黃海林劉 俊

·論 著·

銀杏葉提取物對大鼠內(nèi)耳組織及蝸神經(jīng)核線粒體DNA4834bp缺失突變的影響

黃海林1劉 俊2

目的 觀察銀杏葉提取物對大鼠內(nèi)耳組織及蝸神經(jīng)核線粒體（mt）DNA4834bp缺失突變的影響。方法 取24月齡SD大鼠20只，隨機分為實驗組和對照組，各10只，分別用銀杏葉提取物100mg/（kg·d）、等體積生理鹽水灌胃，3個月后處死。干預前后分別測試兩組大鼠ABR，熒光定量PCR檢測線粒體DNA4834bp缺失率，并觀察其與老年聽力損失的關(guān)系。結(jié)果 干預后實驗組ABR 閾移（3.91±3.73）dB peSPL，對照組 ABR 閾移（9.64±2.59）dB peSPL，兩組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。與對照組比較，實驗組蝸神經(jīng)核、內(nèi)耳組織線粒體DNA4834bp缺失率降低（0.2466±0.1335 比 1.0461±0.3423，0.3507±0.158 比 1.0202±0.2269，P＜0.05）。結(jié)論 銀杏葉提取物能抑制大鼠聽覺器官線粒體DNA4834bp缺失突變，減少mtDNA的氧化損傷，改善線粒體功能，改善聽力，從而延緩大鼠老年性耳聾進展。

大鼠；老年性耳聾；銀杏葉提取物；氧化損傷；線粒體DNA4834bp；內(nèi)耳；耳蝸核

1 實驗材料

1.1 實驗動物 SPF級SD老齡大鼠20只（24月齡），平均體質(zhì)量（647.83±10.35）g，所有動物均無噪聲暴露史及其它藥物使用史，無中耳炎。大鼠由華中科技大學同濟醫(yī)學院提供，飼養(yǎng)于浙江中醫(yī)藥大學實驗動物中心，醫(yī)學動物許可證號：SCXK（滬）2013-0016，全封閉SPF級狀態(tài)下標準飼料飼養(yǎng)。

1.2 主要試劑 銀杏葉提取物（商品名：金納多滴劑；規(guī)格：30mL/支）：德國威瑪舒培藥廠提供；PCR引物合成：上海生工生物有限公司；PBS緩沖液：上海永葉生物科技有限公司；SYBR Premix Ex TaqTMⅡ（RR420A）：TaKaRa生物科技公司；10%水合氯醛：浙江省中醫(yī)院提供；Taq酶、蛋白酶k、瓊脂糖：TaKaRa生物科技公司。

1.3 主要儀器 GSI Audera腦干誘發(fā)電位儀：美國GSI公司；電子天平：上海天平儀器廠；臺式離心機：THERMO Electron（美國）公司；Model DK-8D 恒溫水?。荷虾Ｉ艑嶒瀮x器有限公司；BIO-RAD iQ5實時熒光定量PCR儀凝膠成像：BIO-RAD公司；SW-CJ-1F超凈工作臺：蘇州蘇凈集團安泰公司；玻璃勻漿器：江蘇海門健康實驗器材有限公司；體視顯微鏡：南京南派有限公司；眼科手術(shù)器械：江蘇康華醫(yī)療器械廠；紫外線核酸檢測儀：Thermo（美國）公司。

2 實驗方法

2.1 實驗分組 20只老齡SD大鼠（24月齡）隨機分為兩組，實驗組10只，銀杏葉提取物100mg/（kg·d）灌胃。對照組10只，等量體積生理鹽水灌胃。SPF條件下飼養(yǎng)，常溫（22±2℃）、常濕（50%～60%）下標準飼料飼養(yǎng)，自由飲水，連續(xù)飼養(yǎng)90天后處死。

