李寶芬 閆國(guó)強(qiáng) 董晶晶

(河北省滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院中藥制劑室，河北 滄州 061001)

竺黃醒腦膠囊抗血栓形成作用的實(shí)驗(yàn)研究※

李寶芬 閆國(guó)強(qiáng) 董晶晶

(河北省滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院中藥制劑室，河北 滄州 061001)

目的研究竺黃醒腦膠囊對(duì)血栓形成的抑制作用，為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。方法采用角叉菜膠致大鼠血栓形成模型和實(shí)驗(yàn)性腦血栓形成模型，分別觀察竺黃醒腦膠囊的相關(guān)藥理作用。結(jié)果大鼠皮下注射角叉菜膠后，多數(shù)大鼠的尾尖部在24 h內(nèi)出現(xiàn)黯紅色血栓形成區(qū)，并逐漸向尾根部擴(kuò)大，24～48 h顏色加深變黑，且與正常尾部分界明顯。模型1組大鼠黑尾長(zhǎng)度較正常1組增加(P<0.05)，說(shuō)明造模成功。竺黃醒腦膠囊小、中、大劑量1組及阿司匹林1組黑尾長(zhǎng)度均低于模型1組(P<0.05，P<0.01)，說(shuō)明給藥治療有效。竺黃醒腦膠囊小、中、大劑量1組及阿司匹林1組兩兩比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。模型1組大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)均較正常1組升高(P<0.05)，說(shuō)明造模成功。竺黃醒腦膠囊小、中、大劑量1組及阿司匹林1組血液流變學(xué)指標(biāo)均低于模型1組(P<0.05，P<0.01)，說(shuō)明給藥治療有效。竺黃醒腦膠囊小、中、大劑量1組及阿司匹林1組兩兩比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。竺黃醒腦膠囊小、中、大劑量2組及阿司匹林2組吸光度(OD)/腦質(zhì)量均低于模型2組(P<0.05，P<0.01)，說(shuō)明給藥治療有效。竺黃醒腦膠囊小劑量2組OD/腦質(zhì)量高于阿司匹林2組(P<0.05)，竺黃醒腦膠囊中、大劑量2組及阿司匹林2組OD/腦質(zhì)量?jī)蓛杀容^差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論竺黃醒腦膠囊對(duì)血栓形成有一定的抑制作用，研究結(jié)果為臨床用藥提供了必要的藥理學(xué)依據(jù)。

血栓形成；藥物療法；中藥療法；膠囊；動(dòng)物，實(shí)驗(yàn)

竺黃醒腦膠囊是河北省滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院腦病科應(yīng)用多年的方劑，由天竺黃、石菖蒲、清半夏、郁金、地龍、川芎、赤芍、薏苡仁等組成，具有滌痰散濁、活血祛毒功效，用于痰濁內(nèi)蘊(yùn)、瘀血阻絡(luò)所致半身不遂，舌強(qiáng)語(yǔ)謇，肢體麻木，口眼歪斜，體胖有痰，或伴見昏沉不適，視物模糊，納差惡心，口中黏膩，舌質(zhì)黯紅、苔黃膩、脈弦滑或弦澀等癥；腦梗死或腦出血恢復(fù)期見上述證候者。經(jīng)多年臨床應(yīng)用，取得了較好的臨床療效。本實(shí)驗(yàn)以角叉菜膠致大鼠血栓形成和實(shí)驗(yàn)性腦血栓形成為模型，觀察竺黃醒腦膠囊抑制血栓形成的作用，旨在為竺黃醒腦膠囊的臨床應(yīng)用提供合理的科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 Wistar大鼠(清潔級(jí))120只，雄性，體質(zhì)量230～250 g，由河北省滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)：1303083。動(dòng)物飼料為消毒飼料，墊料為消毒墊料，亦由該動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。實(shí)驗(yàn)室使用許可證號(hào)：SYXK(冀)2011-0047，動(dòng)物室環(huán)境：室溫為20～23 ℃，相對(duì)濕度為40%～60%。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥物和試劑 竺黃醒腦膠囊，由河北省滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院提供，規(guī)格為每粒裝0.5 g，批號(hào)120103。用蒸餾水制成相當(dāng)于所需含生藥濃度的混懸液備用。臨床成人體質(zhì)量按70 kg計(jì)，每日用量7.5 g，即0.107 g/kg。竺黃醒腦膠囊小、中、大劑量組為0.38、0.76、1.52 g/kg，分別相當(dāng)于臨床用藥的3.5、7、14倍。阿司匹林腸溶片(山西太原藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H14021955)，臨床成人體質(zhì)量按70 kg計(jì)，每日用量150 mg,即2.14 mg/kg。大鼠用量按相當(dāng)于臨床用藥的7倍計(jì)算，即15 mg/kg。角叉菜膠(Sigma公司，批號(hào)：110506)；鹽酸腎上腺素注射液(天津金耀氨基酸有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H12020526)；凝血酶(天津金耀氨基酸有限公司，批號(hào)1110211)；二磷酸腺苷(ADP，Sanland chemicai CO.LTD)；伊文思蘭(美國(guó)Fluka公司)。水合氯醛(天津市大茂化學(xué)試劑廠)；硫酸鈉(Na2SO4，天津市天大化學(xué)試劑廠)；丙酮(天津市天力化學(xué)試劑有限公司)。

