歐陽(yáng)霖

(1上海市閔行區(qū)疾病預(yù)防控制中心 上海 201101; 2復(fù)旦大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院流行病學(xué)教研室 上海 200032;3復(fù)旦大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院遺傳學(xué)研究所 上海 200433)

HIV-1抗體陽(yáng)性者WB帶型及其在不同臨床分期中的特征分析

歐陽(yáng)霖1,3張鐵軍2張穎華1王小光1陳國(guó)強(qiáng)1汪靜1朱煥章3△

(1上海市閔行區(qū)疾病預(yù)防控制中心 上海201101;2復(fù)旦大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院流行病學(xué)教研室 上海200032;3復(fù)旦大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院遺傳學(xué)研究所 上海200433)

目的分析HIV-1抗體陽(yáng)性者血清中病毒蛋白的變化,探討不同臨床分期HIV-1抗體陽(yáng)性者Western blot(WB)帶型特點(diǎn)。方法應(yīng)用WB檢測(cè)HIV-1感染者體內(nèi)特異性抗體,流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)。結(jié)果208例HIV-1抗體陽(yáng)性者中,男性193例(92.79%),同性性接觸感染163例(78.37%)。WB特異性條帶gp160、gp120、gp41、p66、p51、p31、p24維持較高的抗體陽(yáng)性率,在不同臨床分期間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;異性性行為感染者gag基因編碼蛋白的抗體p55條帶的出現(xiàn)率高于同性性行為感染者(P<0.05);全帶型①、次全帶型②(缺失p55)、次全帶型③(缺失p39)、次全帶型④(缺失p55和p39)、次全帶型⑤(缺失p55、p39和p17)5種帶型為常見(jiàn)帶型,全帶型出現(xiàn)率最高(44.2%)。結(jié)論HIV-1抗體陽(yáng)性者的CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)有助于判斷機(jī)體免疫狀態(tài)、確定疾病分期及監(jiān)測(cè)疾病進(jìn)展。閔行區(qū)艾滋病的防治重點(diǎn)為外來(lái)流動(dòng)人員及男男性行為人群。

HIV-1抗體; WB帶型; CD4+T淋巴細(xì)胞; 臨床分期

我國(guó)1985年報(bào)告首列艾滋病病例,1998年開(kāi)始艾滋病進(jìn)入快速增長(zhǎng)期,覆蓋全國(guó)31個(gè)省市區(qū),部分地區(qū)出現(xiàn)暴發(fā)流行[1]。據(jù)衛(wèi)生部通報(bào),截至2016年底,我國(guó)大陸累計(jì)報(bào)告艾滋病病毒感染者和艾滋病患者達(dá)66萬(wàn)余例,其中患者28萬(wàn)余例,死亡20.9萬(wàn)余例[2]?！八拿庖魂P(guān)懷”政策實(shí)施以來(lái)的10年,我國(guó)基本控制了艾滋病疫情上升勢(shì)頭,艾滋病主要流行模式從血液傳播轉(zhuǎn)變?yōu)樾越佑|傳播,男男性行為者(man who have sex with men,MSM) HIV感染率呈上升趨勢(shì)[3]。HIV病毒感染人體后,刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體,由于HIV結(jié)構(gòu)蛋白的濃度、抗原性強(qiáng)弱、產(chǎn)生相應(yīng)抗體的時(shí)間不同,以及不同個(gè)體對(duì)不同抗原成分的免疫應(yīng)答強(qiáng)度等存在一定差異,導(dǎo)致HIV-1 Western bolt (WB)的帶型也存在一定的差異,從體液免疫的角度體現(xiàn)了HIV對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)的破壞程度。為進(jìn)一步掌握不同人群特征、不同臨床分期WB帶型的分布及變化特征,探討不同階段HIV/AIDS患者體內(nèi)血清學(xué)指標(biāo)的變化規(guī)律,為上海市閔行區(qū)艾滋病防控工作提供科學(xué)依據(jù)?，F(xiàn)對(duì)閔行區(qū)HIV實(shí)驗(yàn)室確診病例資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)匯總及分析處理。

資 料 和 方 法

研究對(duì)象2015—2016年上海市閔行區(qū)疾控中心艾滋病確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室新發(fā)現(xiàn)HIV-1抗體陽(yáng)性者 208例,對(duì)其年齡、性別、籍貫、民族、性接觸情況進(jìn)行調(diào)查。

儀器及試劑Bee Blot全自動(dòng)蛋白印跡儀及配套試劑盒(美國(guó)MP Biomedicals公司),FACSCOUNT流式細(xì)胞儀及配套試劑(美國(guó)BD公司)。

檢測(cè)方法HIV-1抗體確認(rèn)實(shí)驗(yàn)采用WB,CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)用FACSCOUNT流式細(xì)胞儀檢測(cè),根據(jù)《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范(2015年修訂版)》和試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行結(jié)果判定。按CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果分為原發(fā)感染期組(≥500/μL)、感染中期組(≥200/μL且<500/μL)和AIDS期組(<200/μL)[4]。

