□ 吳俊偉 姜 宇 營(yíng)口市鲅魚(yú)圈區(qū)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所
液質(zhì)聯(lián)用法測(cè)定水產(chǎn)品中孔雀石綠及其代謝物殘留
□ 吳俊偉 姜 宇 營(yíng)口市鲅魚(yú)圈區(qū)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所
為測(cè)定水產(chǎn)品中的孔雀石綠和隱性孔雀石綠殘留,建立水產(chǎn)品中兩種成分的液質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)方法。結(jié)果表明,孔雀石綠和隱性孔雀石綠在一定的范圍內(nèi)濃度與響應(yīng)值呈顯著的線性關(guān)系。添加不同水平的孔雀石綠和隱性孔雀石綠,在樣品中回收率均大于80%,具有回收率高、分析效率高和節(jié)省成本的特點(diǎn),能滿(mǎn)足水產(chǎn)品中孔雀石綠和隱性孔雀石綠的檢測(cè)需求。
液質(zhì)聯(lián)用法;孔雀石綠;水產(chǎn)品
孔雀石綠(MG)屬于人工合成的染料,因其價(jià)格低廉、使用方便,常用于魚(yú)類(lèi)水霉病等寄生蟲(chóng)病的防治,以延長(zhǎng)魚(yú)類(lèi)的存活時(shí)間。實(shí)驗(yàn)研究表明,孔雀石綠進(jìn)入人或動(dòng)物機(jī)體后,可以通過(guò)生物轉(zhuǎn)化,還原代謝成脂溶性的隱性孔雀石綠(LMG)。LMG具有高毒性、高殘留和致癌、致突變等副作用,嚴(yán)重威脅消費(fèi)者的身體健康。2002年5月,我國(guó)農(nóng)業(yè)部將孔雀石綠列入《食品動(dòng)物禁用的獸藥及其化合物清單》中,禁止用于所有食品動(dòng)物。
質(zhì)譜作為通用檢測(cè)器,在串聯(lián)液相色譜條件下,針對(duì)特定選擇離子,可以定性定量檢測(cè),同時(shí)可以把雜質(zhì)基線干擾降低。LC-MS/MS,在低濃度范圍內(nèi)檢測(cè)尤顯優(yōu)勢(shì)。本研究擬采用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀,建立水產(chǎn)品中孔雀石綠及其代謝物殘留的檢測(cè)方法。
1.1 材料與試劑
淡水魚(yú)6種:購(gòu)于農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)。乙腈、甲醇:色譜純(Fisher公司)。中性氧化鋁柱:1 g/3 mL(安捷倫科技)。標(biāo)準(zhǔn)品:孔雀石綠、隱性孔雀石(農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所)。同位素內(nèi)標(biāo):氘代孔雀石綠、氘代隱性孔雀石綠(德國(guó)Dr.Ehrenstorfer)
1.2 儀器與設(shè)備
AUW220D電子天平(日本島津)、LCQQQ 1260-6420液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀ESI離子源(美國(guó)安捷倫)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(京東理化)、勻漿機(jī)、超聲波水浴、漩渦振蕩器、離心機(jī)和固相萃取儀。
1.3 儀器工作條件
色 譜 柱:SB-C181.8 μm 2.1×50 mm;色譜條件:通過(guò)優(yōu)化,運(yùn)用梯度洗脫效果最好(見(jiàn)表1);流速:0.2 mL/min;柱溫:40 ℃;進(jìn)樣量:10 μL;質(zhì)譜條件:正離子ESI模式,霧化器40 psi,干燥氣流速9 L/min,毛細(xì)管電壓4 000 V,干燥氣溫度350 ℃。
表1 流動(dòng)相梯度表
1.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備
臨用時(shí)配成標(biāo)準(zhǔn)溶液:孔雀石綠和隱性孔雀石綠含量100 ng/mL,同位素內(nèi)標(biāo)氘代孔雀石綠和氘代隱性孔雀石10 ng/mL。
表2 經(jīng)過(guò)優(yōu)化的質(zhì)譜條件
1.5 樣品前處理
1.5.1 提取
稱(chēng)取5.00 g搗碎樣品于50 mL離心管中,加入20 ng混合內(nèi)標(biāo)溶液,加入10 mL乙腈,超聲震蕩提取2 min,勻漿提取30 s(時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng),否則內(nèi)標(biāo)分解),4 000 r/min離心5 min,上清液轉(zhuǎn)移至25 mL比色管中。用10 mL乙腈洗刀頭,合并到離心管中,渦旋震蕩,超聲震蕩提取2 min,4 000 r/min離心5 min,合并上清液,用乙腈定容到25.0 mL備用。
1.5.2 凈化
移取5.00 mL樣品溶液加入已經(jīng)活化的中性氧化鋁柱,并用4 mL乙腈洗滌中性氧化鋁柱,收集全部流出液,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)進(jìn)干,用流動(dòng)相定容1 mL,過(guò)0.2 μm濾膜上機(jī)測(cè)定。
2.1 質(zhì)譜條件的選擇
實(shí)驗(yàn)室條件下對(duì)質(zhì)譜的參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化,具體見(jiàn)表2。
2.2 定量測(cè)定
結(jié)果以色譜峰面積按內(nèi)標(biāo)法定量[1],以氘代孔雀石綠為內(nèi)標(biāo)計(jì)算孔雀石綠殘留量,以氘代隱性孔雀石為內(nèi)標(biāo)物計(jì)算隱色孔雀石綠殘留量。6個(gè)樣品均未檢出孔雀石綠及隱性孔雀石綠。
本方法的定量限為0.5 μg/kg,線性相關(guān)范圍為0.1~100 μg/L。
孔雀石綠回歸方程:
Y=0.25X-0.097,R2=0.999
隱性孔雀石綠回歸方程:
Y=1.46X+0.188,R2=0.998
2.3 孔雀石綠的不同添加水平回收率
在樣品中添加不同水平的孔雀石綠和隱性孔雀石綠的回收率>80%,孔雀石綠添加量為5、20、100 μg/kg時(shí),回收率為83.4%、87.3%、84.5%;隱性孔雀石綠添加量為5、20、100 μg/kg時(shí),回收率為82.4%、86.5%、85.7%。
研究建立的水產(chǎn)品中孔雀石綠及其代謝物隱性孔雀石綠的檢測(cè)方法,簡(jiǎn)易可行,能有效減少雜質(zhì)的同時(shí)提取目標(biāo)化合物。建立的色譜條件能穩(wěn)定且快速地進(jìn)行定量檢測(cè),可以用于水產(chǎn)品的國(guó)內(nèi)市場(chǎng)檢測(cè)和監(jiān)控。
[1]中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢驗(yàn)總局.水產(chǎn)品中孔雀石綠和結(jié)晶紫殘留量的測(cè)定GB/T 19857-2005[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2005.