謝昀燁，方 麗，王連平，王漢榮

(浙江省農(nóng)業(yè)科學院 植物保護與微生物研究所，浙江 杭州 310021)

浙江省鐵皮石斛病害的發(fā)生及調(diào)查

謝昀燁，方 麗，王連平，王漢榮*

(浙江省農(nóng)業(yè)科學院 植物保護與微生物研究所，浙江 杭州 310021)

對浙江省18個地區(qū)的鐵皮石斛種植園內(nèi)的病害進行調(diào)查，共發(fā)現(xiàn)12種病害，其中莖葉部病害3種，為漆斑病、灰霉病和褐斑??；根部病害有2種，為鐮刀菌枯萎病和白娟?。换|(zhì)病害有2種，為白羽紋病和木腐??；生理性病害有4種，為黑斑病、濕腐病、枯心病和萎蔫病；同時在浙江省的鐵皮石斛栽培的基質(zhì)和植株上發(fā)現(xiàn)了黏菌的存在。

中藥材； 鐵皮石斛； 病害； 浙江

鐵皮石斛(DendrobiumofficinaleKimura et Migo)為蘭科石斛屬多年生草本植物，主要分布于中國浙江、安徽、福建、廣西、云南等地區(qū)。鐵皮石斛在石斛屬植物中多糖含量最高，同時富含多種氨基酸和微量元素，具有很好的免疫調(diào)節(jié)作用[1-5]。鐵皮石斛中的生物堿類化合物具有解熱鎮(zhèn)痛和抗腫瘤的作用[6-7]。20世紀90年代以前，鐵皮石斛主要依靠野生資源。由于毀滅性采挖、生存環(huán)境的破壞以及自身繁殖能力低下，野生資源基本枯竭，1987年國務院將其列為國家2級保護植物[8]。隨著野生資源的成功移栽，浙江等省實現(xiàn)了鐵皮石斛的人工栽培和大規(guī)模種植。目前浙江省的石斛產(chǎn)業(yè)化基地已超過100個，種植面積高達2 000 hm2。鐵皮石斛產(chǎn)業(yè)的發(fā)展不僅提高了浙江省鐵皮石斛的經(jīng)濟產(chǎn)值，還推動了我國中藥材產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。但是隨著浙江省鐵皮石斛的大面積人工栽培，其病蟲害的發(fā)生也逐年增加，據(jù)報道，鐵皮石斛主要病害有炭疽病、黑斑病、軟腐病、白絹病、莖基腐病等[9-13]。自2013年1月至2016年8月，作者針對浙江省主要鐵皮石斛生產(chǎn)基地進行了鐵皮石斛病害的普查，以期為浙江省鐵皮石斛病害防治提供基礎依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 病害標本的采集

通過直接到基地采集，或生產(chǎn)大戶、企業(yè)、合作社快遞等方式，從杭州、樂清、瑞安、金華等17個鐵皮石斛生產(chǎn)基地，采集到鐵皮石斛病葉、病莖、發(fā)病基質(zhì)樣本共計1 389份，其中杭州186份、樂清237份、瑞安14份、金華154份、溫嶺36份、臨海51份、新昌165份、天臺72份、東陽4份、龍泉47份、磐安69份、武義21份、麗水36份、黃巖23份、建德175份、龍游146份、嵊州23份、諸暨6份。采集的病害標本保存于4 ℃冰箱，便于觀察及鑒定。

1.2 病原菌的分離

采用組織分離法對鐵皮石斛病害標本進行病原菌分離，剪去病健交界處組織，消毒后放置于培養(yǎng)基平板中恒溫培養(yǎng)，因不同真菌的生物學特性有區(qū)別，實驗室常采用不同培養(yǎng)基質(zhì)和溫度針對不同真菌進行培養(yǎng)，常用培養(yǎng)溫度為25 ℃，常用的分離的培養(yǎng)基有PDA、OMA和CMA等[14]。