2.2 大鼠ABR反應閾測定 實驗開始前1天及實驗結(jié)束前1天分別進行ABR反應閾測試，測定方法參照孔維佳建立方法進行[10]。測試前兩組大鼠用10%水合氯醛按照0.4mL/kg腹腔內(nèi)注射麻醉，使用GSI Audera腦干誘發(fā)電位儀測試，測試電極采用直徑0.38mm，長13mm針灸針。電極安放位置：記錄電極置于待測耳乳突部皮下，參考電極置于對側(cè)耳乳突皮下，地極置于顱頂皮下，耳機置于測試耳外耳道。參數(shù)設(shè)置：刺激聲為Click聲，刺激重復頻率為11.1/s，疊加 300 次，掃描時間 10ms，間期 100μs。聲刺激強度以100dB peSPL開始，開始強度按10dB peSPL遞減，觀察Ⅲ波波形變化，接近閾值時按5dBpeSPL遞減。閾值以Ⅲ波波形消失，成重復出現(xiàn)時的刺激聲強為該測試耳閾值，刺激聲強單位：dB peSPL。ABR測試采用單盲法，即測試者不知大鼠用藥情況及分組。ABR閾移為治療前后閾值差。

2.3 內(nèi)耳組織及蝸神經(jīng)核mtDNA提取

2.3.1 內(nèi)耳組織mtDNA提取 兩組大鼠ABR測試結(jié)束后立即麻醉斷頭處死，提取雙側(cè)聽泡，置于4℃預冷的充氧無鈣鎂細胞外液中（0.1mol/L PBS，pH 7.4），體視顯微鏡下剝?nèi)ス切晕仛ぃ馄食龆丆orti器、血管紋、螺旋神經(jīng)節(jié)等內(nèi)耳組織。分別置入勻漿管中加入 100μL勻漿液（pH7.4，0.01mol/L Tris-HCI，0.1Mmol/L，0.01mol/L蔗糖），在檢測 mtDNA 缺失率時兩側(cè)內(nèi)耳耳蝸Corti器、血管紋、螺旋神經(jīng)節(jié)可以作為同一個樣本勻漿后提取總DNA，步驟如下：（1）在勻漿管中加入 1000μL RIPA 裂解液（強）；（2）加入蛋白酶K，至終濃度10mg/mL，搖勻混合，55℃水浴過夜消化；（3）加入等體積飽和酚，溫和振蕩10min，12 000g 0℃離心 10min；（4）留取水相，加入等體積酚-氯仿-異戊醇（25：24：1），劇烈震蕩，抽提1～2次；（5）留取水相，加入等體積氯仿，顛倒混勻，抽提1次；（6）留取水相，加入兩倍體積預冷的無水乙醇和1/10體積3M醋酸鈉，-20℃保存1h；（7）離心12 000g，0℃，10min；（8）加入 75%乙醇 1mL 洗滌 1次，12 000g，0℃，離心 5min，棄上清，空氣干燥；（9）所得DNA溶于50μL TE溶液，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.3.2 蝸神經(jīng)核mtDNA提取 兩組大鼠麻醉立即斷頭，于中線處剪開顱骨，將腦組織輕輕從顱骨中取出，注意保留雙側(cè)小腦旁絨球以定位蝸神經(jīng)核。蝸神經(jīng)核定位：根據(jù)Georage Paxinos and Charles Watson[11]制定的定位方法，蝸神經(jīng)核位于延髓嘴側(cè)端的背外側(cè)面，包括背側(cè)核和腹側(cè)核。解剖中以小腦旁絨球為定位標志，如圖1（封二）。取腦組織（蝸神經(jīng)核）100mg，同一只大鼠兩側(cè)蝸神經(jīng)核混合到一起作為一個樣本，置入勻漿器中，加入2mL勻漿液（pH7.4，0.01mol/L Tris-HCI，0.1mmol/L，0.01mol/L 蔗糖）勻漿至無明顯組織塊存在（冰浴操作）。勻漿液4℃離心1000g 10min，取上清0℃離心12 000g 15min，棄去上清，沉淀物即為腦組織線粒體。腦線粒體DNA提取步驟同內(nèi)耳組織。取2μL DNA樣本溶液稀釋至50μL，用紫外線核酸檢測儀器檢測A260/A280純度值并測定其濃度大小。

2.4 實時熒光定量PCR檢測 PCR引物設(shè)計：根據(jù)大鼠線粒體基因序列，利用Primer premier 5.0分析設(shè)計，由大連寶生生物工程有限公司（TaKaRa）幫助合成，引物設(shè)計見表1。

實時定量熒光 PCR反應體系為 25μL，DNA 3μL，每個引物 0.5μL（10μm/L），SYBR 12.5μL，無菌蒸餾水 8.5μL。反應條件:首次94℃預變性 2min，然后94℃變性30s，68℃退火30s，共40個循環(huán)，根據(jù)溶解曲線檢測擴增產(chǎn)物特異型，根據(jù)熒光擴增曲線確定CT值，保存數(shù)據(jù)及圖片。

