□ 吳俊偉 姜 宇 營(yíng)口市鲅魚(yú)圈區(qū)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所

液質(zhì)聯(lián)用法測(cè)定水產(chǎn)品中孔雀石綠及其代謝物殘留

□ 吳俊偉 姜 宇 營(yíng)口市鲅魚(yú)圈區(qū)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所

為測(cè)定水產(chǎn)品中的孔雀石綠和隱性孔雀石綠殘留，建立水產(chǎn)品中兩種成分的液質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)方法。結(jié)果表明，孔雀石綠和隱性孔雀石綠在一定的范圍內(nèi)濃度與響應(yīng)值呈顯著的線性關(guān)系。添加不同水平的孔雀石綠和隱性孔雀石綠，在樣品中回收率均大于80%，具有回收率高、分析效率高和節(jié)省成本的特點(diǎn)，能滿(mǎn)足水產(chǎn)品中孔雀石綠和隱性孔雀石綠的檢測(cè)需求。

液質(zhì)聯(lián)用法；孔雀石綠；水產(chǎn)品

孔雀石綠（MG）屬于人工合成的染料，因其價(jià)格低廉、使用方便，常用于魚(yú)類(lèi)水霉病等寄生蟲(chóng)病的防治，以延長(zhǎng)魚(yú)類(lèi)的存活時(shí)間。實(shí)驗(yàn)研究表明，孔雀石綠進(jìn)入人或動(dòng)物機(jī)體后，可以通過(guò)生物轉(zhuǎn)化，還原代謝成脂溶性的隱性孔雀石綠（LMG）。LMG具有高毒性、高殘留和致癌、致突變等副作用，嚴(yán)重威脅消費(fèi)者的身體健康。2002年5月，我國(guó)農(nóng)業(yè)部將孔雀石綠列入《食品動(dòng)物禁用的獸藥及其化合物清單》中，禁止用于所有食品動(dòng)物。

質(zhì)譜作為通用檢測(cè)器，在串聯(lián)液相色譜條件下，針對(duì)特定選擇離子，可以定性定量檢測(cè)，同時(shí)可以把雜質(zhì)基線干擾降低。LC-MS/MS，在低濃度范圍內(nèi)檢測(cè)尤顯優(yōu)勢(shì)。本研究擬采用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀，建立水產(chǎn)品中孔雀石綠及其代謝物殘留的檢測(cè)方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

淡水魚(yú)6種：購(gòu)于農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)。乙腈、甲醇：色譜純（Fisher公司）。中性氧化鋁柱：1 g/3 mL（安捷倫科技）。標(biāo)準(zhǔn)品：孔雀石綠、隱性孔雀石（農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所）。同位素內(nèi)標(biāo)：氘代孔雀石綠、氘代隱性孔雀石綠（德國(guó)Dr.Ehrenstorfer）

1.2 儀器與設(shè)備

AUW220D電子天平（日本島津）、LCQQQ 1260-6420液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀ESI離子源（美國(guó)安捷倫）、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（京東理化）、勻漿機(jī)、超聲波水浴、漩渦振蕩器、離心機(jī)和固相萃取儀。

1.3 儀器工作條件

色 譜 柱：SB-C181.8 μm 2.1×50 mm；色譜條件：通過(guò)優(yōu)化，運(yùn)用梯度洗脫效果最好（見(jiàn)表1）；流速：0.2 mL/min；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：10 μL；質(zhì)譜條件：正離子ESI模式，霧化器40 psi，干燥氣流速9 L/min，毛細(xì)管電壓4 000 V，干燥氣溫度350 ℃。

表1 流動(dòng)相梯度表

1.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

臨用時(shí)配成標(biāo)準(zhǔn)溶液：孔雀石綠和隱性孔雀石綠含量100 ng/mL，同位素內(nèi)標(biāo)氘代孔雀石綠和氘代隱性孔雀石10 ng/mL。

表2 經(jīng)過(guò)優(yōu)化的質(zhì)譜條件

1.5 樣品前處理

1.5.1 提取

稱(chēng)取5.00 g搗碎樣品于50 mL離心管中，加入20 ng混合內(nèi)標(biāo)溶液，加入10 mL乙腈，超聲震蕩提取2 min，勻漿提取30 s（時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)，否則內(nèi)標(biāo)分解），4 000 r/min離心5 min，上清液轉(zhuǎn)移至25 mL比色管中。用10 mL乙腈洗刀頭，合并到離心管中，渦旋震蕩，超聲震蕩提取2 min，4 000 r/min離心5 min，合并上清液，用乙腈定容到25.0 mL備用。

1.5.2 凈化

移取5.00 mL樣品溶液加入已經(jīng)活化的中性氧化鋁柱，并用4 mL乙腈洗滌中性氧化鋁柱，收集全部流出液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)進(jìn)干，用流動(dòng)相定容1 mL，過(guò)0.2 μm濾膜上機(jī)測(cè)定。

2 結(jié)果與分析

2.1 質(zhì)譜條件的選擇

實(shí)驗(yàn)室條件下對(duì)質(zhì)譜的參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，具體見(jiàn)表2。

2.2 定量測(cè)定

結(jié)果以色譜峰面積按內(nèi)標(biāo)法定量[1]，以氘代孔雀石綠為內(nèi)標(biāo)計(jì)算孔雀石綠殘留量，以氘代隱性孔雀石為內(nèi)標(biāo)物計(jì)算隱色孔雀石綠殘留量。6個(gè)樣品均未檢出孔雀石綠及隱性孔雀石綠。

本方法的定量限為0.5 μg/kg，線性相關(guān)范圍為0.1～100 μg/L。

孔雀石綠回歸方程：

Y=0.25X-0.097，R2=0.999

隱性孔雀石綠回歸方程：

Y=1.46X+0.188，R2=0.998

2.3 孔雀石綠的不同添加水平回收率

在樣品中添加不同水平的孔雀石綠和隱性孔雀石綠的回收率＞80%，孔雀石綠添加量為5、20、100 μg/kg時(shí)，回收率為83.4%、87.3%、84.5%；隱性孔雀石綠添加量為5、20、100 μg/kg時(shí)，回收率為82.4%、86.5%、85.7%。

3 結(jié)論

研究建立的水產(chǎn)品中孔雀石綠及其代謝物隱性孔雀石綠的檢測(cè)方法，簡(jiǎn)易可行，能有效減少雜質(zhì)的同時(shí)提取目標(biāo)化合物。建立的色譜條件能穩(wěn)定且快速地進(jìn)行定量檢測(cè)，可以用于水產(chǎn)品的國(guó)內(nèi)市場(chǎng)檢測(cè)和監(jiān)控。

[1]中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢驗(yàn)總局.水產(chǎn)品中孔雀石綠和結(jié)晶紫殘留量的測(cè)定GB/T 19857-2005[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2005.