統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用Excel軟件建立數(shù)據(jù)庫(kù),應(yīng)用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

研究對(duì)象基本情況208例HIV-1抗體陽(yáng)性者中(表1),男性193例(92.79%),女性15例(7.21%);年齡16～86歲,平均(32.62±12.58)歲;本地戶(hù)籍47例(22.60%),外地戶(hù)籍161例(77.40%);漢族205例(98.56%),少數(shù)民族3例(1.44%);經(jīng)異性性接觸感染45例(21.63%),同性性接觸感染163例(78.37%)。

WB帶型檢測(cè)結(jié)果92例(44.23%)出現(xiàn)全條帶(即gp160、gp120、p66、p55、p51、gp41、 p31、p24、p17,表1)。抗env基因編碼的包膜蛋白抗體檢出率最高:gp160和gp120的檢出率均為100%(208/208),gp41為99.04%(206/208);抗pol基因編碼的抗體檢出率較高:p66的檢出率為95.67%(199/208),p51為93.27%(194/208),p31為88.46%(184/208);抗gag基因編碼的核心蛋白抗體檢出率相對(duì)偏低:除p24為100%(208/208)外,p55為55.29%(115/208),p17為81.73%(170/208)。反應(yīng)條帶中,p55缺失率最高。

WB帶型分布與人口學(xué)特征、感染途徑的關(guān)系208例HIV-1抗體陽(yáng)性者中env基因、pol基因和gag基因編碼蛋白的抗體WB帶型在不同性別之間的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,在3個(gè)年齡組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,在戶(hù)籍中差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,由gag基因編碼蛋白的抗體p55條帶出現(xiàn)率在不同性行為感染方式中的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),異性性行為p55條帶出現(xiàn)率高于同性性行為,其余各條帶出現(xiàn)率在傳播方式間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表1)。

CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果208例HIV-1抗體陽(yáng)性者中首次CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)最小值為<50/μL,最大值為969/μL,其中AIDS期組59例(28.4%),感染中期組117例(56.2%),原發(fā)感染期組32例(15.4%)。

各臨床分期與WB帶型分布的關(guān)系3個(gè)臨床分期組中,WB特異性條帶gp160、gp120、gp41、p66、p51、p31、p24維持較高的抗體陽(yáng)性率,且組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;gp160、gp120、gp41和p24抗體陽(yáng)性率最高;抗體陽(yáng)性率較低的p55、p39和p17在3個(gè)分期組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表2)。

表1 HIV抗體陽(yáng)性者WB帶型分布與人口學(xué)特征、傳播途徑的關(guān)系Tab 1 Distribution of WB band pattern by characteristic and route of infection [n (%)]

表2 各臨床分期與WB帶型分布的關(guān)系Tab 2 Relationship between WB band pattern and clinical stage [n (%)]

各臨床分期的WB帶型本次共檢測(cè)出20種WB帶型,其中5種帶型在3個(gè)臨床分期中為主要優(yōu)勢(shì)帶型,分別為全帶型①,即gp160、gp120、p66、p55、p51、gp41、p39、p31、p24和p17;次全帶型②缺失p55,即gp160、gp120、p66、p55、p51、gp41、p31、p24和p17;次全帶型③缺失p39,即gp160、gp120、p66、p51、gp41、p39、p31、p24和p17;次全帶型④缺失p55和p39,即gp160、gp120、p66、p51、gp41、p31、p24和p17;次全帶型⑤缺失p55、p39和p17,即gp160、gp120、p66、p51、gp41、p31和p24。除上述5種帶型外,其他帶型所占比例較少,僅有個(gè)別病例,因此不能歸為特征帶型,而歸納為其他帶型⑥ (表3)。

表3 各臨床分期的WB帶型分布Tab 3 The distribution of WB band pattern by clinical stage [n (%)]

討論

HIV抗體檢測(cè)是我國(guó)目前常規(guī)使用的HIV感染診斷方法[5],而CD4+T淋巴細(xì)胞水平是判定感染者病程、預(yù)測(cè)臨床進(jìn)展以及評(píng)價(jià)抗病毒治療效果的重要指標(biāo)[6]。

本研究中208例HIV-1抗體陽(yáng)性者的WB反應(yīng)帶型中,外膜蛋白抗體(env)gp160、gp120、gp41及核心蛋白抗體(gag)p24以及聚合酶抗體(pol)的p66在不同人群、不同臨床分期中出現(xiàn)的頻率較高,表明這些基因蛋白抗原性強(qiáng),其抗體條帶的出現(xiàn)是確認(rèn)HIV-1感染的必備條件,這與以往的研究一致[7-10]。

本次研究發(fā)現(xiàn),異性性行為的p55條帶出現(xiàn)率高于同性性行為。p55是前體蛋白,經(jīng)酶解后形成p24和p17,但是p55沒(méi)有糖基化,所以它在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定性差,而此次研究發(fā)現(xiàn)p55在傳播方式出現(xiàn)了差異,因?yàn)闃颖玖刻?無(wú)法查究其原因,有待擴(kuò)大研究進(jìn)一步闡明。