表1 引物設(shè)計

表1 引物設(shè)計

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2.5 統(tǒng)計學方法 統(tǒng)計軟件采用SPSS17.0。使用相對定量法（2-△△Ct）對mtDNA4834進行定量分析，以β-actin為內(nèi)參基因，目的基因的表達量即mtDNA4834bp普遍缺失量?！鳌鰿t值=實驗組△Ct值-對照組△Ct，2-△△Ct值，表示實驗組目的基因表達量與對照組目的基因表達量比值，即目的基因mtDNA4834bp 缺失率。計量資料以（x±s）表示，采用 t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

3 結(jié)果

3.1 用藥前后ABR反應閾改變 用藥后實驗組ABR 反應閾閾移為（3.91±3.73）dB peSPL，對照組ABR 反應閾閾移為（9.64±2.59）dB peSPL，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），見圖 2（封二）；ABR 閾移圖形見圖3（封二）。

3.2 蝸神經(jīng)核和內(nèi)耳組織mtDNA4834bp缺失率實驗組大鼠蝸神經(jīng)核與內(nèi)耳組織mtDNA4834bp缺失率分別為（0.2466±0.1335）、（0.3507±0.1588）；對照組大鼠蝸神經(jīng)核與內(nèi)耳組織mtDNA4834bp缺失率分別為（1.0461±0.3423）、（1.0202±0.2269），兩組比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見圖 4（封二）。

3.3 RT-PCR擴增產(chǎn)物電泳圖 RT-PCR后，取擴增產(chǎn)物10μL，1.5%瓊脂糖凝膠電泳，以溴化乙錠染色，電壓100V，電泳30min后行凝膠成像掃描結(jié)果，見圖 5（封二）。

4 討論

4.1 線粒體DNA缺失突變和聽力損失關(guān)系 老年性聾是機體衰老過程在聽覺器官的表現(xiàn)。研究[12]發(fā)現(xiàn)，線粒體DNA突變與老年性聾的發(fā)生關(guān)系密切。人類mtDNA在8483～13459bp之間存在著13bp的重復序列，在氧化應激刺激下，容易發(fā)生斷裂，在修復時由于兩端重復序列，產(chǎn)生DNA兩條鏈下游環(huán)，該堿基環(huán)富含鳥嘌呤堿基，對自由基極其敏感，一旦受到ROS攻擊，該環(huán)降解即容易導致“誤認”，發(fā)生4977bp片段缺失，此機制被稱為線粒體重組滑行錯配學說[13]。大鼠 mtDNA8103～12937bp之間也存在16bp的直接重復序列，故大鼠也存在類似缺失突變（mtDNA4834bp）的常見缺失（common deletion，CD）。該缺失突變編碼包括 ND3、ND4、NDS、COⅢ、ATPaseB、ATPase6等[14]基因，影響呼吸鏈有關(guān)亞單位蛋白的合成，從而形成有缺陷的呼吸鏈，ATP產(chǎn)生不足導致蝸內(nèi)離子失平衡，內(nèi)環(huán)境紊亂，最終導致內(nèi)耳毛細胞非特異性損害，引起聽力下降[15]。Bai等[16]報道，在老年聾患者的顳骨中發(fā)現(xiàn)mtDNA4977缺失發(fā)生率為82.4%（14/17），而正常聽力對照組的顳骨mtDNA4977缺失率為47.1%（8/17），兩組間差異顯著，提示mtDNA4977缺失與老年聾的可能關(guān)系。戴樸等[17]檢測了老年人顳骨mtDNA4977缺失，發(fā)現(xiàn)老年聾患者的mtDNA4977缺失發(fā)生率高于老年對照組。大量研究發(fā)現(xiàn)老年性聾患者線粒體DNA4977bp缺失突變發(fā)生率比相同年齡的正常人高。劉紅[18]在檢測老年性耳聾患者毛干中mtDNA4977bp突變率時發(fā)現(xiàn)，重度耳聾患者線粒體DNA缺失量為（33.68±10.30）%，輕度耳聾患者線粒體DNA缺失量為（11.97±4.12）%。劉俊等[19]在研究大鼠腦內(nèi)耳組織mtDNA時發(fā)現(xiàn)mtDNA4834片段缺失率為60%，在青年組大鼠未發(fā)現(xiàn)mtDNA4834的缺失。

