□ 戎筱卿 蘇州衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院

固相萃取-液相色譜-質(zhì)譜法測定動物源食品中二氫吡啶的殘留

□ 戎筱卿 蘇州衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院

本文利用固相萃取技術(shù)對動物源食品進行凈化、富集，并通過高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，建立肉源食品中二氫吡啶的檢測方法。

二氫吡啶；固相萃??；高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用

自2008年三聚氰胺事件的爆發(fā)，國內(nèi)各種食品安全事故接連不斷，一時間沸沸揚揚，食品安全越來越受到大家的關(guān)注。從早期的瘦肉精克倫特羅到2017年的3.15晚會，新的飼料添加劑喹乙醇、二氫吡啶、硫酸黏菌素又被不法分子大劑量添加到的動物飼料中，通過肉類食品進入了人們的餐桌。

喹乙醇，商品名為倍育諾、快育靈，長期使用，會蓄積在動物體內(nèi)，產(chǎn)生毒性，對很多動物有明顯的致畸作用。此外，抗生素的濫用會造成耐藥性[1]，其他添加劑的大量和過量使用，均會部分蓄積在動物的體內(nèi)，造成動物源食品中過量殘留，給人類身體健康帶來很多潛在危害。

二氫吡啶又名多犢錠、吉盧金，化學(xué)名稱為2,6-二甲基- 3,5-二乙酯基-1,4-二氫吡啶，淡黃色結(jié)晶物。是一種新型多功能的飼料添加劑，具有廣泛的生物學(xué)功能，在醫(yī)學(xué)上用作心血管疾病的防治保健藥物，有治療脂肪肝、中毒性肝炎、抗衰老、防早熟等作用[2]。二氫吡啶最初由前蘇聯(lián)科學(xué)家合成并應(yīng)用，因其具有天然抗氧化劑Vc的某些作用，最早在20世紀(jì)30年代，主要用作動植物油的抗氧化劑。20世紀(jì)70年代，前蘇聯(lián)拉托維亞專家發(fā)現(xiàn)其具有促進畜禽生長作用以來，世界各國相繼展開了相關(guān)研究，并發(fā)現(xiàn)二氫吡啶有促進畜禽生長、改善畜禽產(chǎn)品品質(zhì)、提高畜禽繁殖性能及防病等功能[3,4]，現(xiàn)作為新興的飼料添加劑，應(yīng)用廣泛。

液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（liquid Chromatograph Mass Spectrometer）， 簡稱LC-MS，是液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用的儀器。它既有液相色譜儀有效分離熱不穩(wěn)性及高沸點化合物的分離能力，又具有質(zhì)譜儀的鑒定組分的能力。LC-MS已成為有機物分析實驗室、藥品/食品檢驗室、生產(chǎn)過程、質(zhì)量檢驗等部門必不可少的分析工具。目前，串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)已成為痕量殘留物質(zhì)檢測的主流技術(shù)，該方法靈敏度高、選擇性和特異性好。

根據(jù)文獻調(diào)研發(fā)現(xiàn)，測定二氫吡啶的分析方法的研究很少，一般是測定藥品中的有效成分含量[5,6]。例如，二氫吡啶片劑的含量測定等，多數(shù)使用的是現(xiàn)有的主流分析方法——高效液相色譜法，但沒有查到肉源食品中二氫吡啶含量測定的相關(guān)研究。由于肉源食品基質(zhì)復(fù)雜、形態(tài)多樣化，但是目標(biāo)化合物含量低。因此，簡單的浸提法會存在假陽性干擾、靈敏度不高等問題，不適用對肉類食品基質(zhì)的研究[7,8]。在近期的文獻報道中，測定食品中禁用、限用成份大多采用溶劑提取結(jié)合固相萃取技術(shù)對樣品進行前處理[9,10]。本項目在參考國內(nèi)外有關(guān)文獻方法的基礎(chǔ)上，擬采用固相萃取技術(shù)對樣品進行凈化、富集，并通過高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，建立肉源食品中二氫吡啶的檢測方法。

1 研究內(nèi)容

（1）考察不同性質(zhì)的溶劑（混合溶劑）和不同品牌的固相柱對肉類食品中二氫吡啶的提取效果，通過溶劑對肉源產(chǎn)品二氫吡啶的溶解性，在固相萃取柱上的保留情況、固相萃取柱的洗脫情況，確定提取、上樣、淋洗、洗脫的最佳條件和最適合的固相萃取柱。

（2）考察不同品牌的C18柱色譜柱對待測物的保留情況，通過流動相、柱溫、進樣量、流速等條件的優(yōu)化，找出二氫吡啶的特征離子，建立二氫吡啶的液相色譜-質(zhì)譜條件。

（3）考察上述方法中二氫吡啶的液相色譜-質(zhì)譜的線性范圍，按照陰性樣品出峰位置的3倍信噪比和10倍信噪比，測定檢出限及定量限。

（4）選擇肉源樣品，對其進行方法準(zhǔn)確度、重現(xiàn)性考察，添加水平為0.5*MRL、1*MRL、1.5*MRL，平行做6個樣品，計算回收率與精密度。

（5）按照建立的樣品提取、凈化方法對陰性空白樣品提取、凈化后，加標(biāo)準(zhǔn)品溶液（相當(dāng)于添加水平0.5*MRL），進行測定，平行測定3次。通過公式ME(%)=B/A×100，計算二者相對比值來評價其基質(zhì)效應(yīng)。

圖1 固相萃取-質(zhì)譜法測定動物源食品中二氫吡啶的工藝路線圖

2 研究目標(biāo)

（1）建立肉源食品中二氫吡啶的提取及純化方法。

（2）建立二氫吡啶的液相色譜-質(zhì)譜條件。

（3）建立二氫吡啶的工作曲線，確定檢出限和定量限。

（4）確定該液相色譜-質(zhì)譜方法的回收率和精密度。

（5）評價該液相色譜-質(zhì)譜測定方法的基質(zhì)效應(yīng)。

3 工藝路線

從肉源食品中提取二氫吡啶，通過固相萃取法進行凈化和富集，再用HPLC-MS法進行含量測定，獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得到檢出限、定量限、回收率和精密度，并用基質(zhì)效應(yīng)進行評價。固相萃取-質(zhì)譜法測定動物源食品中二氫吡啶的工藝路線，如圖1所示。

4 結(jié)語

我們將建立肉源食品中二氫吡啶的提取及純化方法，并建立二氫吡啶的液相色譜-質(zhì)譜條件，確定檢出限和定量限，回收率和精密度，最后評價該液相色譜-質(zhì)譜測定方法的基質(zhì)效應(yīng)。

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本文系蘇州衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院科研項目“固相萃取-液相色譜-質(zhì)譜法測定動物源食品中二氫吡啶的殘留”（編號：szwzy201706）。