1.1.3 儀器 全自動(dòng)血流變分析儀(LBY-N7500B型，北京普利生儀器有限公司)；得力6220直尺(得力集團(tuán)有限公司)；可調(diào)電動(dòng)勻漿機(jī)(FS-1型，常州華冠儀器制造有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 竺黃醒腦膠囊對(duì)角叉菜膠致大鼠血栓形成的影響

1.2.1.1 動(dòng)物選擇及分組 將60只Wistar大鼠隨機(jī)分為6組，正常1組、模型1組、阿司匹林1組及竺黃醒腦膠囊小、中、大劑量1組，每組10只。

1.2.1.2 模型制備及給藥方法 阿司匹林組(0.015 g/kg)及竺黃醒腦膠囊小(0.38 g/kg)、中(0.76 g/kg)、大(1.52 g/kg)劑量1組連續(xù)灌胃給藥14 d，每日1次，容積為1 mL/100 g體質(zhì)量，正常1組及模型1組予等容積純凈水。末次給藥前48 h，除正常1組外，其余各組大鼠足跖部皮下注射1%角叉菜膠(0.05 mL/100 g體質(zhì)量)誘發(fā)大鼠血栓形成[1]。

1.2.1.3 觀察指標(biāo)及方法 末次給藥后40 min，測(cè)量黑尾長(zhǎng)度，腹主動(dòng)脈取血，檢測(cè)血液流變學(xué)指標(biāo)(紅細(xì)胞聚集指數(shù)、全血黏度)。

1.2.2 竺黃醒腦膠囊對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦血栓形成的影響

1.2.2.1 動(dòng)物選擇及分組 將60只Wistar大鼠隨機(jī)分為6組，正常2組、模型2組、阿司匹林2組及竺黃醒腦膠囊小、中、大劑量2組，每組10只。

1.2.2.2 模型制備及給藥方法 阿司匹林2組(0.015 g/kg)及竺黃醒腦膠囊小(0.38 g/kg)、中(0.76 g/kg)、大(1.52 g/kg)劑量2組連續(xù)灌胃給藥7 d，每日1次，容積為1 mL/100 g體質(zhì)量，正常2組及模型2組予等容積純凈水。末次給藥后40 min，分別腹腔注射10%水合氯醛麻醉，仰位固定，頸部正中切口，分離結(jié)扎右側(cè)頸外動(dòng)脈，于右側(cè)頸總動(dòng)脈遠(yuǎn)心方向插入三通管。阿司匹林2組及竺黃醒腦膠囊小、中、大劑量2組大鼠經(jīng)三通管注入血栓誘導(dǎo)劑[ADP(1.25 mmol/L)：凝血酶(12.5 U/mL)：鹽酸腎上腺素注射液(1 mg/mL)按照100∶200∶5的比例]0.1 mL/100 g體質(zhì)量，模型2組大鼠注入等容積0.9%氯化鈉注射液，正常2組注入等容積0.9%氯化鈉注射液。5 min后，注入0.2%伊文思蘭0.5 mL/100 g體質(zhì)量，再過5 min，迅速斷頭，取兩大腦半球，稱質(zhì)量，置勻漿器中，加入0.5% Na2SO4溶液3 mL及丙酮7 mL，制成勻漿，密封放置60 min以上，3 000 r/min離心10 min，取上清液，以0.9%氯化鈉注射液調(diào)零，在620 nm處測(cè)吸光度(OD)。

