惠海英 白靜靜 孫晶瑩 劉 楊 肖生祥

·論著·

陜西省中醫(yī)藥管理局(編號(hào)：2015lc039)

陜西省社會(huì)發(fā)展科技攻關(guān)項(xiàng)目(編號(hào)：2016sf-156)

1陜西省人民醫(yī)院，陜西西安，710068

2西安交通大學(xué)第二醫(yī)院，陜西西安，710004

惠海英，E-mail: haiyinghui@163.com

雙氫青蒿素對(duì)UVB誘導(dǎo)的人皮膚HaCaT細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用

惠海英1白靜靜1孫晶瑩1劉 楊1肖生祥2

目的明確雙氫青蒿素(DHA)對(duì)UVB誘導(dǎo)人皮膚HaCaT細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用。方法將體外培養(yǎng)的HaCaT細(xì)胞分為空白對(duì)照組，UVB 照射組和UVB+DHA(20、40、60、80 μmol/L)組，采用 MTT法檢測(cè)細(xì)胞系的增殖情況，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞的凋亡率，RT-PCR法檢測(cè)抗凋亡基因survivin和促凋亡基因caspease-3(激活型)mRNA水平，Western檢測(cè)相關(guān)蛋白表達(dá)水平。結(jié)果30 mJ/cm2UVB照射24 h后，UVB組和UVB+DHA(20、40、60、80 μmol/L)組細(xì)胞的增殖率分別為空白對(duì)照組的(50.13±2.42)%，(60.23±2.30)%,(69.24±3.19)%,(79.37±2.47)%和(70.41±2.24)%。UVB組和UVB+60 μmol/L DHA組中HaCaT細(xì)胞凋亡率分別為(46.7±3.2)%和(23.71±1.2)%。與UVB組比較，UVB+60 μmol/L DHA組中HaCaT細(xì)胞caspase-3 mRNA及蛋白表達(dá)降低、survivin mRNA及蛋白表達(dá)升高。結(jié)論DHA可抑制UVB所致HaCaT細(xì)胞的凋亡，其機(jī)制可能與survivin和caspase-3有關(guān)。

雙氫青蒿素； HaCaT細(xì)胞； caspease-3; UVB

近年來，紫外線對(duì)人體的損傷已引起人們的廣泛關(guān)注，資料表明日光中的紫外線特別是中波紫外線(ultraviolet B, UVB)與皮膚的光老化、光損傷和光致癌的發(fā)生密切相關(guān)，嚴(yán)重威脅著人類的身體健康[1,2]。因此開發(fā)紫外線防護(hù)藥物尤為重要。現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)青蒿中含有多種藥用成分具有抗菌、抗寄生蟲、解熱抗炎以及免疫抑制等作用，且毒性極低，無毒副作用。很多學(xué)者將青蒿素及其衍生物用于光敏性皮膚病的治療[3-6]，取得了較好的療效，但機(jī)制尚不清楚。雙氫青蒿素(dihydroartemisinin, DHA)是青蒿素類藥物在體內(nèi)的主要活性代謝產(chǎn)物。本研究通過UVB誘導(dǎo)HaCaT細(xì)胞損傷，建立UVB損傷皮膚細(xì)胞模型，通過觀察細(xì)胞增殖活性及凋亡情況，檢測(cè)凋亡抑制蛋白survivin和凋亡蛋白caspase-3的表達(dá)水平，探討DHA對(duì)UVB導(dǎo)致HaCaT細(xì)胞損傷的拮抗作用，為開發(fā)新型抗皮膚損傷產(chǎn)品提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料及藥物、儀器

1.1.1.1 細(xì)胞 永生化人角質(zhì)形成細(xì)胞株(HaCaT細(xì)胞)為第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院皮膚科李承新教授饋贈(zèng)。