有文獻(xiàn)報(bào)道機(jī)體感染HIV后各種病毒蛋白的抗體陸續(xù)產(chǎn)生,因此隨著疾病的進(jìn)程,不同疾病階段各病毒抗體組分在WB條帶中的反應(yīng)強(qiáng)度各不相同[11]。但本次研究的WB條帶在3個(gè)臨床分期中并未出現(xiàn)顯著的變化,可能由于個(gè)體體質(zhì)及機(jī)體免疫系統(tǒng)的差異造成,無(wú)法作為個(gè)體疾病進(jìn)展的預(yù)判。

在帶型分析中,全帶型①,次全帶型②缺失p55,次全帶型③缺失p39,次全帶型④缺失p55和p39,次全帶型⑤缺失p55、p39和p17這5種帶型在3個(gè)臨床分期中占有較大比重(80.3%),但除了全帶型①外,原發(fā)感染期和感染中期主要為次全帶型③和⑤,而AIDS期主要為次全帶型②、③、⑤,從而可以看出p55的缺失頻率在原發(fā)感染期到AIDS期的進(jìn)程中呈現(xiàn)了一種遞增關(guān)系。因此,是否能將該蛋白抗體轉(zhuǎn)陰作為疾病從原發(fā)感染期進(jìn)入感染中期或AIDS期的一個(gè)潛在判別依據(jù),將在今后工作中繼續(xù)研究闡明。

本次研究結(jié)果顯示,新發(fā)現(xiàn)的HIV-1抗體陽(yáng)性者并不都是新近感染者,大部分感染時(shí)間較長(zhǎng),機(jī)體免疫功能已較差,應(yīng)加強(qiáng)宣傳教育,擴(kuò)大檢測(cè)覆蓋面,盡早發(fā)現(xiàn)HIV-1抗體陽(yáng)性者,及時(shí)治療。同時(shí)調(diào)查發(fā)現(xiàn),HIV-1抗體陽(yáng)性者絕大部分為MSM和外地人員,提示上海市閔行區(qū)艾滋病的防治重點(diǎn)應(yīng)該放在外來(lái)流動(dòng)人員以及MSM人群上。

綜上所述,了解HIV-1抗體陽(yáng)性者WB反應(yīng)帶型的免疫學(xué)特征,結(jié)合CD4+T淋巴細(xì)胞技術(shù)和流行病學(xué)資料分析疾病不同分期的特征,可為HIV-1感染者臨床分期的鑒別診斷提供重要信息,從而控制艾滋病的進(jìn)一步流行。

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ThebandpatternsofWesternboltindifferentclinicalstagesofHIV-1infection

OU YANG Lin1,3,ZHANGTie-jun2,ZHANGYin-hua1,WANGXiao-guang1,CHENGuo-qiang1,WANGJing1,ZHUHuan-zhang3△

(1CenterforDiseaseControlandPrevertionofMinhangDistrict,Shanghai201101,China;2DepartmentofEpidemiology,SchoolofPublicHealth,FudanUniversity,Shanghai200032,China;3InstituteofGenetics,SchoolofLifeSciences,FudanUniversity,Shanghai200433,China)

ObjectiveTo investigate the band pattern characteristics of Western bolt (WB) by analyzingthe change of anti-virus antibodies from patients with different clinical stages of human immunodeficiency virus 1 (HIV-1) infection.MethodsAntibodies were detected by WB test,CD4+T cells by flow cytometer.ResultsAmong 208 cases,193 male cases accounted for 92.79%,and 163 cases of men who have sex with men (MSM) accounted for 78.37%.The antibodies against viral protein gp160,gp120,gp41,p66,p51,p31,p24 showed high positive rates,and no significant different was detected across different clinical stages.The positive rate of p55 antibody,encoding bygaggene,was significantly higher in those HIV positive individuals infected via homosexual compared with HIV-1 positive individuals through heterosexual contact (P<0.05).The 5 common WB bands patterns were as following:all bands①,missing p55②,missing p39③,missing p55+p39④ and missing p39+

p55+p17⑤.Primary stage infection group showed the highest appearance rate of all bands (44.2%).ConclusionsThe WB bands patterns and CD4+T lymphocyte counts can help to judge immune status,determine disease stages and monitor disease progression.We should take effective measures for the MSM and floating population.

HIV-1 antibody; WB band pattern; CD4+T lymphocyte; clinical stage

R115,R183

A

10.3969/j.issn.1672-8467.2017.05.020

2017-04-05;編輯:段佳)

上海市閔行區(qū)自然科學(xué)研究課題(2015MHZ022);上海市研究生教育創(chuàng)新計(jì)劃

△Corresponding author E-mail:hzzhu@fudan.edu.cn

*ThisworkwassupportedbytheNaturalScienceFoundationofMinhangDistrict,Shanghai(2015MHZ022)andShanghaiInnovationPlanforGraduateEducation.