1.2.2.3 觀察指標(biāo)及方法 以O(shè)D/腦質(zhì)量表示伊文思蘭的含量，以此表示腦血栓的嚴(yán)重程度[2]。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠黑尾長(zhǎng)度比較 大鼠皮下注射角叉菜膠后，多數(shù)大鼠的尾尖部在24 h內(nèi)出現(xiàn)黯紅

色血栓形成區(qū)，并逐漸向尾根部擴(kuò)大，24～48 h顏色加深變黑，且與正常尾部分界明顯。各組大鼠黑尾長(zhǎng)度比較見表1。

組 別n劑量(g/kg)黑尾長(zhǎng)度正常1組10——模型1組10—3．2±1．08?竺黃醒腦膠囊小劑量1組100．381．9±0．61△△竺黃醒腦膠囊中劑量1組100．761．5±0．36△△竺黃醒腦膠囊大劑量1組101．521．8±0．95△阿司匹林1組100．0151．6±0．58△△

與正常1組比較，*P<0.05；與模型1組比較，△P<0.05，△△P<0.01

由表1可見，模型1組大鼠黑尾長(zhǎng)度較正常1組增加(P<0.05)，說(shuō)明造模成功。竺黃醒腦膠囊小、中、大劑量1組及阿司匹林1組黑尾長(zhǎng)度均低于模型1組(P<0.05，P<0.01)，說(shuō)明給藥治療有效。竺黃醒腦膠囊小、中、大劑量1組及阿司匹林1組兩兩比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.2 各組大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)變化比較 見表2。

組 別n劑量(g/kg)紅細(xì)胞聚集指數(shù)全血黏度(低切)(mPa·s)全血黏度(中切)(mPa·s)全血黏度(高切)(mPa·s)正常1組10—1．99±0．128．31±0．914．93±0．394．17±0．27模型1組10—3．07±0．22?22．53±2．23?10．05±0．59?7．34±0．40?竺黃醒腦膠囊小劑量1組100．382．53±0．15△△12．94±1．62△△6．79±0．62△△5．11±0．40△△竺黃醒腦膠囊中劑量1組100．762．46±0．10△△12．18±1．28△△6．35±0．42△△4．95±0．38△△竺黃醒腦膠囊大劑量1組101．522．44±0．11△△12．49±0．94△△6．47±0．50△△5．12±0．39△△阿司匹林1組100．0152．34±0．13△△12．72±1．10△6．57±0．42△△5．44±0．35△△

與正常1組比較，*P<0.05；與模型1組比較，△P<0.05，△△P<0.01

由表2可見，模型1組大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)均較正常1組升高(P<0.05)，說(shuō)明造模成功。竺黃醒腦膠囊小、中、大劑量1組及阿司匹林1組血液流變學(xué)指標(biāo)均低于模型1組(P<0.05，P<0.01)，說(shuō)明給藥治療有效。竺黃醒腦膠囊小、中、大劑量1組及阿司匹林1組兩兩比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.3 各組大鼠OD/腦質(zhì)量比較 見表3。

由表3可見，注入血栓誘導(dǎo)劑后，腦勻漿上清液吸收度增大，說(shuō)明伊文斯蘭通過血腦屏障滲入腦實(shí)質(zhì)的量增加，造模成功。正常組注入0.9%氯化鈉注射液，無(wú)血栓形成，腦勻漿上清液中幾乎檢測(cè)不到伊文斯蘭的吸收度。竺黃醒腦膠囊小、中、大劑量2組及阿司匹林2組OD/腦質(zhì)量均低于模型組(P<0.05，P<0.01)，說(shuō)明給藥治療有效。竺黃醒腦膠囊小劑量2組OD/腦質(zhì)量高于阿司匹林2組(P<0.05)，竺黃醒腦膠囊中、大劑量2組及阿司匹林2組OD/腦質(zhì)量?jī)蓛杀容^差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

組 別n劑量(g/kg)OD/腦質(zhì)量正常2組10——模型2組10—0．194±0．0260竺黃醒腦膠囊小劑量2組100．380．163±0．0255?△竺黃醒腦膠囊中劑量2組100．760．104±0．0371??竺黃醒腦膠囊大劑量2組101．520．125±0．0354??阿司匹林2組100．0150．075±0．0354??