1.3 病原菌的鑒定

對采集的鐵皮石斛病害標本進行實驗室內(nèi)顯微觀察，根據(jù)其形態(tài)學特征進行鑒定。對分離純化得到的病原真菌菌株進行分子鑒定。病原真菌菌絲DNA提取后對其rDNA-ITS區(qū)間進行序列擴增，將其擴增的序列提交至Genbank中進行序列比對，進一步確定其病原名稱。因不同真菌的基因有差別，不同真菌種類的分子鑒定區(qū)間不同，真菌常見的序列區(qū)間有EF-1α、β-tubulin和action等。

1.4 致病性測定

根據(jù)柯赫氏法則[15]，將分離得到的病原菌菌株回接到健康的寄主植物上，觀察其發(fā)病情況，確定其對寄主植物的致病性。生理性病害采用盆栽過量葉面施肥試驗等確定。

2 結(jié)果與分析

病葉、病莖、發(fā)病基質(zhì)樣本通過顯微鏡鏡檢，采用PDA、NA、OMA等多個培養(yǎng)基進行組織分離，分離得到了漆斑病菌、灰霉病菌、褐斑病菌、白娟病菌、枯萎病菌、白紋羽病等6個真菌性的病原菌菌株，經(jīng)對鐵皮石斛的致病性測定均對其具有致病性。另外還分離到木腐病菌、黏菌等對鐵皮石斛的栽培基質(zhì)具有寄生性的菌類。還有1種水分過量造成的生理性萎蔫病和黑斑病、濕腐病、枯心病等3種氮肥過量造成的生理性病害(表1)。

表1 浙江省鐵皮石斛病害種類及其樣本來源

2.1 漆斑病

漆斑病主要侵染鐵皮石斛的葉片，以及衰老的葉鞘和花梗，衰老或休眠的莖干。葉片染病后病斑初呈淡褐色至黑褐色的小點，后小點漸漸擴大，直至1～2 mm大小。病斑圓形或橢圓形，中間凹陷，灰白色，病健交界處似圍繞一條淡褐色至黑褐色的邊界線。嚴重時，較老的葉片上出現(xiàn)許多大小不一的病斑，一般新葉不染病。當葉鞘和花梗衰老變得灰白時易染病，染病后在其上長出黑色小點，即病原菌的分生孢子器。衰老而灰白的葉鞘和花梗染病后常引起衰老或休眠莖干的頂部枯死，其上有時也長出黑色小點，即病原菌的分生孢子器。

2.2 灰霉病

灰霉病主要侵染鐵皮石斛的葉片及嫩莖。葉片染病后病斑初呈淡褐色至黑褐色的小點，后小點漸漸擴大，有時呈輪紋狀，病健交界處常有褐色至深褐色的暈圈；病斑圓形或橢圓形，淡褐色至黑褐色，中間凹陷，最大病斑可達鐵皮石斛葉片的邊緣。在深秋、冬季和早春石斛發(fā)病后葉片常發(fā)黃，或枯死，或脫落。發(fā)黃的病葉帶有橘紅色，其上病斑則呈淡褐色至黑褐色，病斑與發(fā)黃葉部交界處常常有或淺或深的綠色暈圈，病斑上，尤其是病斑中心常長有灰褐色的霉層，即病原菌的分生孢子。這些發(fā)黃的病葉輕輕碰觸，即可脫落。在深秋、冬季和早春田間濕度高時，葉片、嫩梢以及枯黃的葉片有時會出現(xiàn)大量水漬狀的濕腐，并在病斑上產(chǎn)生大量的灰褐色的霉層，即病原菌的分生孢子。

2.3 褐斑病

褐斑病僅侵染鐵皮石斛的葉片。葉片染病后病斑初呈淡褐色至黑褐色的小點，后小點漸漸擴大，最大病斑5～6 mm。病斑圓形或橢圓形，淡褐色至黑褐色，有時病健交界處有一圈褐色的暈圈。病斑中間凹陷。嚴重時，葉片上出現(xiàn)許多大小不一的病斑，一般新葉不染病。

2.4 白娟病

白娟病病原菌主要為害植株近基質(zhì)的莖基部，在夏季高溫高濕或基質(zhì)偏酸時易發(fā)生。此病發(fā)生時，在基質(zhì)表面可見絹狀菌絲，并在中心部位形成褐色小菌核，植株近基質(zhì)的莖上會出現(xiàn)黃色至淡褐色的病斑，絲狀物可在基質(zhì)表面及莖葉部位蔓延，后期病斑變成褐色至黑褐色。該病可導致植株基部腐爛并向莖上部及葉擴展，感染部位腐爛變軟，植株很快腐爛并死亡。

