□ 王 妮 長春職業(yè)技術學院 食品分院 劉長姣 吉林工商學院 糧油食品深加工實驗室 李雪璨 長春職業(yè)技術學院 食品分院

微波萃取分光光度法測定紅景天總黃酮含量的不確定度評定

□ 王 妮 長春職業(yè)技術學院 食品分院 劉長姣 吉林工商學院 糧油食品深加工實驗室 李雪璨 長春職業(yè)技術學院 食品分院

評定微波萃取分光光度法測定紅景天總黃酮含量的不確定度，建立了數(shù)學模型，對模型中各影響因素的不確定度進行計算和評定。結果表明，樣品液中總黃酮濃度的不確定度Urelsam(C)是合成不確定度的主要來源，其中標準樣品配置帶來的不確定度urelstd(C)影響最大。按照JJF1059-2012對各不確定度分量合成和擴展，測得的擴展不確定度為0.70 g/100g（置信概率95%）。

紅景天；不確定度；分光光度法；總黃酮

紅景天是藥食同源中藥材，現(xiàn)代藥理學研究表明，紅景天具有抗衰老、抗缺氧、抗疲勞、提高免疫力等作用[1]。紅景天中黃酮類化合物具有防止心腦血管疾病、降血糖、增強免疫力等多種功效，已被列為保健食品的功能因子[2-3]。本文在前期建立的微波萃取-分光光度法提取和測定紅景天總黃酮成分的基礎上，根據(jù)JJF1059－2012[4]，對微波萃取-分光光度法測定紅景天總黃酮成分結果的不確定度進行了計算和評定，為評定測量結果質量提供了科學依據(jù)，同時也為紅景天總黃酮成分在后續(xù)作為食品添加劑的開發(fā)利用提供科學的指導[5]。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

大花紅景天（亳州亳藥堂）、蘆丁標準品（貴州迪大生物）和亞硝酸鈉、硝酸鋁、無水乙醇、氫氧化鈉等均為分析純。MARS5微波儀（美國CEM）、TU-1810紫外可見分光光度計（北京普析）。

1.2 方法

測定條件：蘆丁標準溶液配制0.2 mg/mL。

標準曲線的繪制：準確吸取蘆丁標 準溶液 0.0、0.50、1.00、2.00、3.00 mL和4.00 mL于10 mL容量瓶中，加入30%乙醇溶液至5.0 mL，0.4 mL 5%亞硝酸鈉溶液，振搖，靜置5～6 min后加入0.4 mL 10%硝酸鋁溶液，振搖，靜置5～6 min后加入4.0 mL 1.0 mol/L氫氧化鈉溶液，以蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。靜置15 min后，在510 nm處測定吸光度，繪制標準曲線，回歸方程為y=11.214x-0.007 2，相關系數(shù)R=0.999 9。

樣品處理：紅景天樣品清洗干燥，粉碎過80目篩得紅景天粉。取8個萃取罐，6個為1.0 g紅景天干粉，2個為空白。微波萃取條件：固液比1︰10，溫度80 ℃，爬升時間7 min，乙醇55%，萃取功率200 W，4 min。萃取結束后，3 500 r/min，5 min。取上清液0.5 mL于10 mL容量瓶中，30%乙醇定容后取0.2 mL測定，其余步驟同標準曲線的繪制，在510 nm處測定吸光度。

2 數(shù)學模型建立

依據(jù)微波萃取分析分光光度法測定紅景天總黃酮含量的計算過程，樣品結果以g/100 g表示，建立數(shù)學模型如下：

式中：X為紅景天中總黃酮的含量，g/100 g；m為紅景天樣品的質量，g；C為樣品液中的總黃酮濃度，mg/mL；F：為稀釋倍數(shù)。

3 不確定度分量的評定

3.1 樣品液中總黃酮濃度的不確定度Urelsam(C)

3.1.1 標準樣品配置帶來的不確定度urelstd(C)

標準樣品純度不確定度urel1(C)。蘆丁標準樣品的純度為樣品（≥98%），為B類評定。均勻分布，ɑ=1%包含因子k=3。其不確定度為：

標準使用溶液帶來的不確定度urel2(C)。標準物質稱量不確定度urel2(m)：標準物質稱量為5.0 mg，天平的允許差為±0.1 mg，為B類評定，設在區(qū)間內(nèi)均勻分布，k=3。其不確定度u2(m)=0.057 7 mg。

