吳 巖 吳易航 劉新宇 邸 琳 劉 潔 王秋靜 劉 芬 呂文偉

(吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院，吉林 長春 130021)

1 華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院 2 吉林大學(xué)

人參四逆顆粒對心力衰竭犬的保護作用

吳 巖 吳易航1劉新宇 邸 琳 劉 潔2王秋靜2劉 芬2呂文偉2

(吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院，吉林 長春 130021)

目的觀察人參四逆顆粒對比格犬心力衰竭的保護作用。方法普通級比格犬36只，麻醉開胸術(shù)后給予3%戊巴比妥鈉溶液制備心力衰竭模型；十二指腸給予人參四逆顆粒，觀察心臟重量指數(shù)，采血進行相關(guān)酶檢測及各臟器病理學(xué)變化。結(jié)果人參四逆顆粒對心力衰竭犬可明顯改善心臟重量指數(shù)，減低血管緊張素(Ang)-Ⅱ、腦鈉素、心鈉素、腫瘤壞死因子(TNF)-α、去甲腎上腺素、內(nèi)皮素、白細胞介素1含量，可明顯改善各臟器的病理學(xué)損傷。結(jié)論人參四逆顆粒能改善心力衰竭犬心臟重量指數(shù)，減輕神經(jīng)內(nèi)分泌細胞因子的損害，對犬心力衰竭有保護作用。

人參四逆顆粒；心力衰竭；血流動力學(xué)；細胞因子

人參四逆湯由紅參、附子、干姜、甘草組成，又稱“回陽飲”是中醫(yī)回陽救逆的代表方劑，《傷寒論》等中醫(yī)典籍皆有收藏。我們前期通過對人參四逆湯進行提取分離，配合相關(guān)藥理實驗結(jié)果〔1〕，確定了有效成分組成，研制成人參四逆顆粒，初步藥效學(xué)試驗證明人參四逆顆粒具有防治大鼠慢性心力衰竭作用。為進一步評價人參四逆顆粒的藥理作用，為臨床提供全面的藥效學(xué)依據(jù)，本文探討其對犬心力衰竭的保護作用。

1 材料與方法

1.1藥品、試劑及儀器 人參四逆顆粒由吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院植化室制備，用蒸餾水配制成所需濃度；芪藶強心膠囊，批號：100701，用蒸餾水配制成0.32 g/kg，石家莊以嶺藥業(yè)有限公司生產(chǎn);肝素鈉，批號：110388上?；菔郎噭┯邢薰旧a(chǎn)；戊巴比妥鈉，批號：080919北京化學(xué)試劑公司分裝(德國進口)；犬腫瘤壞死因子(TNF)-α、心鈉素(ANF)、血管緊張素(Ang)-Ⅱ、去甲腎上腺素(NE)、腦鈉素(BNP)、內(nèi)皮素(ET)-1、白細胞介素(IL)-1試劑盒為美國RD生物科學(xué)公司，上海源葉生物科技有限公司分裝，產(chǎn)品批號均為20110802B。PowerLab 生物數(shù)據(jù)信號采集分析系統(tǒng)，澳大利亞ADInstruments國際科技有限公司；SC-3型電動呼吸機，由上海醫(yī)療設(shè)備廠生產(chǎn)；MFV-3200型電磁流量計，由日本光電公司生產(chǎn)；DNM-9602酶標(biāo)分析儀，北京普朗新技術(shù)有限公司產(chǎn)品。 BT00-100M型微量恒流泵，保定蘭格恒流泵有限公司生產(chǎn)。

1.2實驗動物 比格犬，普通級，體重8～12 kg，雌雄兼用，由福州振和實驗動物技術(shù)開發(fā)有限公司提供，實驗動物質(zhì)量合格證號：0000972；許可證號：SCXK(閩)2007-0001。