2.5 枯萎病

枯萎病主要為害植株的根部。病原菌侵染鐵皮石斛根系后引起植株萎蔫，根系枯死。植株基部莖干表皮變得粗糙，間或有裂縫，濕度大時可見白色或粉紅色霉狀物，有些在莖基部還能看到水浸狀病斑。橫切或縱切莖基部，均可見維管束有褐色或黑褐色的環(huán)變。

2.6 白紋羽病

白紋羽病主要侵染鐵皮石斛的根系。病原菌侵染根系后引起根系枯黃壞死，在根系及基質(zhì)中形成大量的白色或略帶棕褐色的菌絲層或菌絲索，結(jié)構(gòu)比較疏松柔軟。菌絲索可以擴展到基質(zhì)中，變成較細的菌索，填滿基質(zhì)中的空隙，拔起發(fā)病的鐵皮石斛植株可見白色菌絲將根系與基質(zhì)纏繞成團。菌絲層上可生長出黑色的菌核。與健康的鐵皮石斛植株相比，發(fā)病的鐵皮石斛植株葉片不夠鮮活，并呈現(xiàn)缺水狀的輕度扭曲，葉片漸漸黃化，自下而上出現(xiàn)枯黃、脫落，枯黃的葉片常帶有橘紅色，新枝抽生減少或無，莖干的莖基部呈現(xiàn)皺縮或干枯狀。

2.7 木腐病

木腐病為多孔菌侵染定植鐵皮石斛的松樹皮基質(zhì)，而使松樹皮基質(zhì)與鐵皮石斛植株板結(jié)成白色、發(fā)硬的大菌塊，影響鐵皮石斛植株的發(fā)枝和生長。白色菌塊上的鐵皮石斛植株稀疏、矮小，植株莖干下部的葉片枯黃，枯黃的葉片常帶有橘紅色，使鐵皮石斛植株的產(chǎn)量和品質(zhì)銳減。

2.8 黏菌

在鐵皮石斛栽培田中常有美發(fā)菌和煤絨菌2種黏菌發(fā)生。美發(fā)菌子實體較小，生長在活體植物的莖、葉上。子實體初為白色，散布在寄主表面，呈粒狀小點，隨后呈乳白色。成熟的子實體呈暗褐色，肉眼觀察如同覆蓋了一層黑褐色霉層。煤絨菌子實體較大，腐生在栽培田中的基質(zhì)上，或覆蓋在整穴鐵皮石斛植株上。條件適宜時整穴植株完全被該菌覆蓋。由于黏菌子實體的遮蔽影響了植物正常的光合作用，導致植株矮化。

2.9 生理性病害

黑斑病是由于過量施用氮肥而引起的生理性病害，該病僅發(fā)生在鐵皮石斛的葉片上。該病的病斑大小1～2 mm，圓形或橢圓形，淡褐色至黑褐色，中間凹陷，病健分界清晰。

濕腐病是由于過量施用氮肥而引起的生理性病害，該病主要發(fā)生在鐵皮石斛的葉片、嫩梢和嫩莖上。在高溫季節(jié)，過量施用氮肥后，噴灌水分引起鐵皮石斛栽培環(huán)境高濕，從而引起成片鐵皮石斛植株的葉片、嫩梢和嫩莖呈水漬狀腐爛，較老的莖干呈淡褐色至棕褐色，濕腐的葉片干燥后呈淡褐色至黑褐色，嚴重影響鐵皮石斛植株的發(fā)枝和生長。

枯心病是由于過量施用氮肥而引起的生理性病害，該病主要發(fā)生在鐵皮石斛植株抽生的心葉上。過量施用氮肥后，引起鐵皮石斛植株抽生的心葉呈灰褐色枯死，其他葉片或葉尖上也會出現(xiàn)灰褐色枯死，具有突發(fā)性。