與模型2組比較，*P<0.05，**P<0.01；與阿司匹林2組比較，△P<0.05

3 討 論

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，機(jī)體在臟腑陰陽(yáng)失調(diào)的基礎(chǔ)上，加之勞倦內(nèi)傷、憂思惱怒、飲酒飽食、勞逸過度，致使瘀血阻滯，痰瘀互結(jié)，氣血失和，從而腦脈痹阻，發(fā)為中風(fēng)。近年來(lái)，我們根據(jù)老年病的病變特點(diǎn)及腦系疾病的病理生理基礎(chǔ)，結(jié)合大量的臨床實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，提出了對(duì)中風(fēng)發(fā)病機(jī)制的新認(rèn)識(shí)，并形成了一套治療中風(fēng)的新思路與新方法。我們認(rèn)為中風(fēng)病位在腦，痰濁瘀毒是中風(fēng)發(fā)生發(fā)展的主要病理機(jī)制。腦為髓之海，髓乃津液所化生，故腦病多為津液病。津液運(yùn)化失常，則化生水濕，水濕久之，蘊(yùn)結(jié)不散，釀生痰濁，痰濁既生，毒易相兼。濁毒客腦，擾于血循，凝滯不暢，壅塞為瘀。腦處極頂，氣血斡旋，易郁多滯。氣郁清竅，血滯脈絡(luò)，互助為虐。血瘀脈絡(luò)，水津不布，蓄淀成濁。人至老年，腎氣漸衰，腎內(nèi)寓元陽(yáng)，為陽(yáng)氣之本，元陽(yáng)不足，濁瘀則無(wú)以消散。濁瘀相兼，互為因果，蒙蔽清竅，敗壞腦絡(luò)。滌痰散濁、活血祛毒法是根據(jù)中風(fēng)的痰濁瘀毒病理機(jī)制而制定的中醫(yī)治療方法。

竺黃醒腦膠囊選方使用具有滌痰散濁、活血祛毒功效的常用中藥酌定劑量后合理配伍而成，主要有天竺黃、石菖蒲、清半夏、郁金、地龍、川芎、赤芍、薏苡仁、茯苓、鹽澤瀉、梔子、防風(fēng)等?，F(xiàn)代藥理研究表明，天竺黃可顯著延長(zhǎng)血漿復(fù)鈣時(shí)間，在血凝實(shí)驗(yàn)中，該藥能延長(zhǎng)凝血時(shí)間[3]；石菖蒲對(duì)心血管系統(tǒng)有保護(hù)作用，石菖蒲揮發(fā)油β-細(xì)辛醚在一定濃度下有使豚鼠冠狀血管擴(kuò)張的作用，臨床常用于冠心病、肺心病等屬于痰濁氣滯之胸痹的治療，其機(jī)制可能與其能增加冠脈流量有關(guān)[4]。石菖蒲加冰片能降低血小板活化，有抗血小板黏附和聚集、抑制血栓形成的作用[5]；半夏有較明顯的抗心律失常作用，能顯著延長(zhǎng)大鼠實(shí)驗(yàn)性體內(nèi)血栓形成時(shí)間，并有延長(zhǎng)凝血時(shí)間的傾向[6]；郁金能降低紅細(xì)胞聚集性，提高紅細(xì)胞的變形能力及抗氧化免疫黏附能力，減少自由基對(duì)紅細(xì)胞膜的損傷，延長(zhǎng)其壽命，維持正常的血液黏度[7]；地龍?zhí)崛∥锟裳娱L(zhǎng)血栓形成時(shí)間，既抗凝又止血，還有明顯的降壓作用[8]；川芎對(duì)腦缺血、缺氧再灌注損傷及腦梗死損傷都具有保護(hù)作用，川芎嗪能改善微循環(huán)，增加腦皮質(zhì)流量，促進(jìn)神經(jīng)系統(tǒng)恢復(fù)[9]；茯苓能保護(hù)免疫器官，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能[10]；薏苡仁具有抗動(dòng)脈血栓形成和抗凝血作用[11]；澤瀉具有利尿、降血糖、降血脂及抗動(dòng)脈粥樣硬化作用[12]。近年來(lái)，隨著物質(zhì)生活水平的提高和生活節(jié)奏的加快，冠心病、原發(fā)性高血壓、腦血管疾病的發(fā)病率大大提高，這些疾病的發(fā)生與血液流變學(xué)異常、血液黏度增加、紅細(xì)胞聚集能力增強(qiáng)等有關(guān)，我們綜合上述各單味藥的藥理作用及組方原理，根據(jù)疾病發(fā)生的有關(guān)影響因素，設(shè)計(jì)了竺黃醒腦膠囊的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?/p>

