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1.大理大學，云南 大理 671000；2.保山中醫(yī)藥高等?？茖W校，云南 保山 678000

實驗研究

云南松松塔水部位對豚鼠離體回腸的影響

張美玲1劉曉波1趙建榮2李冬梅1劉光明1郭美仙1*

1.大理大學，云南 大理 671000；2.保山中醫(yī)藥高等?？茖W校，云南 保山 678000

目的初步探討云南松松塔水部位對豚鼠離體回腸的活性。方法觀察云南松松塔水部位對正常和阿托品或苯海拉明預收縮豚鼠離體回腸的影響。結果云南松松塔水部位終濃度在300 ～1200 μg/mL之間可以使豚鼠正常離體回腸平滑肌的張力和面積均明顯增大；終濃度大于300 μg/mL的云南松松塔水部位可以使苯海拉明誘導下豚鼠離體回腸平滑肌的張力和面積均有所增大；云南松松塔水部位對阿托品誘導下豚鼠離體回腸平滑肌無影響。結論在一定劑量范圍內，云南松松塔水部位對豚鼠離體回腸有興奮作用，其機制可能與M受體有關，與H受體無關。

云南松松塔；豚鼠；離體腸肌

云南松(PinusyunnanensisFranch.)為松科松屬的常綠喬木，分布于西藏東部、四川西部及西南部、云南、貴州西部及西南部和廣西西北部[1]。松塔是松科松屬植物的球果，又名松果，在我國的藥用歷史悠久，《本草綱目》記載松塔性溫味苦，可入藥，具有祛痰、止咳平喘、祛風、潤腸、安神等功效?，F代研究發(fā)現，松塔含有黃酮、二萜、三萜、木質素等多種化學成分[2]，具有抗腫瘤[3]、抗病毒(HIV)[4]、抗炎和抗氧化[5]、增強免疫[6]和保肝[7]等活性。本課題組前期研究證明云南松松塔水部位對豚鼠離體氣管平滑肌有收縮作用[8]，但至今未見云南松松塔對豚鼠消化道平滑肌作用的報道，故建立實驗探討云南松松塔水部位對豚鼠離體腸肌的作用?，F報道如下。

1 儀器與材料

1.1 動物 健康豚鼠20只，普通級，雌雄不限，體重250～ 350 g，購自昆明醫(yī)科大學實驗動物中心，生產許可證號為SCXK(滇)2011-0004。

1.2 樣品提取 云南松松塔采自云南省大理白族自治州蒼山，由大理大學生藥學教研室張德全副教授鑒定為松科松屬植物云南松(PinusyunnanensisFranch.)的松塔(Pine cone)。提?。核伤?10 kg)粉碎，用85%乙醇浸泡6d，收集浸泡液減壓濃縮回收溶劑，即得乙醇提取物280 g，再將提取物加適量水混懸，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，剩余為水溶性部分，將水溶性部分減壓濃縮，即得水部位76g，冷凍干燥備用。

1.3 試劑 組織胺(批號：100703，上海如吉生物科技發(fā)展有限公司)；毛果蕓香堿(批號：20061130，上海三愛思試劑有限公司)；苯海拉明(批號：100315，沈陽第四制藥廠)；阿托品(批號：100501，鄭州羚銳制藥股份有限公司)；營養(yǎng)液(NaCl，KCl，CaCl2，NaH2PO4·2H2O，NaHCO3，MgSO4·7H2O，葡萄糖均為分析純，配置方法參考文獻[9])。

1.4 儀器 BL-420F生物機能采集與分析系統(tǒng)(成都泰盟科技有限公司)；HW-400S恒溫平滑肌槽(成都泰盟科技有限公司)；張力換能器(航天工程醫(yī)學工程研究所)。

2 方法

2.1 樣品配置 稱取云南松松塔的水提取物24 g置于燒杯中，然后取一定量的生理鹽水于容量瓶中溶解，后轉移至量筒中，定容至50mL即得到48mg/mL的混懸液，然后依次倍比稀釋，得到24、12、6 mg/mL混懸液備用[8]。

2.2 標本制備與固定 處死豚鼠，迅速剖腹，取近盲腸部約10 cm的腸肌，置于冷營養(yǎng)液，剪去腸系膜，剪取1.5～2.0 cm左右小段腸管作為標本。固定標本于張力換能器上，放入裝有19.5 mL營養(yǎng)液的浴槽內(水溫(37± 0.5)℃，通氧1～ 2個/s)，調節(jié)基礎負荷1.5～ 2.0 g，穩(wěn)定平衡20 min[9-10]。