1.3造模及給藥方法 36只普通級比格犬，雌雄兼用，隨機分為6組，每組6只，分別為對照組、模型組、芪藶強心膠囊組和人參四逆顆粒小、中、大劑量組。人參四逆顆粒按0.25、0.5、1 g/kg劑量，芪藶強心膠囊按0.32 g/kg劑量十二指腸給藥，對照組和模型組予等體積生理鹽水。按藥理實驗方法〔2，3〕操作，比格犬靜脈注射30 mg/kg戊巴比妥鈉溶液麻醉，背位固定在手術(shù)臺，頸部正中部位切口，分離出氣管插管后連接呼吸機；左側(cè)頸靜脈分離，連接微量恒流泵；右側(cè)頸動脈分離，插管并連接壓力換能器，測定動脈血壓(BP)；再將比格犬右側(cè)臥位固定，于第4肋間開胸，擴胸后暴露心臟，做心包床，小心分離出心臟主動脈根部和冠狀動脈左旋支，放置口徑適宜的血流量計探頭，調(diào)整角度使其與血管緊密貼和，測量心輸出量(CO)和冠狀動脈血流量(CBF)。右側(cè)股動脈分離，插心室導(dǎo)管進入心室，連接壓力換能器，記錄左室內(nèi)壓(LVSP)；上腹部開口，于十二指腸內(nèi)留置導(dǎo)管備給藥用；犬四肢連接心電電極，記錄Ⅱ?qū)?lián)心電圖。

1.4檢測方法 手術(shù)結(jié)束后觀察記錄各項指標(biāo)，大約30 min，血流動力學(xué)指標(biāo)穩(wěn)定后記錄數(shù)值。左側(cè)靜脈以0.5 ml·min-1·kg-1恒速輸入3%戊巴比妥鈉溶液，觀察dp/dtmax值，降低到30%為心力衰竭模型〔4，5〕成功，指標(biāo)穩(wěn)定15 min后，分別給藥。取動脈血離心，分離血清，檢測ANF、BNP、Ang-Ⅱ、TNF-α、IL-1、ET-1 、NE含量(酶聯(lián)免疫法)；剪取心臟稱重量，計算心臟重量指數(shù)(心臟濕重/犬當(dāng)日體重)；剪取犬臟器(心、肝、脾、肺、腎)置12%甲醛溶液固定，做光鏡組織病理學(xué)檢查。

1.5統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS18.0軟件進行t檢驗。

2 結(jié) 果

2.1人參四逆顆粒對心臟重量指數(shù)的影響 模型組心臟重量指數(shù)(0.007 5±0.000 6)與對照組比較無顯著差異(0.007 1±0.000 7，P>0.05)；小、中、大劑量人參四逆顆粒(0.006 9±0.000 6，0.008 1±0.000 6，0.007 3±0.000 6)和芪藶強心膠囊組(0.007 9±0.000 7)心臟重量指數(shù)與模型組比較無顯著差異(P>0.05)。

2.2人參四逆顆粒對血清酶類的影響 人參四逆顆粒各組均能減少Ang-Ⅱ、ANF、NE含量，與模型組比較中劑量組有明顯差異(P<0.05,P<0.001)；人參四逆顆粒各組均能減少TNF-α、ET-1含量，大、中劑量組與模型組比較差異明顯(P<0.05，P<0.01)；人參四逆顆粒各組均能減少動脈血中BNP含量，與模型組比較差異顯著(P<0.01,P<0.001)；人參四逆顆粒各組均能減少動脈血中IL-1含量，與模型組比較中、小劑量組差異明顯(P<0.05，P<0.001)。見表1。

2.3對臟器組織病理學(xué)影響 模型組犬心臟表現(xiàn)為明顯心室擴張，心肌細胞嚴(yán)重受累出現(xiàn)損傷表現(xiàn)。 肺、肝、腎和脾瘀血，表現(xiàn)為部分肺泡腔內(nèi)見水腫液和少量出血，大部分肺泡間隔增寬毛細血管明顯擴張充血；大部分肝竇和肝小葉中央靜脈擴張充血；腎間質(zhì)血管輕度擴張充血，局部擴張充血明顯加重；脾被膜大部分為平直狀態(tài)。經(jīng)人參四逆顆粒治療后，各臟器瘀血明顯減輕。心臟病理圖片見圖1。

