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        葡萄抗氧化作用的研究

        2017-11-03 05:44:54倉木決馬夢(mèng)婷黃婉雨李巧云
        中藥與臨床 2017年4期
        關(guān)鍵詞:紅景天空白對(duì)照紅細(xì)胞

        倉木決,馬夢(mèng)婷,黃婉雨,李巧云

        葡萄抗氧化作用的研究

        倉木決1,馬夢(mèng)婷2,黃婉雨3,李巧云4※

        目的:觀察葡萄有無抗氧化作用。方法:采用體內(nèi)抗氧化實(shí)驗(yàn),以紅景天為陽性對(duì)照,以蒸餾水為空白對(duì)照,將葡萄制汁以25%、50%、100%三種不同濃度給予小鼠灌胃20 d,測(cè)定小鼠紅細(xì)胞中的超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量。體外抗氧化實(shí)驗(yàn),直接用人血樣本測(cè)不同濃度葡萄汁對(duì)紅細(xì)胞中MDA的抑制率。結(jié)果:體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果顯示,紅景天組有抗氧化作用,與空白對(duì)照組比較P<0.05;而葡萄三個(gè)劑量組對(duì)SOD和MDA沒有明顯影響,與空白對(duì)照組比較P>0.05,沒有顯著性差異。體外抗氧化實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,不同濃度的葡萄汁對(duì)MDA都有一定的抑制作用。結(jié)論:葡萄具有體外抗氧化作用;但體內(nèi)抗氧化試驗(yàn)中葡萄對(duì)SOD和MDA并未見明顯作用。

        葡萄;抗氧化作用;超氧化物歧化酶;丙二醛

        葡萄(Vitis vinifera),又稱蒲桃、草龍珠、山葫蘆、李桃、美國(guó)黑提,屬于葡萄屬葡萄科植物葡萄的果實(shí),是世界最古老的植物之一。從中醫(yī)的角度來說,葡萄味甘、酸,性平,無毒。有很高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值,成熟的漿果中含有大量的葡萄糖,可被人體直接吸收;還有多種礦物質(zhì)、維生素和氨基酸?,F(xiàn)代的更多食品研究者將目光聚集在了葡萄中植物化學(xué)物的功效研究。植物化學(xué)物是植物的次級(jí)代謝產(chǎn)物,除個(gè)別維生素前體物外,均為非營(yíng)養(yǎng)成分[1],有研究者成功研究了葡萄籽的體外抗氧化功效,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明葡萄籽對(duì)自由基有較強(qiáng)清除作用[2]。也有以葡萄制品,如葡萄酒來進(jìn)行體內(nèi)抗氧化作用研究的,實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明食用了紅葡萄酒的實(shí)驗(yàn)組大鼠的抗氧化酶活性和對(duì)照組有顯著性差異,并有所提高[3]。本實(shí)驗(yàn)將通過觀察紅細(xì)胞中SOD和MDA的變化,探討葡萄的體內(nèi)和體外抗氧化功效。有助于對(duì)葡萄的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和食療作用進(jìn)行進(jìn)一步分析。

        1 實(shí)驗(yàn)材料

        1.1 原料與藥品

        葡萄,市售,500 g。用榨汁機(jī)榨汁過濾,即得原汁,濃度標(biāo)記為100%,實(shí)驗(yàn)中作為高濃度,置冰箱低溫儲(chǔ)存。實(shí)驗(yàn)時(shí)用蒸餾水將原汁配稀釋成50%(中濃度)、25%(低濃度)。

        紅景天混懸液,取生命紅景天膠囊(四川艾麗碧絲制藥有限公司,川衛(wèi)食準(zhǔn)字(2000)第069號(hào),每粒膠囊含0.3g藥物),配成藥物濃度為0.06%的混懸液。

        1.2 試劑

        SOD試劑盒(南京建成生物工程研究所,批號(hào):20110407);MDA測(cè)試盒(南京建成生物工程研究所,批號(hào):20110329)

        1.3 儀器

        紫外-可見分光光度計(jì)(UV-730,日本日立株式會(huì)社);自動(dòng)平衡離心機(jī)(TD24A-WS,長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司)

        1.4 動(dòng)物、血樣

        人血樣本,本校附院提供;

        昆明小鼠,體重19~21g,雌雄各25只,由成都中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心提供。