萎蔫病是由水分引起的生理性病害。該病是由于冬季鐵皮石斛的根系浸水而引起根系死亡，發(fā)病植株與健康植株相比，其葉片不夠鮮活，并呈現(xiàn)缺水狀的輕度扭曲，葉片黃化，莖干上發(fā)黃的葉片自下而上出現(xiàn)枯黃、脫落，枯黃的葉片常帶有橘紅色，鐵皮石斛植株呈萎蔫狀。

3 小結(jié)與討論

2013年至2016年對浙江省鐵皮石斛生長基地的病害調(diào)查，及進行實驗室分離鑒定的結(jié)果表明，鐵皮石斛發(fā)生的主要病害有漆斑病、灰霉病、褐斑病、白娟病、枯萎病、白紋羽病和木腐病，其中枯萎病、白紋羽病和木腐病是鐵皮石斛根部的主要病害。生理性病害有黑斑病、濕腐病和枯心病，在浙江省的鐵皮石斛的栽培基質(zhì)上同時發(fā)現(xiàn)了美發(fā)菌和煤絨菌等黏菌的存在。

鐵皮石斛主要種植于我國的浙江、廣西和云南各地區(qū)，因氣候和地理位置的不同，導致鐵皮石斛病害的發(fā)生也有所不同。寧沛恩[16]對廣西容縣的鐵皮石斛病害進行調(diào)查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在容縣地區(qū)主要病害種類有炭疽病、細菌性軟腐病和花葉病毒病。陳爾等[17]對廣西林科院花卉所溫室大棚種植的鐵皮石斛病害進行了調(diào)查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在溫室中的病害類型較多，主要有葉斑病、黑斑病、白娟病和軟腐病。蔣平對貴陽地區(qū)的鐵皮石斛病害的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，猝倒病、黑腐病、銹病、根腐病和疫病也有發(fā)生。在浙江省鐵皮石斛上的病害種類明顯比廣西地區(qū)多，最先在我國云南省發(fā)現(xiàn)鐵皮石斛漆斑病[18]，也第1次在浙江省大面積發(fā)生。由于不合理的種植，在浙江省大部分鐵皮石斛種植園中出現(xiàn)了大面積的生理性病害，如氮肥過量引起的黑斑病和濕腐病，水分過量引起的萎蔫病。因此在預防真菌性病害的同時也需要合理地種植和管理鐵皮石斛的生長。近年來，屠艷拉等[19]在浙江省鐵皮石斛栽培田中發(fā)現(xiàn)了美發(fā)菌和煤絨菌等2種黏菌，雖然黏菌不能直接使植物致病，但是它可以爬滿葉片甚至覆蓋整個植株，使鐵皮石斛的光合作用受到阻礙，嚴重影響了鐵皮石斛的生長。

目前，浙江省鐵皮石斛的種植面積不斷擴大，但在大規(guī)模集約化種植鐵皮石斛時，其病害的發(fā)生會越來越嚴重，這將會嚴重制約鐵皮石斛產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。其次，如果病害發(fā)生而采用不恰當?shù)乃巹┓乐?，也會對鐵皮石斛產(chǎn)品的質(zhì)量安全造成風險。因此，要明確浙江省鐵皮石斛上的病害種類，有效地進行農(nóng)業(yè)、物理、生態(tài)、生物等綠色防控技術的研發(fā)，以確保鐵皮石斛產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展。

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收入日期：2017-08-12

浙江省特色農(nóng)產(chǎn)品全產(chǎn)業(yè)鏈安全風險管控項目；樂清院士工作站項目；樂清院地合作項目

謝昀燁(1987—)，女，吉林集安人，助理研究員，博士，從事蔬菜病害及其抗性研究工作，E-mail:xieyunqiao@126.com。

王漢榮，E-mail:wanghrg@126.com。

文獻著錄格式：謝昀燁，方麗，王連平，等. 浙江省鐵皮石斛病害的發(fā)生及調(diào)查[J].浙江農(nóng)業(yè)科學，2017，58(10)：1757-1759，1762.

10.16178/j.issn.0528-9017.20171027

S567

A

0528-9017(2017)10-1757-03

(責任編輯張才德)