1.1.1.2 藥物 DHA(分子式C15H24O5, 分子量284.35 kd)購(gòu)于西安昊軒生物技術(shù)有限公司，純度98%。

1.1.1.3 試劑 RPMI 1640液、胰蛋白酶、胎牛血清(美國(guó)Gibco公司)，噻唑蘭(MTT)、二甲基亞砜(DMSO)(美國(guó)sigma公司)。Annexin V-FITC/PI雙染法細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(美國(guó)BD公司)。survivin、caspase-3兔多克隆抗體和β-actin以及相應(yīng)的二級(jí)抗體(美國(guó)SANTA公司)。RNA提取試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(日本Takara公司)。PCR引物由北京華大生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成。

1.1.1.4 儀器 電泳儀(美國(guó)Bio-RAD公司)、 酶標(biāo)儀(美國(guó)Bio-Tek公司)、電轉(zhuǎn)槽(美國(guó)Bio-RAD公司)、流式細(xì)胞儀(美國(guó)BD-FACScalibur)、7500型實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)儀(美國(guó) ABI公司)、SS-03B型光療儀(上海sigma公司，波長(zhǎng)311 nm)

1.2 方法

1.2.1 HaCaT細(xì)胞株培養(yǎng) 接種于含10%胎牛血清、100 U/mL青霉素和100 U/mL鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基中，于37℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，80%匯合后胰蛋白酶消化法傳代培養(yǎng)，于傳代后第2天換液。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞制成4×104個(gè)/mL單細(xì)胞懸液，接種于6孔板后繼續(xù)培養(yǎng)24 h給藥。

1.2.2 中波紫外線照射 待細(xì)胞生長(zhǎng)至每孔融合80%～90%時(shí),吸去培養(yǎng)基,加入2 mL Phosphate Buffer Solution(PBS)緩沖液,對(duì)照組用錫箔紙蓋住,其余組細(xì)胞暴露于UVB燈管下,照射距離約為10 cm，輻射劑量為30 mJ/cm2。紫外線照射后,吸去PBS，并在各孔中重新加入培養(yǎng)液繼續(xù)常規(guī)培養(yǎng)。

“哎呀，傻妹子，怎么就沒關(guān)系呢。楊連長(zhǎng)可是老刀一手帶出來的。老刀在河北路上撿到他，那時(shí)他還是個(gè)大毛孩，一路南征北戰(zhàn)出生入死，他們是知根知底的難兄難弟?；畹浇裉欤懿蝗菀装?。所以，聽句姐的勸，錯(cuò)不了?！毕蜿柣ㄕ酒鹕?，拉一把田志芳，“回去吧，要不老刀和楊連長(zhǎng)等著急了?；丶?，你自個(gè)兒琢磨琢磨姐今天說的話，看有幾份道理不？”

1.2.3 藥物處理 雙氫青蒿素以二甲基亞砜(DMSO)配制成濃度為10-1mol/L儲(chǔ)存液(DMSO濃度≤1‰)，-20℃避光保存，用時(shí)用DMEM培養(yǎng)液將二氫青蒿素稀釋配成20、40、60、80 μmol/L的工作液，加入藥物工作液后，細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)24 h，進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.4 實(shí)驗(yàn)分組 將HaCaT細(xì)胞分為3組。A 組:空白對(duì)照組,不加DHA，不照射UVB;B組:UVB照射組,不加DHA;C組:DHA組即照射UVB并給予一定濃度(20、40、60、80 μmol/L DHA)。

1.2.5 HaCaT細(xì)胞細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察 將HaCaT細(xì)胞消化后調(diào)整細(xì)胞密度為4.0×104個(gè)/mL，以每孔1 mL接種于6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中培養(yǎng)，照射UVB后(除空白對(duì)照組)，分別加入含雙氫青蒿素0、20、40、60、80 μmol/L的培養(yǎng)液2 mL，培養(yǎng)24 h，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化。

1.2.6 MTT法檢測(cè)HaCaT細(xì)胞增殖率 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，0.25%胰酶消化，調(diào)整細(xì)胞數(shù)為4.0×104個(gè)/mL，以每孔100 μL接種于96孔培養(yǎng)板，培養(yǎng)24 h后去原培養(yǎng)液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對(duì)照組及處理組各100 μL，每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)復(fù)孔，于37℃、5% CO2條件下培養(yǎng)。培養(yǎng)結(jié)束前4 h，每孔加入MTT(5 ng/mL)20 μL。培養(yǎng)結(jié)束時(shí)，棄上清，加入DMSO 150 μL，振蕩10 min，使結(jié)晶物充分溶解，用酶標(biāo)儀分別測(cè)定培養(yǎng)24 h吸光度(A570值)，細(xì)胞活性以細(xì)胞增殖率表示，細(xì)胞增殖率=(處理組平均A值/空白對(duì)照組平均A值)×100%。