4.2 銀杏葉提取物作用機制探討 中藥銀杏（ginkgo biloba）屬銀杏科，是我國的特產(chǎn)植物。早在1975年，人們就將銀杏葉提取物（EGB761）應用于臨床。在衰老過程中，因抗氧化物酶活性下降以及自身DNA 堿基切除修復（base excision repair，BER）的衰退，導致大量ROS不能完全被清除而在機體中積累下來[20]。不斷累積的ROS破壞生物膜產(chǎn)生丙二醛（malonaldehyde，MDA），同時超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GPX）活性隨著年齡增長而降低，所以一般用MDA、SOD、GPX作為反映老化的指標，反映機體氧化損傷的程度[21]。研究證實，銀杏葉提取物治療后血清SOD、GSH顯著升高，MDA明顯下降，提示該藥物能清除體內(nèi)過多的自由基，抑制細胞膜的脂質(zhì)等生物大分子發(fā)生過氧化反應作用[22]。大多數(shù)學者認為，內(nèi)耳耳蝸毛細胞和螺旋神經(jīng)節(jié)退變是老年性耳聾的關(guān)鍵。其具體病理變化主要包括四個方面[23]：（1）耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)細胞、神經(jīng)纖維退變及變性；（2）耳蝸內(nèi)外毛細胞萎縮消失，同時伴隨支持細胞的減少；（3）血管紋基底膜增厚、鈣化、變性導致彈性減退引起能量傳導減少且ATP產(chǎn)生不足；（4）聽覺中樞相對應的核團細胞萎縮，減少及神經(jīng)纖維變性。銀杏葉提取物對耳鳴和耳聾的藥理作用主要包括：（1）降低血液黏稠度，增加內(nèi)耳血流，改善耳蝸血流變情況，降低毛細胞損傷程度，從而保護內(nèi)耳毛細胞，改善聽力[24]；（2）具有抗氧化作用，清除過多自由基，保護細胞膜，從而保護線粒體功能[25]；（3）具有增加缺血組織對氧氣和葡萄糖的供應量，促進其對氧的利用率[26]。本實驗結(jié)果提示，實驗組大鼠蝸神經(jīng)核、內(nèi)耳組織mtDNA4834b缺失率較對照組降低（P＜0.05），表明銀杏葉提取物能夠顯著減低mtDNA4834bp缺失率，且實驗組比對照組ABR聽閾閾值明顯減?。≒＜0.01），表明銀杏葉提取物能延緩老齡大鼠聽功能下降，提示銀杏葉提取物可以改善線粒體功能，延緩衰老。

綜上所述，銀杏葉提取物能夠清除自由基，減少線粒體DNA缺失突變，保護線粒體功能，改善聽力，延緩老年聾的發(fā)生發(fā)展損傷，從而達到治未病目的。因此，研究銀杏葉提取物對聽覺器官線粒體DNA缺失突變的影響，對老年聾的防治有重要的意義，且與治未病的理念相一致。

［1］ Yamasoba T，Lin FR，Someya S，et al.Current concepts in age-related hearing loss：epidemiology and mechanistic pathways［J］.Hear Res，2013，303（9）：30-38.

［2］ Mao Z，Zhao L，Pu L，et al.How well can centenarians hear［J］.PLoS One，2013，8（6）：e65565.

［3］E Fransen，N Lemkens，L Van Laer，et al.Age-related hearing impairment（ARHI）：environmental risk factors and genetic prospects［J］.Exp Gerontol，2003，38（4）：353-359.

［4］ Malik AN，Czajka A.Is mitochondrial DNA content a potential biomarker of mitochondrial dysfunction［J］.Mitochondrion，2013，13（5）：481-492．

［5］ Sequeira A，Martin MV，Rollins B，et al.Mitochondrial mutations and polymorphisms in psychiatric disorders［J］.Front Genet，2012，3：103.

［6］ NM Druzhyna，GL wilson，SP Ledous.Mitochondrial DNA repair in aging and disease［J］.Mech Ageing Dev，2008，129（7-8）：383-390.

［7］黃維義，張英，陳蓉.銀杏葉提取物抗心肌缺血再灌注損傷作用的研究［J］.現(xiàn)代醫(yī)學，2006，34（3）：183-186.