2.3 對豚鼠正常離體腸肌的影響 開始試驗，先記錄5min正常腸肌收縮曲線，加入1.0mg/mL組織胺0.5mL，記錄給藥后5min腸肌收縮曲線，暫停實驗，換洗3次；曲線收縮正常后，重復實驗，分別依次加入生理鹽水，6、12、24、48 mg/mL云南松松塔水部位，分別依次記錄給藥后5 min腸肌收縮曲線[9-10]。

2.4 對苯海拉明誘導下豚鼠離體腸肌的影響 開始試驗，先記錄5 min正常腸肌收縮曲線，加入1.0mg/mL組胺0.5 mL，記錄給藥后5 min腸肌收縮曲線，暫停實驗，換洗3次；加入19.0mL新鮮營養(yǎng)液，曲線收縮正常后，加入1.0mg/mL苯海拉明0.5 mL，抑制作用明顯后立即加入生理鹽水0.5mL，記錄給藥后5 min腸肌收縮曲線，暫停實驗，換洗3次；加入19.0 mL新鮮營養(yǎng)液，曲線收縮正常后，重復實驗，分別依次加入12、24、48 mg/mL云南松松塔水部位，分別依次記錄給藥后5 min腸肌收縮曲線[9-10]。

2.5 對阿托品誘導下豚鼠離體腸肌的影響 實驗方法同2.4。

3 結果

3.1 對豚鼠正常離體腸肌的影響 由表1可知，與生理鹽水組比較，云南松松塔水部位終濃度在300～ 1200 μg/mL之間可以使豚鼠正常離體回腸平滑肌的最大張力、最小張力、平均張力和面積均明顯增大，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05，P<0.01)。

組別終濃度/μg/mL最大張力/g最小張力/g平均張力/g張力面積/g·s正常184±015165±013175±01652529±4826組織胺316±043167±010239±02881722±8569生理鹽水182±015163±016173±01451790±4270松塔劑量1100189±031166±014178±01554674±4938松塔劑量2300231±024??178±022??204±021??72546±6205??松塔劑量3600208±019?174±021?189±020?63856±6031??松塔劑量41200197±016?168±015182±019?55312±4765?

注：與生理鹽水組比較，*P﹤0.05，**P﹤0.01。

3.2 對苯海拉明誘導下豚鼠離體腸肌的影響 由表2可知，與生理鹽水組比較，終濃度大于300μg/mL的云南松松塔水部位可以使苯海拉明誘導下豚鼠離體回腸平滑肌的最大張力、平均張力和面積均明顯增大，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05，P<0.01)。

組別終濃度/μg/mL最大張力/g最小張力/g平均張力/g張力面積/g?s正常177±012164±011169±01251783±3450組織胺315±021??173±009236±011??79675±3179??苯海拉明+生理鹽水176±009161±008165±00949183±262苯海拉明+松塔劑量2300268±017??172±007?230±025??78027±7364??苯海拉明+松塔劑量3600232±025??169±015199±015??69580±4645??苯海拉明+松塔劑量41200195±010?168±016182±011?56182±3294?

注：與生理鹽水組比較，*P﹤0.05，**P﹤0.01。

3.3 云南松松塔水部位對阿托品誘導下豚鼠離體腸肌的影響 由表3可知，與生理鹽水組比較，云南松松塔水部位各劑量組對阿托品誘導下豚鼠離體回腸平滑肌的最大張力、最小張力、平均張力和面積均無影響，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

組別終濃度/μg/mL最大張力/g最小張力/g平均張力/g張力面積/g×s正常185±013170±014180±01255272±3554毛果蕓香堿377±056??288±040??310±041??92969±12248??阿托品+生理鹽水178±009156±005167±00950394±2827阿托品+松塔劑量2300185±010160±010171±01051982±3041阿托品+松塔劑量3600179±007157±008168±00951053±2635阿托品+松塔劑量41200172±015154±011163±01450681±4252

注：與生理鹽水組比較，*P﹤0.05，**P﹤0.01。

4 討論

在適宜的體外環(huán)境中，消化道平滑肌仍能進行自主的節(jié)律性運動，對某些化學物質的刺激特別敏感，如微量毛果蕓香堿能激動消化道平滑肌上的M受體，使其收縮，而阿托品能競爭性拮抗M受體，阻斷膽堿能受體激動藥與M受體結合，從而拮抗其激動作用；微量組織胺能激動消化道平滑肌上的H受體，使其收縮，而苯海拉明能競爭性地與H1受體結合，阻斷H受體激動劑與H1受體作用，從而抑制其興奮作用[9,11]。