容量瓶體積不確定度urel2(V)：①標準使用液于25 mL容量瓶定容，滿足規(guī)定，25 mL容量瓶（A級）的容量允差為±0.03 mL，屬均勻分布，則其不確定度為u2(V)=0.017 32 mL；②溫度引起體積變動的不確定度u2(T)：實驗室內(nèi)溫度變動±4 ℃，水的膨脹系數(shù)為2.1×10-4/℃，按95%置信概率區(qū)間，產(chǎn)生的體積變化量=體積×膨脹系數(shù)×ΔT=0.021 mL，u2(T)=（25×2.1×10-4×4）/1.96=0.010 7 mL。

3.1.2 標準使用溶液移取帶來的不確定度urelt(C)

吸量管校正不確定度urelt(V)。標準使用液移取用5 mL吸量管一支，5 mL吸量管（A級）的容量允差為±0.025 mL，屬均勻分布。urelt(V)=0.014 4 mL。

溫度引起體積變動的不確定度urelt(T)。實驗室內(nèi)溫度變動±4 ℃，水的膨脹系數(shù)為2.1×10-4/℃。按95%置信概率區(qū)間時，產(chǎn)生的體積變化量=0.004 2 mL，urelt(T)=0.002 14。

則標準使用液移取帶來的不確定度：urelt(C)=[(V)+u(T)]1/2/V=0.002 91。

3.1.3 分光光度計測定總黃酮的不確定度urelins(C)

采用B類方法評定，分光光度計測定紅景天總黃酮的精密度為1.34%，屬均勻分布，包含因子k=3，其相對不確定度為：

3.2 樣品稱量質量的測定不確定度urelsam(m)

樣品稱量質量為1.0 g，允許差為±0.1 mg，為B類評定，設在區(qū)間內(nèi)均勻分布，k=。稱量不確定度：

3.3 樣品液稀釋過程帶來的不確定度urelsam(V)

樣品液定容容量瓶不確定度。樣品液定容于10 mL容量瓶，10 mL容量瓶（A級）的容量允差為±0.020 mL，屬均勻分布。usamv(V1)=0.020/3=0.011 54 mL。

由上述可得樣品液移取帶來的不確定度：

3.4 測量用樣液體積的不確定度urelsamt(V)

3.5 樣品測定重復性帶來的不確定度urel()

重復測定三次，樣品中總酚平均含 量 為 X=17.25 g/100 g，s=0.230 9，結果平均值帶來的不確定度為：

4 結果報告

根據(jù)數(shù)學模型中各影響因子是乘除關系，則合成不確定度為：

評定其擴展不確定度，取置信概率95%，取包含因子k=2，則：

U=U(X)×2=0.70 g/100 g

報告結果：分光光度法測定黑米總酚含量為（17.25±0.70） g/100 g。

5 結論

采用微波萃取-分光光度法測定紅景天總黃酮含量，通過對模型中各因素進行不確定度分析，并根據(jù)JJ1059進行計算和合成。結果表明：當紅景天總黃酮含量在17.25 g/100 g時，測量結果的擴展不確定度為0.70 g/100 g，結果表明樣品液中總黃酮濃度的不確定度Urelsam(C)是合成不確定度的主要來源，且標準樣品配置帶來的不確定度urelstd(C)影響最大[6-8]。在標準樣品稱量過程中，引入的標準物質稱量不確定度urel2(m)為0.011 54。因此，引入的不確定度最大。而標準曲線方程擬合效果較好，R值為0.999，引入的不確定度相對較小。所以，在實驗過程中盡量提高標準樣品的稱量準確性，提高標準曲線的相關性，都可以更好的控制實驗結果的質量。參考文獻

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[2]張莉,趙淑月,鄭愷,等.紅景天植物的抗自由基作用研究[J].長春中醫(yī)學院學報,2002(3):44.

[3]魏良柱,李筱玲.黃酮類化合物藥理活性研究進展[J].陜西農(nóng)業(yè)科學,2014(12):52-56.

[4]國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局.JJF 1059.1-2012 測量不確定度評定與表示[S].北京:中國標準出版社,2013.

[5]中國實驗室國家認可委員會.實驗室認可與管理基礎知識[M].北京:中國計量出版社,2003.

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