龐鵬飛，李 冰，毛軍杰，周 斌，胡曉俊，張永裕，敖 峰，單 鴻*

(1.中山大學附屬第五醫(yī)院介入醫(yī)學中心，2.眼科，廣東 珠海 519000)

人骨髓間充質干細胞靶向納米基因載體制備及體外細胞磁共振成像

龐鵬飛1，李 冰2，毛軍杰1，周 斌1，胡曉俊1，張永裕1，敖 峰1，單 鴻1*

(1.中山大學附屬第五醫(yī)院介入醫(yī)學中心，2.眼科，廣東 珠海 519000)

目的探討靶向納米基因載體單鏈神經(jīng)節(jié)苷脂抗體-聚乙二醇-聚乙烯亞胺-超順磁性氧化鐵(scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION)轉染人骨髓間充質干細胞(hBMSCs)的可行性、效率及體外細胞MR顯像能力。方法合成scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION后，采用凝膠阻滯實驗評估其復合外源性基因的能力；動態(tài)光散射法測量scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION/pDNA納米復合物的粒徑大小及表面電位；體外細胞毒性實驗檢測其對hBMSCs的細胞毒性。采用流式細胞儀檢測scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION靶向轉染hBMSCs的效率，并設置PEG-g-PEI-SPION組、cAbGD2-PEG-g-PEI-SPION組、抗體競爭抑制(scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION+free AbGD2)組和同型抗體(scAbIgG2a-PEG-g-PEI-SPION)組，通過激光共聚焦顯微鏡及普魯士藍染色觀察hBMSCs對納米復合物的攝入。通過體外細胞MR掃描驗證scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION的MR成像功能。結果scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION細胞毒性小，復合外源性基因后能夠形成穩(wěn)定的納米復合物，粒徑80～100 nm。在相同的N/P比值下，scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION組的轉染率明顯高于其他組(P<0.001)。N/P=20時，靶向組具有最高轉染率[(59.60±4.50)%]。同時，scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION中的SPION可有效標記hBMSCs，在MR T2/T2*加權圖像上呈低信號。結論scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION是一種MRI可視的、可有效轉染hBMSCs的靶向納米基因載體。

骨髓；間充質干細胞；磁共振成像；靶向基因載體；納米醫(yī)學

人骨髓間充質干細胞(human bone marrow-derived mesenchymal stem cells, hBMSCs)具有向肝樣細胞分化的潛能，參與肝損傷的修復[1-2]。隨著對治療機制研究的深入，發(fā)現(xiàn)移植入肝臟的hBMSCs僅少數(shù)分化為肝樣細胞，多數(shù)hBMSCs以旁分泌和免疫調節(jié)的方式參與肝損傷的修復，極大降低了其預期療效[3]。有學者[4-6]研究發(fā)現(xiàn)hBMSCs可分化為肌成纖維樣細胞，不僅未發(fā)揮治療作用，反而加重了肝纖維化，甚至導致肝硬化。目前仍缺乏對hBMSCs生物學過程長期、實時示蹤的有效手段[7-9]。納米醫(yī)學的發(fā)展和分子影像學技術的進步為解決間充質干細胞領域的共性難題提供了可能。本研究根據(jù)hBMSCs表面標記物二唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂GD2(neural ganglioside)制備靶向納米基因載體，評價制備該載體的可行性、效率及體外細胞MR顯像功能。

1 材料與方法

1.1 材料 根據(jù)文獻[10-11]的方法合成聚乙二醇-聚乙烯亞胺-超順磁性氧化鐵(PEG-g-PEI-SPION)。hBMSCs由中山大學干細胞中心惠贈。細胞培養(yǎng)基(Dulbecco's modified Eagle's medium，DMEM，low glucose)、胎牛血清(fetal bovine serum, FBS)、CCK-8試劑盒(Cell Counting Kit-8)購自美國Invitrogen公司。紅色熒光染料popo-3、綠色熒光染料Oregon Green 488、細胞核熒光染料DAPI購自美國Molecular Probes公司。商品化的陽離子脂質體LipofectaminTM2000購自廣州碧云天生物科技公司。增強型綠色熒光蛋白質粒(plasmid EGFP-C1, 4.70 kb)提取后采用1%凝膠電泳鑒定，濃度2.40 μg/μl。GD2抗體和GD2同型抗體購自美國BD Biosciene Pharmingen公司。