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，竺黃醒腦膠囊可明顯減弱角叉菜膠引起的大鼠血栓，顯著降低血栓大鼠的紅細(xì)胞聚集指數(shù)及高、中、低切全血黏度，竺黃醒腦膠囊各劑量組均療效顯著，與陽(yáng)性對(duì)照藥阿司匹林腸溶片達(dá)到相似的治療效果。在改善實(shí)驗(yàn)性腦血栓的嚴(yán)重程度方面，竺黃醒腦膠囊小劑量組療效不如陽(yáng)性藥阿司匹林腸溶片及竺黃醒腦膠囊中、大劑量組，提示竺黃醒腦膠囊對(duì)血栓形成有一定的抑制作用，建議臨床應(yīng)用時(shí)的劑量參考竺黃醒腦膠囊中劑量。這一結(jié)果為臨床用藥提供了必要的藥理學(xué)依據(jù)。

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Experimentalstudyontheactionofanti-thrombosisofZhuhuang-xingnaocapsule

LIBaofen*,YANGuoqiang,DONGJingjing.*

PreparationRoomofChinesemedicine,CangzhouHospitalofIntegratedTraditionalChineseandWesternMedicineinHebeiProvince,Hebei,Cangzhou061001

ObjectiveTo study the inhibitory effect of Zhuhuang-xingnao capsule on thrombosis for providing theoretical basis for clinical application.MethodsThe rats were treated with carrageen glue to induced thrombosis model and experimental cerebral thrombosis model, and the related pharmacological effects of Zhuhuang-xingnao capsule were observed respectively.ResultsAfter subcutaneous injection of carrageen glue, the tail tip of the majority of rats appeared a dark red thrombosis area within 24 h, and gradually expanded to the tail root, and the color deepened and darkened in 24～48 h with the normal tail boundaries clear. The length of black tail in model group 1 was higher than that in normal group 1 (P<0.05), which indicated that the model was successful. The length of black tail in small,medium and high dosage of Zhuhuang-xingnao capsule group 1 and aspirin group 1 were shorter than that in model group (P<0.05,P<0.01), which indicated that the treatment was effective. There was no statistical difference among in small,medium and high dosage of Zhuhuang-xingnao capsule group 1 and aspirin group 1 (P>0.05). The hemorheology indexes in model group 1 were higher than those in normal group (P<0.05), which indicated that the model was successful. The hemorheology indexes in small,medium and high dosage of Zhuhuang-xingnao capsule group 1 and aspirin group 1 were lower than those in model group (P<0.05,P<0.01), which indicated that the treatment was effective. There was no statistical difference among in small,medium and high dosage of Zhuhuang-xingnao capsule group 1 and aspirin group 1 (P>0.05). The optical density (OD)/brain mass in small,medium and high dosage of Zhuhuang-xingnao capsule group 2 and aspirin group 2 were lower than those in model group 2 (P<0.05,P<0.01), which indicated that the treatment was effective. The OD/brain mass in small dosage of Zhuhuang-xingnao capsule group 2 was higher than that in aspirin group 2 (P<0.05). There was no statistical difference among the medium and high dosage of Zhuhuang-xingnao capsule group 2 and aspirin group 2 (P>0.05).ConclusionZhuhuang-xingnao capsule has a certain inhibitory effect on thrombosis, and the results provide the necessary pharmacological basis for clinical medication.

Thrombosis; Pharmacotherapy; Traditional Chinese medicine therapy; Capsule; Animal; Experiment

R543.053；R-331；R283.65

A

1002-2619(2017)09-1364-05

2017-01-17)

(本文編輯：習(xí) 沙)

10.3969/j.issn.1002-2619.2017.09.022

※ 項(xiàng)目來(lái)源：國(guó)家中醫(yī)藥管理局關(guān)于全國(guó)中藥特色技術(shù)傳承人才培訓(xùn)項(xiàng)目(編號(hào)：2015481601003)

李寶芬(1969—)，女，主任中藥師，學(xué)士。從事中藥新制劑的開發(fā)研究及中藥材鑒定工作。