表1 人參四逆顆粒對細胞血清酶類含量的影響

與模型組比較:1)P<0.05,2)P<0.01,3)P<0.001

圖1 各組心臟病理圖片(HE，×400)

3 討 論

心力衰竭是指由心臟結(jié)構(gòu)或功能異常導(dǎo)致的心室收縮或舒張張力受損進而引起一系列的病理生理變化的臨床綜合征。在某種意義上慢性心力衰竭也是一種神經(jīng)激素細胞因子網(wǎng)絡(luò)失衡狀態(tài)。心力衰竭時，交感神經(jīng)系統(tǒng)和腎素血管緊張素系統(tǒng)被激活，兒茶酚胺、Ang-Ⅱ和醛固酮等神經(jīng)激素和細胞因子釋放增多，進而損傷心血管系統(tǒng)；同時心肌和血管自身也能合成和分泌一些神經(jīng)激素及細胞因子，例如NE、Ang-Ⅱ、醛固酮、ET、生長因子和炎癥細胞因子等，影響心肌和血管。這些有生物活性的神經(jīng)激素的過度表達是造成心肌損傷、循環(huán)功能受損的原因之一〔6，7〕。目前西醫(yī)治療慢性心力衰竭的方法主要包括利尿劑、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑、Ang-Ⅱ受體拮抗劑、β受體阻斷劑和醛固酮受體拮抗劑等，新藥的研究近年來進展不大〔8〕。而中醫(yī)方面治療對心力衰竭的辨證分型目前尚無統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)〔9〕。人參四逆湯是經(jīng)典方劑，具有回陽固脫功效，在此基礎(chǔ)上加減成方研究較多。人參四逆顆粒是由人參四逆湯提取分離精制而成，針對心力衰竭的臨床表現(xiàn)，本實驗證實其能減低神經(jīng)內(nèi)分泌細胞因子的損害，緩解心力衰竭的癥狀。這可能也是人參四逆顆粒治療心力衰竭的機制之一〔10〕。

1徐雅娟，宋風(fēng)瑞，趙洪峰，等.人參四逆湯抗休克作用的有效組分成分分析〔J〕.中草藥，2002；33(5)：392-5.

2陳 奇. 中藥藥理研究方法學(xué)〔M〕.北京：人民衛(wèi)生出版社，1996：522-7.

3李儀奎.中藥藥理實驗方法學(xué)〔M〕. 上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1991：117-21.

4劉 潔，孫文娟，呂文偉，等.人參皂苷Rg2與毒毛旋花子苷K的強心作用及毒性比較〔J〕. 中草藥，2001；32(9)：809-11.

5李欣志，劉建勛，尚曉泓.參附強心膠囊對犬急性心力衰竭的保護作用〔J〕.中國實驗方劑學(xué)雜志,2006；12(4)：29-31.

6吳易航，吳 巖，劉新宇，等. 人參四逆顆粒對心力衰竭犬心臟血液流量的影響〔J〕.人參研究,2017；29(2)：11-3.

7胡大一，黃 峻，馬長生，等.心血管內(nèi)科學(xué)高級教程〔M〕.北京：人民軍醫(yī)出版社，2009：165-6.

8鄭 剛. 新型心力衰竭治療藥物的研究進展〔J〕.世界臨床藥物，2016；37(9)：643-8.

9杜曉楠， 宋晨薇， 王曉峰. 中成藥治療心力衰竭的研究進展〔J〕.中成藥，2017；39(4)：794-9.

10李顯慶.苦參堿對慢性心力衰竭大鼠心功能和神經(jīng)內(nèi)分泌激素的影響〔J〕.現(xiàn)代中藥研究與實踐，2013；27(6)：40-3.

國家科技重大專項項目(2009ZX09103-447)

邸 琳(1963-)，女，主任藥師，碩士生導(dǎo)師，主要從事中藥藥理研究。

吳 巖(1968-)，男，副主任藥師，主要從事中藥藥理研究。

R9

A

1005-9202(2017)20-4959-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.20.002

〔2016-08-03修回〕

(編輯 曹夢園)