邱偉慶

山東省萊州市人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科(萊州261400)

血漿ADMA和血小板膜糖蛋白在急性腦梗死患者中的表達(dá)及關(guān)系的研究

邱偉慶

山東省萊州市人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科(萊州261400)

目的：分析血漿非對(duì)稱二甲基精氨酸(ADMA)及血小板膜糖蛋白CD62P、FIB-R對(duì)腦梗死的影響及ADMA、CD62P、FIB-R與腦梗死之間的相互關(guān)系。方法：收集急性腦梗死患者30例(腦梗死組)及健康體檢者25例(對(duì)照組)，采用高效液相色譜法檢測(cè)兩組的血漿ADMA水平，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)血小板表面活性標(biāo)記糖蛋白CD62P、FIB-R表達(dá)。應(yīng)用直線相關(guān)分析法分析腦梗死組血漿ADMA與中風(fēng)危險(xiǎn)因素及血小板膜糖蛋白表達(dá)之間的關(guān)系，并探討ADMA對(duì)腦梗死的影響。結(jié)果:急性腦梗死組血漿ADMA濃度、血小板膜糖蛋白CD62P、FIB-R增高，分別與對(duì)照組比較，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均<0.05)；膽固醇，高血壓，糖尿病，ADMA與腦梗死發(fā)病相關(guān)，腦梗死患者ADMA濃度與血小板膜糖蛋白CD62P、FIB-R正相關(guān)。結(jié)論：血漿ADMA及血小板膜糖蛋白CD62P、FIB-R與腦梗死發(fā)病有一定相關(guān)性，血漿ADMA濃度增高主要通過(guò)影響血小板活化引起腦梗死的發(fā)生。

近年來(lái)，腦梗死的發(fā)病率逐漸增高。在腦梗死發(fā)病過(guò)程中血小板活化起重要作用，臨床可通過(guò)檢測(cè)患者血漿血小板膜糖蛋白來(lái)觀察血小板活化水平。同時(shí)，許多研究表明，腦梗死患者血漿非對(duì)稱二甲基精氨酸(Asymmetric dimethylarginine，ADMA)增高。ADMA可作為心腦血管病獨(dú)立的危險(xiǎn)因子與病死率預(yù)測(cè)因子[1]。其競(jìng)爭(zhēng)性與eNOS特異性相結(jié)合，從而減少NO生成[2]，因此，其對(duì)NO的合成起非常重要的調(diào)節(jié)作用[3]。本研究旨在觀察急性腦梗死患者血小板膜糖蛋白和ADMA的表達(dá)水平，同時(shí)觀察其相互關(guān)系，為更好地探索腦梗死的發(fā)病機(jī)制及治療手段提供進(jìn)一步依據(jù)。

資料和方法

1 一般資料 選擇2016年6月至2017年1月間急性腦梗死患者30例(腦梗死組)，男22例，女8例，年齡55～75歲，平均年齡(64.10±11.15)歲，其中吸煙者13例。所選取的病例符合《中國(guó)急性缺血性卒中診療指南2014》關(guān)于腦梗死的診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]，均為初次發(fā)病，發(fā)病前2周及發(fā)病后48h內(nèi)均未服用任何影響檢測(cè)血小板的藥物。排除腦出血、腎功能衰竭、腫瘤、甲狀腺機(jī)能減退、長(zhǎng)期服用維生素、雌激素等患者。另外選擇我院體檢中心的健康查體者25例(對(duì)照組)，男13例，女12例，年齡55～72歲，平均年齡(60.56±5.08)歲，其中吸煙者7例。兩組一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)，且排除上述疾病且無(wú)血緣關(guān)系。

2 檢測(cè)方法 使用流式細(xì)胞儀(美國(guó)BECTON-DICKSON公司)，色譜柱 Kromasil(琛航公司)，高效液相色譜儀(Waters-600E)，RF-10AXL熒光檢測(cè)器(日本島津公司)。于入院次日清晨(空腹8 h)留取兩組靜脈血4 ml置于EDTA 真空采血管中，快速加蓋，顛轉(zhuǎn)混勻5次，10 min之內(nèi)進(jìn)行血小板激活和染色，標(biāo)本在24 h內(nèi)上機(jī)分析，獲取數(shù)據(jù)。同時(shí)采取外周靜脈血5 ml，將其置于EDTA 真空采血管中。室溫靜置30 min，2 500 r/min離心15 min，離心半徑10 cm，留上層血漿置于-80 ℃冰箱保存，以備測(cè)量ADMA。將血漿樣品加氰化鉀溶液30 ml，混勻30 s，室溫靜置10 min；加入NDA應(yīng)用液30 ml，置室溫保持20 min，冰浴終止反應(yīng)，取50 μl進(jìn)行HPLC 分析。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 15.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用t檢驗(yàn)及方差分析(ANOVA)，并行Pearson相關(guān)分析。應(yīng)用Logistic回歸分析對(duì)ADMA和其他危險(xiǎn)因素與腦梗死的關(guān)系進(jìn)行評(píng)估。P<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

結(jié) 果

1 兩組腹圍、體重指數(shù)及合并癥比較 腦梗死組腹圍、膽固醇含量、高血壓、體重指數(shù)及糖尿病等指標(biāo)均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 兩組腹圍、體重指數(shù)及合并癥比較