        2 試驗(yàn)方法

        2.1 體內(nèi)抗氧化實(shí)驗(yàn)

        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的準(zhǔn)備 取小鼠50只,雌雄各半,隨機(jī)分為五組:陽性對(duì)照組、空白對(duì)照組,高、中、低劑量實(shí)驗(yàn)組,每組10只,雌雄各5只。以每天0.2 mL﹒10g-1的劑量灌胃,實(shí)驗(yàn)組按高、中、低劑量分別給予濃度為100%、50%、25%的葡萄汁,陽性對(duì)照組的小鼠給予0.06%紅景天混懸液,空白對(duì)照組的小鼠給予蒸餾水,連續(xù)給藥20 d。最后一次給藥后50 min,通過摘取眼球的方法取各組小鼠的內(nèi)眥血約1mL,做肝素抗凝處理,測(cè)定SOD測(cè)試和MDA含量。

        2.1.2 小鼠紅細(xì)胞中SOD的測(cè)試 取小鼠肝素抗凝全血50 μL加入裝有3 mL生理鹽水的離心管中,以1500 r﹒min-1的速度離心3 min,除去上清液,得離心后沉淀。按照SOD試劑盒說明加入各試劑,測(cè)各管在550 nm吸光度值。

        2.1.3 小鼠紅細(xì)胞中MDA的測(cè)定 取小鼠肝素抗凝全血0.15 mL加入裝有3 mL生理鹽水的離心管中,按照MDA試劑盒說明加入各試劑。測(cè)各管532 nm吸光度值。

        2.2 體外抗氧化實(shí)驗(yàn)

        取新鮮人血樣本5 mL(5%EDTA抗凝),將血樣轉(zhuǎn)移入離心管以4000 r﹒min-1的速度離心10 min,將血漿分離,得到紅細(xì)胞,向其中加入等滲溶液至總體積80 mL,即得到紅細(xì)胞懸浮液。用葡萄原液稀釋配制成梯度濃度的葡萄待測(cè)液,濃度分別為5%、2.5%、1%、0.5%、0.25%、0.1%、0.05%。然后用潔凈干燥試管,按不同濃度分別給每支試管中加入1 mL紅細(xì)胞懸浮液,1 mL四氯化碳,1 mL葡萄待測(cè)液,作為實(shí)驗(yàn)測(cè)試管。再用潔凈干燥試管加入1 mL紅細(xì)胞懸液,1 mL四氯化碳和1 mL等滲磷酸鈉緩沖液,作為陽性對(duì)照管。按照MDA試劑盒說明加入各試劑。測(cè)各管532 nm吸光度值。葡萄的抗氧化作用以MDA的抑制率(IR%)表示。

        IR%=(OD陽性對(duì)照-OD實(shí)驗(yàn)測(cè)試組)*100%/OD陽性對(duì)照

        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

        3.1 體內(nèi)抗氧化實(shí)驗(yàn)結(jié)果

        3.1.1 小鼠紅細(xì)胞中SOD的測(cè)試結(jié)果 所有數(shù)據(jù)采用SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn),得到以下結(jié)果:見表1。

        表1 葡萄對(duì)小鼠紅細(xì)胞內(nèi)SOD的影響(n=10)X±SD

        紅景天組與空白對(duì)照組比較 *P<0.05,葡萄組與對(duì)照組比較P>0.05

        結(jié)果說明:葡萄的三個(gè)劑量實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組所得數(shù)據(jù)相比,P>0.05,未見到顯著性差異。紅景天組與空白對(duì)照組相比,P<0.05,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。紅景天組對(duì)小鼠SOD有抗氧化作用。

        3.1.2 小鼠紅細(xì)胞中MDA的測(cè)定結(jié)果 所有數(shù)據(jù)采用SPSS軟件進(jìn)行卡方檢驗(yàn),得到以下結(jié)果:見表2。

        表2 葡萄對(duì)小鼠紅細(xì)胞內(nèi)MDA的影響(n=10)X±SD

        紅景天組與空白對(duì)照組比較 *P<0.05,葡萄組與對(duì)照組比較P>0.05

        結(jié)果說明:葡萄的三個(gè)劑量實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組所得數(shù)據(jù)相比,P>0.05,未見到顯著性差異,紅景組天與空白對(duì)照組相比,P<0.05,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。紅景天組對(duì)小鼠MDA有抑制作用。