1.2 靶向納米基因載體單鏈神經(jīng)節(jié)苷脂抗體-聚乙二醇-聚乙烯亞胺-超順磁性氧化鐵(scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION)的制備 室溫下100 mg巰基乙胺溶于500 μl含20 μl EDTA(0.5 M，pH=8.0)的PBS中。200 μl GD2抗體與200 μl EDTA充分混合后加入到上述巰基乙胺溶液，37℃孵育90 min，獲得單鏈GD2抗體(single chain AbGD2，scAbGD2)。將單鏈GD2抗體溶液轉移至50 ml超濾離心管中(MWCO=10 kDa)，加入15 ml含EDTA的PBS(pH=7.40，每500 μl含10 μl 0.5 M EDTA)，于4℃恒溫離心機中離心40 min，轉速4 000 rpm，重復3次。加入200 μg mal-PEG-COOH，4℃孵育過夜，反應獲得scAbGD2-PEG-COOH。加入15 ml PBS(pH7.4)于4℃恒溫離心機中離心40 min，轉速4 000 rpm，重復3次。取EDC和NHS各10 μg活化scAbGD2-PEG-COOH中的羧基15 min，加入PEG-g-PEI-SPION 200 μg，充分混合后于4℃反應過夜。超濾離心除去小分子雜質后將剩余的溶液轉移至1.50 ml EP管，12 000 rpm離心除去游離抗體，收集離心后的沉淀，超聲分散至蒸餾水中備用。

1.3 scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION/pDNA納米復合物的制備 將1 μg的pDNA與不同比例的scAb GD2-PEG-g-PEI-SPION分別溶于超純水中，通過靜電作用形成不同N/P比值(scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION 的氮原子與pDNA的磷原子的摩爾比)的納米復合物。

1.4 瓊脂糖凝膠阻滯實驗 制備不同N/P比值(2.1、2.2、2.3、2.4、2.5)的scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION/pDNA納米復合物，pDNA 1 μg，體系10 μl。納米復合物與加樣緩沖液充分混合后加入到1%的瓊脂糖凝膠中電泳，電壓120 V，時間25 min。

1.5 納米復合物的粒徑大小及表面電位測定 制備不同N/P比值(5、10、15、20、25、30、35、40)的PEG-g-PEI-SPION/pDNA和scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION/pDNA納米復合物，pDNA 2 μg，體系100 μl。室溫下使用動態(tài)光散射儀(DLS，ELS-8000，Photal，Japan)測量納米復合物的粒徑大小及表面電位。

1.6 體外細胞毒性實驗 hBMSCs以8 000個細胞/孔接種于96孔板，每孔加入100 μl全培養(yǎng)基(DMEM含10% FBS，1%青霉素，1%鏈霉素)，于培養(yǎng)箱中(37℃，5% CO2)常規(guī)培養(yǎng)24 h。實驗孔細胞與不同N/P比值(5、10、15、20、25、30、35、40)的PEG-g-PEI-SPION/pDNA和scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION/pDNA納米復合物(pDNA 0.15 μg，體系3 μl)共同培養(yǎng)24 h。然后向每孔加入10 μl CCK8溶液，繼續(xù)培養(yǎng)3 h。采用酶標儀測定在450 nm處的吸光值。每個N/P比值設3個復孔，常規(guī)設置調零孔和對照孔。