1.2.7 流式細(xì)胞儀Annexin V/PI檢測(cè)HaCaT細(xì)胞早期及中晚期總凋亡率 HaCaT細(xì)胞經(jīng)UVB照射后，加入濃度60 μmol/L DHA工作液培養(yǎng)48 h后，經(jīng)0.25% Trypsin-EDTA消化，200 g離心6 min，培養(yǎng)液棄去，磷酸鹽緩沖液(PBS)洗3次，收集的細(xì)胞經(jīng)70%的乙醇 4℃固定2 h，14000 g離心2 min，固定液棄去，PBS緩沖液(含5 mmol/L EDTA)500 μL 進(jìn)行細(xì)胞重懸，再經(jīng)RNA酶室溫孵育 30 min，以1×binding buffer制成單細(xì)胞懸液，置于流式管，每組設(shè)6個(gè)樣，加Annexin V-FITC 10 μL與PI 5 μL，混勻后室溫下避光孵育15 min，再加入1×binding buffer充分混合后于流式細(xì)胞儀上檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。

1.2.8 實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)HaCaT細(xì)胞caspase-3、survivin mRNA表達(dá) HaCaT細(xì)胞經(jīng)UVB照射后，加入濃度60 μmol/L DHA工作液培養(yǎng)48 h后，吸去培養(yǎng)液，經(jīng)0.25%胰蛋白酶液分別制成細(xì)胞懸液，分別裝入離心管，1500 rpm離心，收集細(xì)胞，利用TaKaRa細(xì)胞總RNA抽提試劑盒提取各組細(xì)胞總RNA，采用TaKaRa反轉(zhuǎn)錄試劑盒按照說明書以RNA為模板反轉(zhuǎn)錄為CDNA，采用熒光定量PCR試劑盒按照說明書以CDNA為模板進(jìn)行PCR反應(yīng)，然后使用ABI7500 PCR儀進(jìn)行熒光PCR。引物由上海華大生物公司合成(表1)。實(shí)時(shí)定量PCR反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性3 min，擴(kuò)增40個(gè)循環(huán)，每循環(huán)中，94℃變性30 s，57℃退火30 s ，72℃延伸45 s，采集熒光信號(hào)；40循環(huán)結(jié)束后，經(jīng)94℃ 30 s、57℃ 30 s、72℃ 45 s，采集熔解曲線。使用7500型Real-time PCR儀分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。以β-actin為內(nèi)參基因，計(jì)算同一樣本中目的基因與內(nèi)參基因的含量比值，評(píng)價(jià)目的基因的表達(dá)水平。每個(gè)樣本取3個(gè)復(fù)孔，PCR重復(fù)3次。

