譚志超

（北京寶得瑞健康產(chǎn)業(yè)有限公司，北京 101117）

沙棘籽提取物配方產(chǎn)品抗氧化作用的研究

譚志超*

（北京寶得瑞健康產(chǎn)業(yè)有限公司，北京 101117）

近年國(guó)家提出大健康戰(zhàn)略，推出了《中國(guó)特殊醫(yī)學(xué)用途配方食品》，意在將醫(yī)療前置，發(fā)揮中國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的優(yōu)勢(shì)，使用中藥及提取物進(jìn)行組方治療未病。隨著年齡的增長(zhǎng)，人體內(nèi)源性抗氧化酶的分泌逐漸減少，體內(nèi)自由基不斷積累，從而導(dǎo)致疾病的發(fā)生，如糖尿病、心血管疾病、癌癥、帕金森和阿爾茲海默癥、缺血再灌注損傷等。沙棘原花青素具有很強(qiáng)的抗氧化活性，可以有效清除體內(nèi)自由基。本研究將沙棘籽提取物和沙棘油、紫蘇籽油組方，并以沙棘原花青素為標(biāo)志性成分，研究組方的抗氧化活性，進(jìn)而為解決慢性疾病問(wèn)題提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

沙棘籽提取物，北京寶得瑞健康產(chǎn)業(yè)有限公司；沙棘油，北京寶得瑞健康產(chǎn)業(yè)有限公司；紫蘇籽油，吉林圣基實(shí)業(yè)有限公司。

1.2 試劑

原花青素對(duì)照品，天津尖峰天然產(chǎn)物有限公司；丙二醛（MDA）測(cè)定試劑盒、還原型谷胱甘肽（GSH）測(cè)定試劑盒、谷胱肽過(guò)氧化物酶（GSH-PX）活力測(cè)定試劑盒，南京建成生物工程研究所。

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)昆明種雄性12月齡小鼠60只，生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK（鄂）2015-0018，使用許可證號(hào)為SYXK（鄂）2012-0065，湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心。試驗(yàn)動(dòng)物飼料，生產(chǎn)許可證號(hào)為SYXK（鄂）2011-0011，武漢萬(wàn)千佳興生物科技有限公司。動(dòng)物飼養(yǎng)室溫度為20℃～26℃，濕度為40%～70%。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 樣品處理

樣品制備：準(zhǔn)確稱(chēng)取配方產(chǎn)品5.0 g、10.0 g、15.0 g，分別用大豆油定容至100 mL，供低、中、高劑量組小鼠灌胃用，稱(chēng)取100 mL大豆油作為溶媒對(duì)照組和100 mL純水作為陰性對(duì)照組，各劑量均按0.01 mL/gBW的容量灌胃。各劑量組產(chǎn)品均在試驗(yàn)前配制，臨用前搖勻，未用完的樣品放入4℃冰箱保存。

1.4.2 原花青素含量測(cè)定

1.4.2.1 試樣制備

稱(chēng)取50 mg～1 000 mg試樣置于小燒杯中，加入30 mL甲醇，轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，超聲處理20 min，冷卻至室溫后，加甲醇至刻線，搖勻。取1 mL稀釋后的試樣，用甲醇定容至10 mL備用。

1.4.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

稱(chēng)取原花青素對(duì)照品10.0 mg溶于10 mL甲醇中，分別吸取該溶液0.0 mL、0.3 mL、0.8 mL、1.2 mL、1.7 mL、2.1 mL、2.5 mL于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻線，搖勻，各取1 mL于546 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.4.2.3 試樣中原花青素含量測(cè)定

將正丁醇與鹽酸按95∶5的體積比混合后，取出6 mL置于圓底燒瓶中，再加入0.2 mL硫酸鐵銨溶液和1 mL試樣溶液，混勻，置沸水?。ǎ?5℃）回流，加熱40 min后，立即置于冰水浴中冷卻，1 h內(nèi)于546 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值，由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算試樣中原花青素含量。

1.4.3 動(dòng)物試驗(yàn)

將60只12月齡小鼠按血中丙二醛（MDA）水平隨機(jī)分為5組，分別為溶媒對(duì)照組、陰性對(duì)照組、低、中、高劑量組，其中低、中、高劑量組分別以0.50 g/kg BW、1.00 g/kg BW、1.50 g/kg BW劑量連續(xù)灌胃30 d，溶媒對(duì)照組和陰性對(duì)照組分別以等量的大豆油和純水灌胃30 d。受試動(dòng)物連續(xù)灌胃30 d后，各組動(dòng)物選擇內(nèi)眥靜脈采血，配置成1%的溶血液，分別檢測(cè)丙二醛（MDA）含量及谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-PX）活力；處死動(dòng)物，取肝臟做勻漿，制備10%的肝勻漿，做還原型谷胱甘肽（GSH）測(cè)定。

1.4.4 統(tǒng)計(jì)分析方法

用SPSS軟件進(jìn)行方差分析，按程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，若方差齊，計(jì)算F值，若F值＜F0.05，表明各組均數(shù)間無(wú)顯著性差異；若F值≥F0.05，P≤0.05，需采用多個(gè)試驗(yàn)組和一個(gè)對(duì)照組間均數(shù)的兩兩比較法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