1.7 體外轉染實驗 hBMSCs以2×105個細胞/孔接種于6孔板，每孔加入1 ml全培養(yǎng)基，細胞于培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)12 h。實驗孔細胞與不同N/P比值(0、10、15、20、30、40)的納米復合物(pDNA 4 μg，體系30 μl)共同培養(yǎng)12 h，PEG-g-PEI-SPION組和scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION組的用量根據(jù)N/P比值計算。然后更換全培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)40 h。對照組的轉染采用商品化的陽離子脂質體Lipofectamine。每個樣品均設3個復孔。同時設置抗體競爭抑制(scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION+free AbGD2)組和同型抗體(scAbIgG2a-PEG-g-PEI-SPION)組進行抗體競爭抑制實驗和同型抗體實驗。轉染實驗結束后使用倒置熒光顯微鏡觀察綠色熒光蛋白表達情況，并使用流式細胞分析儀(BD，美國)檢測轉染率。

1.8 激光共聚焦顯微鏡實驗 綠色熒光染料Oregon Green 488采用超濾法標記納米載體。紅色熒光染料popo-3用于標記pDNA。Oregon Green 488標記的納米載體與popo-3標記的pDNA按照N/P=20制備納米復合物(pDNA 4 μg，體系30 μl)。2×105個hBMSCs接種于35 mm玻璃底培養(yǎng)皿，加入1 ml全培養(yǎng)基，常規(guī)培養(yǎng)12 h。將上述熒光標記的納米復合物加入到培養(yǎng)基中共同培養(yǎng)6 h。棄去培養(yǎng)基，PBS洗滌3次，加入4%的多聚甲醛1 ml固定10 min后使用DAPI染核15 min。培養(yǎng)皿置于激光共聚焦顯微鏡(Carl Zeiss，德國)下觀察并拍攝圖像。

1.9 普魯士藍染色實驗 hBMSCs以2×105個細胞/孔接種于6孔板，常規(guī)培養(yǎng)12 h。將納米復合物(N/P=20，pDNA 4 μg，體系30 μl)加入到培養(yǎng)基中共同培養(yǎng)6 h。棄去培養(yǎng)基，PBS洗滌3次，加入4%的多聚甲醛1 ml固定10 min。每孔加入1 ml Perls液(2%的亞鐵氰化鉀與2%的鹽酸水溶液等量混合)染色30 min后于顯微鏡下觀察。

1.10 細胞MR顯像 將hBMSCs以2×105個細胞/孔接種于6孔板，常規(guī)培養(yǎng)12 h。制備鐵濃度為0、5、10、20、40、60 μg/ml的納米復合物(N/P=20，pDNA 4 μg)，共同培養(yǎng)6 h后收集細胞。采用1.5T MR掃描儀、3 inch表面線圈，對所得細胞進行掃描，獲得T2/T2*加權圖像。掃描結束后測量不同鐵濃度下細胞的標準化信號強度。

1.11 統(tǒng)計學分析 采用SPSS 13.0統(tǒng)計分析軟件，計量資料以±s表示。在相同的N/P比值下，scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION與PEG-g-PEI-SPION的細胞毒性和Lipofectamine的轉染率采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 凝膠阻滯實驗 PEG-g-PEI-SPION和scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION分別在N/P為2.3和2.4時完全復合pDNA，形成電中性或偏正電荷的納米復合物(圖1)。

圖1 凝膠阻滯實驗 A.N/P=2.3時，PEG-g-PEI-SPION完全復合pDNA； B.N/P=2.4時，pDNA被scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION完全復合，此時pDNA在電泳時的遷移被完全阻滯

2.2 納米復合物的粒徑大小及表面電位 PEG-g-PEI-SPIO和scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION未復合pDNA時粒徑大小約60 nm。N/P≥10時形成穩(wěn)定的粒徑為80～100 nm的納米復合物，表面電位隨N/P比值的增大而逐漸增加，見圖2。