表1 引物序列及產(chǎn)物大小

1.2.9 Western-blot檢測(cè)細(xì)胞caspase-3、survivin蛋白表達(dá) HaCaT細(xì)胞經(jīng)UVB照射后，加入濃度60 μmol/L DHA工作液培養(yǎng)48 h后進(jìn)行試驗(yàn)，以含0.1% DMSO的培養(yǎng)基為陰性對(duì)照組。Western blot檢測(cè)caspase-3、survivin蛋白表達(dá)水平，β-actin作為內(nèi)參蛋白，按照如下步驟進(jìn)行操作：進(jìn)行處理后細(xì)胞收集，4℃預(yù)冷PBS液洗3次，加入細(xì)胞勻漿液(50 mmol/L This-HCl pH=7.4，1% TritonX-100，0.2 mmol/L PMSF，1 mmol/L EDTA)，4℃、12000 g條件下離心10 min，吸取上清，收集蛋白，收集細(xì)胞后用SDS上樣緩沖液處理，檢測(cè)總蛋白濃度，10%聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行蛋白分離，上樣量(30 μg)，濕轉(zhuǎn)NC膜，用50 g/L脫脂牛奶室溫封閉30 min，不同濃度稀釋一抗caspase-3(1∶1 000)或survivin(1∶500)孵育 ，4℃過夜，HRP標(biāo)記抗鼠/兔IgG二抗常溫孵育1 h，TBST洗膜，化學(xué)發(fā)光試劑顯色、掃描并進(jìn)行吸光度分析、計(jì)算蛋白相對(duì)表達(dá)水平。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 DHA對(duì)UVB照射HaCaT細(xì)胞形態(tài)學(xué)影響 倒置顯微鏡下可見對(duì)照組HaCaT細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛，折光率較高，胞體大，形態(tài)成梭形或多邊形，胞質(zhì)均勻透明，隨培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)形態(tài)無明顯變化。UVB照射后的HaCaT細(xì)胞增殖減慢，細(xì)胞逐漸變小、變圓，折光率減弱，DHA干預(yù)后細(xì)胞逐漸變大，折光性增高(圖1)。

2.2 DHA對(duì)UVB照射HaCaT細(xì)胞增殖的影響 與對(duì)照組相比，30 mJ/cm2UVB照射可使細(xì)胞24 h后的增殖率顯著下降至對(duì)照組的50.13%±2.42%(P<0.05) ;但加入不同濃度的DHA可明顯減弱UVB組的作用，其中20 μmol/L DHA可使細(xì)胞增殖率恢復(fù)至60.23%±2.30%，40 μmol/L時(shí)可使細(xì)胞增殖率恢復(fù)至69.24%±3.19%，60 μmol/L時(shí)可使細(xì)胞增殖率恢復(fù)至79.37%±2.47%，80 μmol/L可使細(xì)胞增殖率恢復(fù)至70.41%±2.24%，與UVB組相比，有顯著差異(P<0.05) 。DHA在4個(gè)藥物濃度下均表現(xiàn)出一定的防護(hù)作用，但未表現(xiàn)出隨著質(zhì)量濃度增加效果增強(qiáng)的效應(yīng)關(guān)系(表2)，可能是由于處于效果平臺(tái)期所致。在上述藥物濃度范圍內(nèi)，藥物本身對(duì)細(xì)胞無損傷作用。DHA具有防護(hù)UVB致人HaCaT細(xì)胞的作用，即提高了HaCaT細(xì)胞在UVB輻射作用下的存活率。

a 對(duì)照組;b UVB組;c DHA組

2.3 DHA對(duì)UVB照射HaCaT細(xì)胞凋亡的影響 根據(jù)MTT檢測(cè)結(jié)果我們選定60 μmol/L作為DHA處理藥物濃度。HaCaT細(xì)胞預(yù)處理后用60 μmol/L DHA刺激24 h。結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，UVB組顯著增加了HaCaT細(xì)胞凋亡，凋亡率增加了(46.7±3.2)%(t=3.78,P<0.05)，而DHA組則降低了UVB組的凋亡率，凋亡率為(23.71±1.2)%(與UVB組比較，t=4.38,P<0.05)。結(jié)果表明，DHA可抑制UVB照射所引起的HaCaT細(xì)胞凋亡。

2.4 DHA對(duì)UVB照射HaCaT細(xì)胞caspase-3、survivin mRNA表達(dá)的影響 細(xì)胞處理24 h后，進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)與正常對(duì)照組相比，UVB組及DHA組HaCaT細(xì)胞caspase-3 mRNA表達(dá)增加、survivin mRNA表達(dá)降低，但UVB組變化更明顯(*P<0.05)。同時(shí)與UVB組比較，DHA組HaCaT細(xì)胞caspase-3 mRNA表達(dá)降低，survivin mRNA表達(dá)增加(#P<0.05)(圖2)。

圖2 不同處理組caspase-3、survivin mRNA表達(dá)

