2016年1個商品代飼養(yǎng)場的40份樣品中檢出PCV核酸陽性，檢出率為57.1%（表8）。這說明梧州市的豬圓環(huán)病毒病發(fā)病率較高，是目前該地區(qū)豬場存在的主要病毒病。

表8 商品代飼養(yǎng)場病死豬組織樣品的PCV檢測結(jié)果

3 討論

豬高熱病不是某一特定豬病，是指具有高熱癥狀的一系列豬病的總稱。其病原分為病毒、細(xì)菌、寄生蟲3類。其中，病毒以PRRSV、PCV、CSFV、PRV以及豬流感病毒（SIV）等為主[1]；發(fā)病豬群以冬末春初的保育仔豬為主[2]。對疑似高熱病發(fā)病死亡豬組織病料進(jìn)行上述相關(guān)病毒的核酸檢測表明，梧州市流行的生豬高熱病中，主要涉及豬偽狂犬病和豬圓環(huán)病毒病2種病毒病，且多以單病種發(fā)病，未發(fā)現(xiàn)混合感染。

以RT-PCR來監(jiān)控HPRRSV、CSFV是可行的[3]。日常監(jiān)測未發(fā)現(xiàn)陽性樣品的結(jié)果說明強制免疫對于控制疫病發(fā)生及流行具有一定的效果。但鑒于樣品量不夠、采樣地點不全面、抽樣限制等因素，不排除臨床上存在高致病性豬藍(lán)耳病和豬瘟的可能。種豬場、商品代飼養(yǎng)場及農(nóng)村散養(yǎng)戶的豬藍(lán)耳病和豬瘟免疫抗體，經(jīng)檢測均達(dá)到了國家規(guī)定的免疫抗體合格率70%以上的標(biāo)準(zhǔn)。這可以有效阻斷疫病的傳播與流行[4]。

近年來，豬圓環(huán)病毒病和豬偽狂犬病發(fā)病率較高，對養(yǎng)豬業(yè)危害較大。目前國際上對豬偽狂犬病的控制和根除主要依靠接種基因缺失疫苗和與之相配套的鑒別診斷方法。針對豬圓環(huán)病毒病和豬偽狂犬病，現(xiàn)在我國對種豬主要采取凈化措施，對商品豬采取免疫措施。目前商品豬場及散養(yǎng)戶在防控豬圓環(huán)病毒病方面，除了謹(jǐn)慎引種，嚴(yán)格衛(wèi)生防疫消毒制度，做好滅蚊、滅蠅、滅鼠等工作外，重要的是還要使用高效、優(yōu)質(zhì)疫苗免疫，定期進(jìn)行抗體監(jiān)測。

[1] 蘇雙，任銳，呂雪峰，等. 我國豬高熱病的流行現(xiàn)狀、流行趨勢與防制對策[J]. 吉林畜牧獸醫(yī)，2010，31（5）：5-7.

[2] 柳金雄，李曉成，劉道新，等. 湖南省豬瘟流行病學(xué)調(diào)查和分析[J]. 畜牧與獸醫(yī)，2005，37（11）：21-23.

[3] 胡杰，陳義祥，陸文俊，等. 廣西種豬場CSF、PRRS、PCV2與PR監(jiān)控效果研究[J]. 廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，41（5）：485-488.

[4] 母安雄，楊宗照，嚴(yán)惠群，等. 仔豬PRRS母源抗體消長規(guī)律及疫苗免疫效果觀察[J]. 浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008（1）：110-112.

（責(zé)任編輯：朱迪國）

Detection and Analysis on Major Viral Swine Diseases in Wuzhou City of Guangxi from 2015 to 2016

Dai Guangwen1，Wu Yinghang1，Chen Xueying2，Jiang Jinghua1，Wei Bangwei1，Xie Lihua1
（1. Wuzhou Animal Disease Prevention and Control Center，Wuzhou，Guangxi 543002；2. Wuzhou Fishery and Animal Husbandry Proving Ground，Wuzhou，Guangxi 543002）

In order to determine the epidemic situation and immune protection effect of swine viral diseases，the nucleic acid detection was carried out towards 1 304 pig tissue samples（including lung，lymph node and spleen）from slaughterhouses of 7 counties（cities，districts）to detect HPRRSV and CSFV by the methods of RT-PCR and PCR，and 70 tissue samples（lung，lymph node，spleen）collected from scaled swine farms were also detected for HPRRSV，CSFV，PRV and PCV . A total of 8 572 serum samples from 7 counties (cities，districts) of Wuzhou City were detected for antiibodies against CSFV by ELISA，and 2 066 serum samples were tested for antibodies against PRRSV. The results showed that the nucleic acids of both HPRRSV and CSFV were undetectable. The positive detection rates of PRV and PCV were 14.3% and 57.1%，respectively. The qualified rates of immune antibody of CSFV and PRRSV were 90.41% and 73.48%，respectively. Monitoring results showed that the major prevalent viral swine diseases in Wuzhou City were two kinds swine viral diseases of Pseudorabies and Porcine circovirus disease，and the occurrence and epidemic of viral swine diseases were controlled effectively by compulsory immunization of CSF and PRRS.

major viral swine diseases；HPRRS；CSF；PR；PC

S851.3

B

1005-944X（2017）11-0004-04

10.3969/j.issn.1005-944X.2017.11.002

廣西水產(chǎn)畜牧科技推廣應(yīng)用項目（桂漁牧科201528021）

江精華