對(duì)非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)。

2 結(jié)果與分析

2.1 配方產(chǎn)品中沙棘原花青素含量

測(cè)定結(jié)果表明，配方產(chǎn)品中沙棘原花青素含量為（8.31±0.074）g/kg。

2.2 配方產(chǎn)品對(duì)小鼠體重的影響

配方產(chǎn)品對(duì)小鼠體重的影響結(jié)果見(jiàn)下頁(yè)表1。由表1可知，配方產(chǎn)品對(duì)各劑量組小鼠體重均無(wú)明顯影響，與陰性對(duì)照組和溶媒對(duì)照組比較，均無(wú)顯著性差異P＞0.05。

2.3 配方產(chǎn)品對(duì)小鼠1%溶血液中GSH-PX活力和MDA含量的影響

不同試驗(yàn)組小鼠1%溶血液中GSH-PX活力和MDA含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)下頁(yè)表2。由表2可知，配方產(chǎn)品高劑量組能顯著減少小鼠1%溶血液中MDA含量，能顯著升高小鼠1%溶血液中GSH-PX活力，與陰性對(duì)照組和溶媒對(duì)照組比較，均有顯著性差異（P＜0.05）。

表1 配方產(chǎn)品對(duì)小鼠體重的影響（n=12）

表2 配方產(chǎn)品對(duì)小鼠1%溶血液中GSH-PX活力和MDA含量的影響（n=12）

2.4 配方產(chǎn)品對(duì)小鼠肝勻漿中GSH含量的影響

不同試驗(yàn)組小鼠肝勻漿中GSH含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。由表3可知，配方產(chǎn)品高劑量組能顯著提高小鼠10%肝勻漿中GSH含量，與陰性對(duì)照組和溶媒對(duì)照組比較，均有顯著性差異（P＜0.05）。

表3 配方產(chǎn)品對(duì)各組小鼠10%肝勻漿中GSH含量的影響（n=12）

3 結(jié)論

以SPF級(jí)昆明種12月齡小鼠為試驗(yàn)對(duì)象，分為溶媒對(duì)照組、陰性對(duì)照組、低、中、高劑量組，連續(xù)灌胃30 d后，檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)，通過(guò)計(jì)算P值，對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的顯著性差異進(jìn)行判斷。試驗(yàn)結(jié)果顯示，將各劑量組分別與陰性對(duì)照組和溶媒對(duì)照組比較，高劑量組小鼠10%肝勻漿中還原性GSH含量顯著升高，1%溶血液中MDA含量顯著減少，1%溶血液中GSH-PX活力顯著升高，表明沙棘籽提取物為主體的配方產(chǎn)品具有抗氧化作用。

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Study on antioxidation effect of seabuckthorn seed extract

TAN Zhichao*
（Beijing baoderui health industry co.LTD，Beijing 101117，China）

以沙棘籽提取物為主體，復(fù)配沙棘油、紫蘇籽油進(jìn)行組方，以沙棘原花青素為標(biāo)志性成分，按人群推薦攝入量為每人每天3 g，確定攝入劑量為0.05 g/kg BW（成人體重均值以60 kg計(jì)）。按照人群推薦日攝入量的10、20、30倍設(shè)置低、中、高3個(gè)劑量組（即0.5 g/kg BW、1.0 g/kg BW、1.5 g/kg BW），對(duì)SPF級(jí)昆明種小鼠連續(xù)灌胃30 d，以溶血液中MDA含量、溶血液GSH-PX活力、肝勻漿中GSH含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，各劑量組分別與陰性對(duì)照組和溶媒對(duì)照組比較。結(jié)果顯示，高劑量組小鼠10%肝勻漿中還原性GSH含量顯著升高，1%溶血液中MDA含量顯著減少，1%溶血液中GSH-PX活力顯著升高。試驗(yàn)表明，以沙棘籽提取物為主體的配方產(chǎn)品具有抗氧化作用。

沙棘籽提取物；抗氧化；沙棘原花青素

With seabuckthorn seed extract as the main body,compound with seabuckthorn procyanidins,perilla seed oil formula,sea buckthorn procyanidins as iconic composition,according to the crowd is recommended intake per day for 3 g,to determine the dosage is 0.05 g/kg BW(adult weight average at 60 kg).In accordance with the recommended daily intake of crowd 10,20,30 times set high,medium and low three dose groups(i.e.,0.5 g/kg BW,1.0 g/kg BW,1.5 g/kg BW),continuous lavage for SPF kunming mice to 30 d,to dissolve the MDA content in blood and dissolving blood gsh-px activity,content of GSH in liver homogenate as evaluation index,each dose group compared with negative control group and solvent control group respectively.The results showed that the reduced GSH content in the high-dose group was significantly higher in 10%of the hepatic homogenate,and the content of MDA in 1%dissolved blood was significantly decreased,and the gsh-px activity in 1%dissolved blood was significantly increased.The experiment shows that the formula with the extract of the seed extract is antioxidative.

seabuckthorn seed extract；antioxidant；seabuckthorn procyanidins

TS225.1+9

A

1673-6044（2017）02-0019-03

10.3969/j.issn.1673-6044.2017.02.007

*譚志超，男，1979年出生，2003年畢業(yè)于內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)生物技術(shù)專(zhuān)業(yè)，質(zhì)量工程師。

2017-05-31