2.3 細胞毒性實驗 納米復合物的細胞毒性隨N/P比值的增大而增加。N/P=20時靶向組細胞的存活率為(80.56±1.29)%，非靶向組細胞的存活率為(77.70±1.49)%，見圖3。在相同的N/P比值下，scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION與PEG-g-PEI-SPION的細胞毒性差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

圖2 粒徑大小及表面電位測定，兩者未復合pDNA時粒徑大小約為60 nm，N/P≥10時形成穩(wěn)定的粒徑80～100 nm的納米復合物，表面電位隨N/P比值的增大而增加 A.PEG-g-PEI-SPIO； B.scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION 圖3 細胞毒性實驗 納米復合物的細胞毒性隨N/P比值的增大而增加

圖4 不同載體轉染hBMSCs的結果 A.N/P=20時，scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION轉染hBMSCs后綠色熒光蛋白表達情況(×100)； B.10 μl Lipofectamine復合4 μg pDNA轉染hBMSCs后綠色熒光蛋白表達情況(×100)； C.N/P=20時PEG-g-PEI-SPION轉染hBMSCs后綠色熒光蛋白表達情況(×100)； D.流式細胞儀檢測結果 (#：與相同的N/P比值下scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION組比較，P<0.001；*：N/P=20時，與其余各組比較，P<0.001)

2.4 轉染實驗 在相同N/P比值下，不同組別間轉染率差異有統(tǒng)計學意義(F=105.303，P<0.001)。scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION組的轉染率明顯高于PEG-g-PEI-SPION組、scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION+free AbGD2組和scAbIgG2a-PEG-g-PEI-SPION組(P均<0.001)，余兩兩比較差異無統(tǒng)計學意義(P均>0.05)。N/P=20時，scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION組轉染率最高，為(59.60±4.50)%；PEG-g-PEI-SPION組的最高轉染率為(17.70±2.90)%；scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION+free AbGD2組的最高轉染率為(16.30±2.60)%；scAbGD2a-PEG-g-PEI-SPION組的最高轉染率為(16.70±4.10)%。Lipofectamine轉染hBMSCs的最佳條件為4 μg pDNA與10 μl Lipofectamin復合，此時轉染率為(34.90±3.60)%。N/P=0時無綠色熒光蛋白表達，轉染率為零(數(shù)據(jù)未列出)。見圖4。

2.5 激光共聚焦顯微鏡及普魯士藍染色實驗 scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION組細胞質內可見很強的顆粒狀分布的綠色熒光和紅色熒光(圖5)，即hBMSCs攝入了大量的納米復合物。普魯士藍染色示scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION組hBMSCs的胞質內可見較多藍染鐵顆粒(圖6)。

2.6 細胞MR顯像 scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION組、PEG-g-PEI-SPION組及scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION+free AbGD2組的細胞在MR T2/T2*加權圖像上均呈低信號(圖7)。隨鐵濃度的增加，細胞的標準化信號強度逐漸降低。在相同的鐵濃度下，scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION信號降低的程度明顯高于PEG-g-PEI-SPION和scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION+free AbGD2制組(圖8)。

圖5 hBMSCs攝取納米復合物的激光共聚焦顯微鏡實驗(×30) scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION組hBMSCs細胞被DAPI(A)、Oregon Green 488(B)、popo-3(C)和Merge(D)標記后的圖像，可見細胞質內有很強的綠色熒光和紅色熒光;PEG-g-PEI-SPION組hBMSCs細胞被DAPI(E)、Oregon Green 488(F)、popo-3(G)和Merge(H)標記后的圖像，及scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION+free AbGD組hBMSCs細胞被DAPI(I)、Oregon Green 488(J)、popo-3(K)和Merge(L)標記后的圖像，細胞質內僅可見到少量綠色熒光和紅色熒光