實驗結果顯示：云南松松塔水部位終濃度在300～1200 μg/mL之間，對豚鼠正常離體回腸平滑肌自發(fā)收縮有增強作用；當豚鼠離體回腸平滑肌被苯海拉明阻斷后，終濃度為300μg/mL、600μg/mL和1200μg/mL的云南松松塔水部位對其均有興奮作用；當豚鼠離體回腸平滑肌被阿托品阻斷后，云南松松塔水部位對其基本無影響。因此，云南松松塔水部位在一定劑量范圍內對正常豚鼠離體回腸平滑肌有興奮作用；其興奮作用可能與激動M受體有關，與H受體無關。但是云南松松塔水部位興奮回腸平滑肌的確切有效劑量和具體作用機制還有待進一步研究。

[1]中國科學院昆明植物研究所.云南種子植物名錄(上冊)[M] .昆明：云南人民出版社，1984: 9.

[2]劉爽，劉熙，李冬梅，等.云南松松塔的化學成分研究[J].天然產物研究與開發(fā)，2015(1): 59-62.

[3]于冬梅，李冬梅，劉熙，等.云南松松塔提取物對人肝癌細胞增殖的影響[J].時珍國醫(yī)國藥，2014，25(12): 2835-2837.

[4]李春艷，劉熙，丁云，等.云南松松塔提取物體外抗HIV-1活性初步研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2016，(4): 774-776.

[5]張宇，王莉，傅宇明，等.樟子松松塔抗氧化及抗炎作用研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2010，21(6):1549.

[6]劉中祿，呂鐵鋼，張永亮.松子殼多糖對小鼠主要免疫細胞功能的影響[J].中國比較醫(yī)學雜志，2010,20(10):33-37.

[7]郭美仙，李冬梅，劉光明，等.云南松松塔提取物含藥血清對乙醇損傷大鼠肝細胞的抗氧化作用[J].中國實驗方劑學雜志，2015(20):103-106.

[8]郭美仙，劉光明，沈磊，等.云南松松塔不同極性部位對不同狀態(tài)豚鼠離體氣管的影響[J].大理學院學報，2015，14(8):1-4.

[9]魏偉，吳希美，李元建.藥理實驗方法學[M].4版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2010.

[10]郭建生，聶子文，張猛.烏藥提取物對豚鼠離體回腸的影響[J].時珍國醫(yī)國藥，2012，23(1):56-58.

[11]姚泰.生理學[M].6版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2006.

EffectsofWaterExtractsfromYunnanPineConeonIsolatedIleumofGuineaPig

ZHANG Meiling1LIU Xiaobo1ZHAO Jianrong2LI Dongmei1LIU Guangming1GUO Meixian1*

1.Dali University, Dali 671000,China; 2.Baoshan College of Traditional Chinese Medicine, Baoshan 678000,China

ObjectiveTo study the effects of water extracts from Yunnan pine cone on isolated ileum in guinea pig.MethodsTo observe the effects of different concentrations of water extracts from Yunnan pine cone on the contraction of normal isolated ileum or atropine or diphenhydramine induced contracted isolated ileum.ResultsThe water extracts from Yunnan pine cone at the final concentration of 100 μg/mL to 300 μg/mL could enhance the tension and the area of normal isolated ileal smooth muscle in guinea pigs; The water extracts from Yunnan pine cone at the concentration of 300 μg/mL could enhance the tension and the area of isolated ileal smooth muscle after diphenhydramine in guinea pigs; The water extracts from Yunnan pine cone had no effect on isolated ileal smooth muscle after atropine.ConclusionIn certain dose, the water extract from Yunnan pine cone could stimulate isolated ileum of guinea pigs, and the responding mechanism may be related to the M receptor but not the H receptor.

Yunnan Pine Cone; Guinea Pig; Isolated Ileal Muscle

R285.5

A

1007-8517(2017)19-0018-03

2017-08-18 編輯：鄧佳麗)

國家自然科學基金項目(NO:81260632) ；云南省自然科學基金項目(NO:2012FD036)。

張美玲(1996-)，女，漢族，本科，研究方向為藥學。E-mail：850046828@qq.com

郭美仙(1980-)，女，漢族，本科，實驗師，研究方向為中藥藥理學。E-mail：yndllyo@126.com