2 兩組ADMA及血小板膜糖蛋白表達(dá)比較 腦梗死組ADMA表達(dá)高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；腦梗死組FIB-R表達(dá)高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；腦梗死組CD62P表達(dá)高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 兩組血漿ADMA濃度和

注：與對(duì)照組比較，*t=4.084，P<0.05；△t=6.427，P<0.05；▲t=8.734，P<0.05

3 腦梗死組危險(xiǎn)因素多因素非條件Logistic回歸分析 結(jié)果顯示，腹圍、體重指數(shù)、膽固醇、高血壓、糖尿病、ADMA與腦梗死的發(fā)病有關(guān)(P<0.05)。Logistic回歸分析顯示，膽固醇、高血壓、糖尿病、ADMA與腦梗死發(fā)病相關(guān)，優(yōu)勢(shì)比分別為1.236、3.568、3.969及1.104(P均<0.05)，提示其可作為腦梗死的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，見表3～4。

表3 腦梗死組危險(xiǎn)因素與單因素分析

表4 腦梗死組危險(xiǎn)因素與多因素非條件Logistic回歸分析

4 腦梗死患者血漿ADMA濃度與血小板膜糖蛋白表達(dá)及中風(fēng)危險(xiǎn)因素關(guān)系 結(jié)果顯示，腦梗死患者血漿ADMA濃度與FIB-R、CD62P、年齡、高血壓呈正相關(guān)(P均<0.05)；與腹圍、膽固醇、體重指數(shù)、糖尿病、吸煙無(wú)相關(guān)性(P>0.05)，見表5。

表5 血漿ADMA濃度與血小板膜糖蛋白表達(dá)及中風(fēng)危險(xiǎn)因素的關(guān)系

討 論

以往研究發(fā)現(xiàn)，韓國(guó)人群腦梗死患者血漿ADMA濃度升高[5]。另一項(xiàng)研究證實(shí)血漿ADMA增高與頸動(dòng)脈內(nèi)膜中膜厚度有關(guān)[6]。ADMA與腦梗死的發(fā)生關(guān)系密切，并且可以作為缺血性腦血管病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[7]。ADMA抑制血管NO生成，而NO可以抑制血小板黏附、聚集，提示了ADMA在腦血管病發(fā)病過(guò)程中起了重要作用[8]。腦梗死發(fā)生發(fā)展主要與血小板具有的活化功能有關(guān)，血小板膜纖維蛋白原受體表達(dá)及GPⅡb/Ⅲa復(fù)合物含量增加，可以作為血小板活化的重要標(biāo)志，F(xiàn)IB-R和CD62p是目前檢測(cè)早期和晚期血小板活化程度和功能狀態(tài)的特異性標(biāo)志物[9-11]。

動(dòng)脈粥樣硬化是腦梗死的主要病因。研究表明，血漿升高的ADMA濃度與腦梗死的危險(xiǎn)因素如高脂血癥、糖尿病、高血壓等呈正相關(guān)。先前的研究結(jié)果顯示，腦梗死患者血漿ADMA濃度高于對(duì)照組[12-13]，與本研究結(jié)果一致。但僅憑此結(jié)果尚不能證明ADMA濃度升高與腦梗死的因果關(guān)系。Yoo等[5]研究提示，血漿ADMA濃度升高在腦血管病發(fā)病中起重要的角色。ADMA通過(guò)影響腦血管血液循環(huán)[14]，增加發(fā)病危險(xiǎn)因素，提高腦血管緊張度[15]。本研究顯示，膽固醇、高血壓、糖尿病等危險(xiǎn)因素與腦梗死關(guān)系密切，患者血漿ADMA濃度與腦梗死有一定相關(guān)性，提示血漿ADMA增高可以作為腦血管病的危險(xiǎn)因素之一。同時(shí)，本研究顯示，血漿ADMA濃度與高血壓、年齡成正相關(guān)，但并未發(fā)現(xiàn)血漿ADMA濃度與膽固醇[8]、糖尿病有明顯相關(guān)性，同時(shí)也未發(fā)現(xiàn)患者血漿ADMA濃度與體重指數(shù)、吸煙、腹圍等腦血管病危險(xiǎn)因素相關(guān)性。ADMA通過(guò)損害NO依賴的內(nèi)皮功能起作用，但有別于其他傳統(tǒng)腦血管病的危險(xiǎn)因素。因此我們推測(cè)ADMA可以作為腦血管病其他傳統(tǒng)危險(xiǎn)因素以外的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

本研究還顯示，腦梗死患者血漿ADMA濃度與血小板膜糖蛋白FIB-R、CD62P成正相關(guān)，提示血漿ADMA濃度的增高的同時(shí)，血小板膜糖蛋白FIB-R、CD62P也隨之增高。支持血漿ADMA與腦梗死的關(guān)聯(lián)性部分是通過(guò)影響血小板活化功能起作用的。血小板活化可以作為腦血管閉塞的元兇。NO既是舒血管因子，還可以抗血小板的黏附和聚集。ADMA作為內(nèi)源性eNOS的抑制物，可以減少NO生成?？梢?，ADMA可能是通過(guò)NO依賴的途徑影響腦梗死患者血小板活化功能。因此，我們可以通過(guò)減少ADMA的生成，降低血小板活化功能來(lái)治療腦梗死。

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(收稿：2017-04-19)

腦梗塞 @非對(duì)稱二甲基精氨酸 血小板膜糖蛋白類

R743.33

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10.3969/j.issn.1000-7377.2017.10.043