圖6 hBMSCs攝取靶向和非靶向納米復合物的普魯士藍染色實驗(×200) A.scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION組hBMSCs的胞質內可見較多的藍染鐵顆粒； B.PEG-g-PEI-SPION組hBMSCs的細胞質內僅能見到少量的藍染鐵顆粒 圖7 hBMSCs MR T2/T2*加權成像 A.T2WI; B.T2*WI (從上向下依次為scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION組、PEG-g-PEI-SPION組及scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION+free AbGD2組)

3 討論

Ahn等[12]采用PEI為載體負載綠色熒光蛋白質粒，轉染人脂肪來源的間充質干細胞，最高轉染率僅19%。本研究PEG-g-PEI-SPION轉染hBMSCs的最高轉染率僅(17.70±2.90)%。為提高納米載體的轉染率，常采用靶向修飾納米載體的方法。細胞靶向配體如糖基化分子、多肽、蛋白質和抗體等均可修飾納米載體，用于細胞的靶向基因傳輸[13-15]。T淋巴細胞對病毒載體及非病毒載體的基因改造均不敏感，T細胞表面特異性高表達CD3分子。Chen等[16]利用CD3單鏈抗體修飾PEG-g-PEI，合成具有靶向基因傳輸功能的納米載體scAbCD3-PEG-g-PEI，采用scAbCD3-PEG-g-PEI為載體靶向轉染CD3+小鼠T淋巴細胞，所得轉染率為非靶向載體PEG-g-PEI的16倍。因此，本研究旨在構建靶向載體，對hBMSCs進行靶向基因轉染，以提高轉染效率。

雖然hBMSCs表達多種表面分子，但特異性地高效識別早期hBMSCs仍較困難。近年來，新的表面分子二唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂GD2備受關注[17-18]，無論是新分離的還是體外培養(yǎng)的hBMSCs均可持續(xù)表達GD2，且是骨髓細胞中唯一表達該分子的細胞。GD2是一種含唾液酸的鞘糖脂分子，廣泛分布于hBMSCs細胞膜外層，Martinez等[17]利用GD2抗體免疫磁珠分選從骨髓細胞中高效獲取hBMSCs，免疫細胞化學和RT-PCR的結果均顯示hBMSCs高表達GD2。因此，GD2可作為特異性識別hBMSCs的表面標志物。

圖8 hBMSCs的MR顯像標準化信號強度

本研究以GD2為靶點，成功制備了靶向納米基因載體scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION。將GD2雙鏈抗體打開成為單鏈抗體scAbGD2，有利于減小納米載體的粒徑，同時可保留特異性結合GD2的能力。凝膠阻滯實驗和細胞毒性實驗表明，scAbGD2的存在并不影響scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION復合外源性DNA的能力，也不增加scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION的細胞毒性。scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION復合外源性報告基因pDNA(pEGFP)后可形成穩(wěn)定的納米復合物scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION/pDNA。scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION/pDNA粒徑大小及表面電位適中，細胞毒性較小，hBMSCs的轉染率最高為(59.60±4.50)%，明顯高于非靶向組和對照組的轉染率。

為驗證scAbGD2靶向轉染的特異性，本研究進行了抗體競爭抑制實驗、同型抗體實驗、激光共聚焦顯微鏡實驗及普魯士藍染色實驗，結果均發(fā)現(xiàn)因scAbGD2與hBMSCs表面的GD2特異性結合，scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION/pDNA組增加了細胞對靶向納米復合物的攝入，進而提高其轉染率，細胞內熒光強度的增加，以及細胞質內SPION顆粒的增多。scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION同樣具有良好的標記hBMSCs進行MR顯像的能力。由于scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION具有靶向性，因此有可能將scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION作為磁性探針，對移植的GD2陽性的hBMSCs進行實時活體MR示蹤顯像。

總之，scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION是一種MRI可視的，可有效轉染hBMSCs的靶向納米基因載體。