2.5 DHA對(duì)UVB照射HaCaT細(xì)胞caspase-3、survivin蛋白表達(dá)的影響 細(xì)胞處理48 h后，進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)與正常對(duì)照組相比，UVB組survivin蛋白表達(dá)降低，caspase-3蛋白表達(dá)增強(qiáng)(*P<0.05)。而DHA組明顯減弱了UVB對(duì)HaCaT細(xì)胞的這一作用(#P<0.05)(圖3)。

圖3 caspase-3、survivin 蛋白表達(dá)

3 討論

自然光中的紫外線輻射是誘發(fā)人類皮膚癌的重要環(huán)境因素。美國(guó)每年約有一百萬人被確診為皮膚癌，皮膚癌也是美國(guó)最常見的癌癥之一[7]。動(dòng)物模型試驗(yàn)證明了UV輻射不僅是腫瘤誘發(fā)劑而且還是腫瘤促進(jìn)劑，關(guān)于紫外線誘導(dǎo)腫瘤的確切機(jī)制仍不清楚，大量研究表明UVB對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞的DNA損傷是誘發(fā)皮膚腫瘤的基礎(chǔ)。由于細(xì)胞凋亡與皮膚腫瘤發(fā)生的相關(guān)性，長(zhǎng)期或大量UVB輻射可誘導(dǎo)凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)。近年來紫外線誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡尤其是角質(zhì)形成細(xì)胞凋亡引起了人們的關(guān)注[8]。

Caspase是執(zhí)行凋亡的主要酶類，被稱為死亡蛋白酶,是細(xì)胞凋亡的中樞效應(yīng)器，細(xì)胞凋亡后期的共同途徑由caspase激活[9]。Caspase蛋白酶家族在細(xì)胞凋亡中的一個(gè)重要作用是使保護(hù)細(xì)胞遠(yuǎn)離凋亡的各種蛋白失活。Caspase-3處于caspase蛋白酶系的核心地位，在caspase酶系級(jí)聯(lián)反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。是細(xì)胞凋亡中重要的促凋亡因子。UVB輻射后產(chǎn)生的ROS可促進(jìn)細(xì)胞凋亡，增加細(xì)胞內(nèi)鈣離子(Ca2+)，降低線粒體膜電位，激活caspase-3蛋白[10]，最終引起細(xì)胞凋亡。

survivin蛋白是新近發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制蛋白(IAP)家族中新的一員，于1997年被 Ambrosinin在人類基因組庫(kù)的雜交篩選分離出來，是目前為止所發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的凋亡抑制因子[11]。survivin蛋白具有調(diào)控細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的雙重功能。survivin蛋白廣泛表達(dá)于人的胚胎組織和各種腫瘤組織，也表達(dá)于少數(shù)正常成人組織，包括人體皮膚組織。在人體皮膚KSCs及黑素細(xì)胞、成纖維細(xì)胞均有表達(dá)。survivin蛋白在維持人類角質(zhì)形成細(xì)胞周期變化及細(xì)胞增殖中起很重要的作用[12]，通過抑制其caspase-3、caspase-7活性而抑制細(xì)胞凋亡[13]。

近年來臭氧層破壞嚴(yán)重，照射到地面的紫外線逐年增強(qiáng),伴隨著人口老齡化加速,抵抗皮膚光損傷已成為人們關(guān)注的重點(diǎn)，預(yù)防和延遲皮膚光老化已成為一個(gè)重大的醫(yī)學(xué)問題。中藥是拮抗皮膚光損傷的一種有效手段,在改善和防治皮膚光損傷方面具有巨大的潛力。大量天然植物防光研究的結(jié)果肯定了中藥及提取物對(duì)皮膚光損傷的治療作用。枸杞、綠茶等干預(yù)UVB輻射的HaCaT細(xì)胞，明顯抑制細(xì)胞內(nèi)SOD、GSH-Px下降、降低MDA產(chǎn)生量[14]。黃芪可以減少UVB射線誘發(fā)的皮膚上皮細(xì)胞IL-6、TNF-α含量，從而減輕UVB對(duì)HaCaT細(xì)胞的損傷[15]。