        3.2 體外抗氧化實(shí)驗(yàn)結(jié)果將各管的吸光度測(cè)出后,用“2.2”公式計(jì)算IR%后得到以下結(jié)果,見表3。

        表3 葡萄體外抗氧化實(shí)驗(yàn)(n=10)

        結(jié)果說明:體外實(shí)驗(yàn)中,葡萄能抑制紅細(xì)胞中MDA的產(chǎn)生,具有體外抗氧化作用。且有一定量效關(guān)系。

        4 討論

        本實(shí)驗(yàn)的局限性:食品不同于藥物,本次實(shí)驗(yàn)的實(shí)施時(shí)間有限,只有20 d,給小鼠進(jìn)行葡萄的灌胃,雖然能保證進(jìn)食量,但食品的功效不一定在短期內(nèi)就能夠體現(xiàn)出來,可能需要較長(zhǎng)時(shí)間才能表現(xiàn)出來。比如在郭金英等人做的紅葡萄酒抗大鼠脂質(zhì)過氧化作用的研究[3]中,就對(duì)大鼠進(jìn)行了為期12 w的灌胃。其次就是實(shí)驗(yàn)過程中對(duì)葡萄的保存問題:本次試驗(yàn)是將葡萄制成原汁后進(jìn)行冰箱低溫保存,這個(gè)過程中可能存在葡萄汁中有效物質(zhì)的喪失。

        通過查閱文獻(xiàn)可以看出葡萄的確充滿了營(yíng)養(yǎng)價(jià)值,特別是它的抗氧化功效,更是對(duì)人體健康保護(hù)具有積極作用。但葡萄的食用價(jià)值不僅僅如此,它對(duì)人體的健康促進(jìn)作用也非局限于葡萄的抗氧化功效。因此,對(duì)葡萄的特殊功效研究和有效成分的開發(fā)還具有無限的潛力。希望通過本文,能夠讓更多的人了解葡萄,重視葡萄的食療價(jià)值,從而通過食品來促進(jìn)人類的健康。

        [1] 孫長(zhǎng)顥.營(yíng)養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué).北京:人民衛(wèi)生出版社,2007,110.

        [2] 許申鴻,杭瑚,郝曉麗.葡萄籽化學(xué)成分分析及其抗氧化性質(zhì)的研究.食品工業(yè)科技.2000,21(2):18.

        [3] 李華.第四屆國(guó)際葡萄與葡萄酒學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集.陜西:陜西人民出版社,2005,196.

        Study on the antioxidant effect of grape/

        CANGMU Jue, MA Meng-ting, HUANG Wan-yu, LI Qiao-yun//(1. First People 's Hospital of Tibet, Lhasa 85000, Tibet;2.Chengdu Center for Disease Control &Prevention, Chengdu 610041, Sichuan; 3. Science and Technology Department of Tibet, Lhasa 85000, Tibet;4.Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610075, Sichuan)

        Objective: To investigate the antioxidant effect of grape. Method: In vivo experiment, rhodiola was used as positive control and distilled water as blank control. Three different concentrations of grape juice (25%, 50%, 100% ) were fed to the mice for 20 days. The contents of superoxide dismutase (SOD) and malondialdehyde ( MDA) in mice erythrocyte were detected. In vitro experiment, the inhibitory rate of different concentrations of the grape juice on MDA in human blood were tested.Result: The result of in vivo experiments showed that rhodiola had antioxidant effect compared with the blank control (P<0.05).There was no statistically signi fi cant difference of SOD and MDA between the blank control group and each of the three different concentrations of the grape juice ( P>0.05). The result of in vitro experiment showed that different concentrations of the grape juice had an inhibitory effect on MDA. Conclusion: Grape has antioxidant effect in vitro, but no obvious effect on SOD and MDA in vivo antioxidation experiment in mice。

        Grape; antioxidation; SOD;MDA

        R 285

        A

        1674-926X(2017)04-010-02

        1 西藏自治區(qū)第一人民醫(yī)院 西藏,拉薩 850000;2 四川省疾控中心 四川,成都 610041;3 西藏科技廳 西藏,拉薩 850000;4 成都中醫(yī)藥大學(xué) 四川成都 610075

        參木決,女,(1973-),主管藥師,從事藥房處方調(diào)劑的研究Tel:0891-6371936 Email:109548977@qq.com

        李巧云,女,教授 Email:xyqlqy@126.com

        2016-03-24

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