［8］ Kusmic C，Basta G，Lazzerini G，et al.The effect of Ginkgo biloba in isolated ischemic/reperfused rat heart：a link between vitamin E preservation and prostaglandin biosynthesis［J］.J Cardiovasc Pharmacol，2004，44（3）：356-362.

［9］張文高，顏廷和，李岱龍，等.銀杏葉提取物對老齡大鼠的抗氧化作用研究［A］.世界中醫(yī)藥學會聯(lián)合會老年醫(yī)學專業(yè)委員會.世界中聯(lián)第三屆中醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合老年醫(yī)學學術(shù)大會論文集［C］.世界中醫(yī)藥學會聯(lián)合會老年醫(yī)學專業(yè)委員會，2010：4.

［10］孔維佳，汪吉寶，鐘乃川.豚鼠耳蝸電圖及聽覺腦干電位同步記錄法的探討［J］.臨床耳鼻咽喉科雜，1989，3：148-152.

［11］ Massopust LC.The rat brain instereotaxic co-ordinates in anatomical record［J］.Wlley-Liss，1956，124（2）：10158-0012.

［12］ Tengan CH，Gabbai AA，Shanske S，et al.Oxidative phosphorylation dysfunction does not increase the rate of accumulation of age-related mtDNA deletions in skeletal muscle［J］．Mutation Research/Fundamental and Molecular Mechanisms of Mutagenesis，1997，379（1）：1-11．

［13］EA Schon，R Rizzuto，CT Moraes，et al.A direct repeat is a hotspot for large-scale deletion of human mitochondrial DNA［J］.Science，1989，244（4902）：346-349.

［14］ Chen B，Zhong Y，Peng W，et al.Age-related changes in the central auditory system：comparison of D-galactoseinduced aging rats and naturally aging rats［J］.Brain Res，2010，1344（1344）：43-53.

［15］Grossmanll，Shoubridge EA.Mitochondrial geneties and human disease［J］.Bioessay，1996，18（12）：983-991.

［16］Bai U，Seidman MD.A specific mitochondrial DNA deletion（mtDNA4977）is identified in a pedigree of a family with hearing loss［J］.Hear Res，2001，154（1-2）：73-80.

［17］戴樸，姜泗長，顧瑞，等.內(nèi)耳缺血及線粒體DNA缺失與老年性耳聾發(fā)病的關(guān)系［J］.中華醫(yī)學雜志，2000，80（12）：16-19.

［18］劉紅.毛干中線粒體DNA 4977bp缺失突變與老年性聾功能損害程度的關(guān)系［D］.山東大學，2014.

［19］劉俊，孔維佳，劉貞榮.線粒體DNA大片段缺失與老年性聾的關(guān)系［J］.臨床耳鼻咽喉科雜志，2003，17（11）：678-680.

［20］Chen JH，Hales C，Ozanne SE.DNA damage，cellular senescence and organismal ageing：causal or correlative［J］.Nucleic Acids Res，2007，35（22）：7417-7428.

［21］Otova B，Kalvach Z，Snejdrlova M.Biological mechanisms of aging［J］.Cas Lek Cesk，2006，145（9）：688-694.

［22］覃紅斌.銀杏葉提取物對老年大鼠的抗衰老研究［J］.湖北民族學院學報（醫(yī)學版），2007，04：13-14.

［23］ Willott JF，Hnath Chisolm T，Lister JJ.Modulation of presbycusis：current status and future directions［J］.Audiol Neurootol，2001，6：231-249.

［24］T Yoshitake，S Yoshitake，J Kehr.The Ginkgo biloba extract EGb 761 and its main constituent flavonoids and ginkgolides increase extracellular dopamine levels in the rat prefrontal cortex［J］.British Journal of Pharmacology，2010，159（3）：659-668.

［25］彭華.3，3-亞氨基二丙腈的豚鼠耳蝸毒性及金納多對3，3-亞氨基二丙腈致耳蝸毒性作用的實驗研究［D］.第一軍醫(yī)大學，2002.

［26］ Tziridis K，Korn S，Ahlf S.Protective effects of Ginkgo biloba extract EGb 761 against noise trauma-induced hearing loss and tinnitus development［J］.Neural Plast，2014，2014（2）：427298.