近年來,在臨床上以青蒿為主的復(fù)方用來治療風(fēng)濕或類風(fēng)濕疾病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、盤形紅斑狼瘡、皮膚病(濕疹、多形紅斑、多形日光疹、夏令水皰病)等,均取得了較好的療效。有學(xué)者認(rèn)為青蒿素有抑制變態(tài)反應(yīng)性皮炎，抗光感作用[3-6]，這為其光保護(hù)作用提供了一定的臨床依據(jù)。青蒿素及其衍生物有抗瘧、抗孕、抗血吸蟲、抗纖維化、抗弓形蟲、抗心律失常和腫瘤細(xì)胞毒性等作用,并具有復(fù)雜的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制[16]，這為其光保護(hù)作用提供了一定的理論依據(jù)。

目前研究防治皮膚光損傷的機(jī)制主要集中在增強(qiáng)清除自由基能力方面，從細(xì)胞凋亡角度進(jìn)行研究的相關(guān)報(bào)道較少。DHA是青蒿素類藥物在體內(nèi)的主要活性代謝產(chǎn)物，我們以DHA作為干預(yù)藥物，以人角質(zhì)形成細(xì)胞HaCaT細(xì)胞作為研究對(duì)象，研究了DHA對(duì)UVB誘導(dǎo)HaCaT細(xì)胞凋亡的抑制作用。我們發(fā)現(xiàn)，UVB可以抑制HaCaT細(xì)胞增殖和活力，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。DHA卻減弱了UVB引起的HaCaT細(xì)胞增殖抑制作用，但未表現(xiàn)出隨著DHA濃度增加效果增強(qiáng)的效應(yīng)關(guān)系，可能是由于處于效果平臺(tái)期所致。同時(shí)我們選取了抑癌基因survivin及促癌基因caspase-3，通過RT-PCR及western-blot檢測(cè)也觀察到30 mJ/cm2的UVB可以降低HaCaT細(xì)胞survivin蛋白表達(dá)降低,增加caspase-3的表達(dá)。而DHA明顯減弱了UVB對(duì)HaCaT細(xì)胞的這一作用。以上結(jié)果提示DHA可抑制UVB所致的HaCaT細(xì)胞凋亡，具有一定的光保護(hù)作用，且該作用可能是通過凋亡相關(guān)因子survivin及促癌基因caspase-3來實(shí)現(xiàn)。

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ProtectiveeffectofdihydroartemisininonHaCaTcellapoptosisinducedbyUVB

HUIHaiying1,BAIJingjing1,SUNJingying1,LIUYang1,XIAOShengxiang2.

1.ShaanxiProvincialPeople'sHospital,Xi'an710068,China; 2.TheSecondAffiliatedHospitalofXi'anJiaotongUniversity,Xi'an710004,China

HUIHaiying,E-mail:haiyinghui@163.com

Objective: To determine the protective effect of dihydroartemisinin (DHA) on HaCaT cells apoptosis induced by UVB.MethodsHaCaT cells cultured in vitro were divided into blank control group, UVB group and UVB+DHA (20, 40, 60, 80 μmol/L) group. The proliferation of HaCaT cells, cell apoptosis, mRNA levels of anti-apoptotic gene survivin and pro-apoptotic gene caspease-3 and corresponding protein levels were detected by MTT, flow cytometric analysis, qRT-PCR and Western blotting.ResultsAfter the HaCaT cells was irradiated for 24 hs, the proliferation of the cells in the UVB group and UVB+DHA (20, 40, 60, 80 μmol/L) groups was (50.13±2.42)%, (60.23±2.30)%, (69.24±3.19)%, (79.37±2.47)% and (70.41±2.24)% of the blank control group. The apoptosis rate in the UVB group and UVB+60 μmol/L DHA group was (46.7±3.2)% and (23.71±1.2)%. Compared with the UVB group, the mRNA and protein levels of pro-apoptotic gene caspease-3 in the UVB+60 μmol/L DHA group was decreased and the levels of anti-apoptotic gene survivin was increased.ConclusionDHA inhibits the apoptosis of HaCaT cells induced by UVB, which may be related with caspase-3 and survivin.

dihydroartemisinin; HaCaT cells; caspase-3; UVB

(收稿：2017-05-10 修回：2017-06-22)