(致謝：感謝中山大學醫(yī)學院干細胞中心贈予人骨髓間充質干細胞！)

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《中國醫(yī)學影像技術》增刊征稿啟事

《中國醫(yī)學影像技術》雜志于1985年創(chuàng)刊，是由中國科學院主管，中國科學院聲學研究所主辦的國家級學術期刊。本刊是中國科技核心期刊、《中文核心期刊要目總覽》收錄期刊、中國科學引文數(shù)據(jù)庫核心期刊，刊號ISSN 1003-3289，CN 11-1881/R。2017年度《中國醫(yī)學影像技術》增刊擬定于2017年12月出版，現(xiàn)將有關事項通知如下：

1增刊稿件內容放射、超聲、核醫(yī)學、內鏡、介入治療、醫(yī)學物理與工程學等方面的論文。

2投稿截止時間2017年11月30日。

3出刊時間2017年12月20日。

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2017年7月20日

Targetednano-vectorforgenedeliveryintohumanbonemarrowmesenchymalstemcellsandcellularMRimaginginvitro

PANGPengfei1,LIBing2,MAOJunjie1,ZHOUBin1,HUXiaojun1,ZHANGYongyu1,AOFeng1,SHANHong1*
(1.InterventionalMedicineCenter, 2.DepartmentofOphthalmology,theFifthAffiliatedHospital,SunYat-senUniversity,Zhuhai519000,China)

ObjectiveTo explore the feasibility and efficacy of an MRI-visible, targeted, nano-vector which is synthesized by attaching a targeting ligand, the GD2 single chain antibody (scAb GD2), to the distal ends of PEG-g-PEI-SPION as a carrier for gene delivery into human bone marrow mesenchymal stem cells (hBMSCs) and in vitro cellular MR imaging.MethodsscAbGD2-PEG-g-PEI-SPION was synthesized as previously reported. Gel electrophoresis was performed to assess the pDNA condensation ability of scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION. The particle size and Zeta potential of scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION/pDNA nanocomplexes were observed by dynamic light scattering. Cytotoxicity of scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION was evaluated by CCK-8 assay using hBMSCs. Gene transfection efficiency of scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION in hBMSCs was quantified by flow cytometry, PEG-g-PEI-SPION, scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION, scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION+free AbGD2 and scAbIgG2a-PEG-g-PEI-SPION group was established. The cellular internalization of scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION/pDNA nanocomplexes was observed by confocal laser scanning microscopy and Prussian blue staining. MRI of scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION was performed by cellular MRI scanning in vitro.ResultsscAbGD2-PEG-g-PEI-SPION condensed pDNA to form stable nanocomplexes of 80—100 nm in diameter and showed low cytotoxicity to hBMSCs. At the same N/P ratio, the transfection efficiency of scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION group was significantly higher than those of other groups (P<0.001). At the optimal N/P ratio of 20, scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION/pDNA obtained the highest transfection efficiency of (59.60±4.50)% in hBMSCs. Furthermore, hBMSCs labeled with scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION showed sensitive low signal intensity on MRI T2/T2*-weighted images in vitro.ConclusionscAbGD2-PEG-g-PEI-SPION is an efficient MRI-visible targeted nano-vector for gene delivery into hBMSCs.

Bone marrow; Mesenchymal stromal cell; Magnetic resonance imaging; Targeted gene vector; Nanomedicine

10.13929/j.1003-3289.201612120

R445.2

A

1003-3289(2017)10-1463-07

國家自然科學基金青年基金(81501561)、廣東省自然科學基金(2014A030310043、2017A030313873)。

龐鵬飛(1980—)，男，河南沈丘人，博士，副主任醫(yī)師。研究方向：分子影像學。E-mail: pflb@sina.com

單鴻，中山大學附屬第五醫(yī)院介入醫(yī)學中心，519000。E-mail: Shanhong@mail.sysu.edu.cn

2016-12-30

2017-07-27