Effect of Ginkgo Biloba Extract on Mitochondrial DNA4834bp Deletion in the Inner Ear and Cochlear Nucleus of the Brain of Rats

HUANG Hailin1,LIU Jun2

1 Department of Ear-Nose-Throat,Jinhua Central Hospital,Jinhua(321000),China;2 Department of Ear-Nose-Throat,Zhejiang Chinese Medical Hospital,Hangzhou(310000),China.

ObjectiveTo investigate the effect of Ginkgo Biloba（EGB761） extract on mitochondrial DNA4834bp deletion in inner ear tissue and cochlear nucleus of the brain.MethodsTwenty SD rats at 24 months of age were randomly divided into two group:experimental group（EGB761 group,n=10）,which were

gastric infusion of EGB761 at the concentration of 100mg（/kg·d）for 12 weeks and control group（saline group,n=10）,which were infused the same volume saline.All rats were sacrificed at the end of treatment.Auditory brainstem response（ABR） was detected before and after the treatment.The deletion of mitochondrial DNA4834bp in the inner ear and cochlear nucleus of the brain was respectively identified by real-time PCR and its relationship with the ABR threshold shift was observedResultsA significant difference in ABR threshold shift was found between the experimental groupand control group （3.91±3.73dB peSPL vs 9.64±2.59dB peSPL,P＜0.05）.The mitochondrial DNA 4834bp common deletion mutation in cochlear nucleus and the inner ear of experimental group was both lower than those in the control group（0.2466±0.1335 vs 1.0461±0.3432;0.3507±0.158 vs 1.0202±0.2269;P＜0.05）.ConclusionEGB761 can inhibit the increaseof mitochondrial DNA deletion in the inner ear and cochlear nucleus of the brain to retard presbycusis in the aged rats by protecting mitochondrial DNA from oxidative damage.

rats;presbycusis;EGB761;oxidative damage;mitochondrial DNA4834bp;inner ear;cochlear nucleus

浙江省中醫(yī)藥科技計劃項目（No.2009CB017）；浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生科技計劃項目（No.2009B120）

1浙江省金華市中心醫(yī)院耳鼻喉科（金華 321000）；2浙江省中醫(yī)院耳鼻喉科（杭州310000）

劉俊，E-mail：liujunmn18@sina.com

（收稿：2017-03-09 修回：2017-04-26）

老年性耳聾（presbycusis）是指隨著年齡的增長，雙耳逐漸出現(xiàn)的感音神經(jīng)性耳聾，主要是以高頻聽力下降為主的聽力損失，又稱為年齡相關(guān)性聽力損失（age-related hearing loss，AHL）[1]。隨著人口老齡化，老年性聾已成為當今世界共同面臨的問題，是成人聽力障礙的最常見原因。據(jù)資料統(tǒng)計，美國70歲以上的老年人中60%伴有聽力障礙，而超過80歲老人中聽力障礙達到80%以上[2]，這使老年人的生活質(zhì)量明顯下降，因此，對老年聾的防治工作具有重要意義。大多數(shù)學者認為老年聾的發(fā)生機制主要包括遺傳因素和環(huán)境因素[3]，但具體病因迄今尚未闡明。線粒體（mt）作為細胞的能量工廠，在產(chǎn)生能量同時可產(chǎn)生活性氧自由基（reactive oxygen species，ROS）[4]。大量的ROS堆積使mtDNA受到氧化損害，發(fā)生大片段缺失突變，最終導致內(nèi)耳ATP產(chǎn)生不足，線粒體功能紊亂，造成不可逆聽力損失[5]。雖然生物體衰老過程無法避免，但我們可以通過干預措施減少ROS對線粒體的氧化損傷，從而減少和預防DNA突變的發(fā)生，延緩衰老[6]。研究[7]表明，銀杏葉提取物具有多種生理活性，其中主要成分銀杏內(nèi)酯類具有拮抗血小板活化因子（PAF）、改善血流動力學與血液流變學作用；而銀杏黃酮主要作用是直接捕捉和清除超氧陰離子、氧自由基等活性氧，阻斷和終止自由基連鎖反應鏈，發(fā)揮抗脂質(zhì)過氧化，并能抑制自由基的產(chǎn)生[8]。研究[9]表明，銀杏葉提取物（EGb761）能減少老齡大鼠內(nèi)耳血管紋損傷，保護聽力，延長衰老進程。本實驗觀察銀杏葉提取物對老年大鼠線粒體DNA缺失突變的影響及作用機制。